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Simultaneous extraction of DNA and RNA from Escherichia coli BL 21 based on silica-coated magnetic nanoparticles

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Science China Chemistry 2015年第11期58卷 1774-1778页

作者： Jiuhai Wang Zeeshan Ali Nianyue Wang Wenbiao Liang Hongna Liu Fu Li Haowen Yang Lei He libo nie Nongyue He Zhiyang Li State Key Laboratory of Bioelectronics School of Biological Science and Medical Engineering Southeast University Clinical Laboratory the Second Hospital of Nanjing Jiangsu Province Blood Center Economical Forest Cultivation and Utilization of 2011 Collaborative Innovation Center in Hunan Province Hunan Key Laboratory of Green Packaging and Application of Biological Nanotechnology Hunan University of Technology Department of Laboratory Medicine the Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University

The extraction of nucleic acid is recognized as one of the most essential steps in molecular biology for initiating other downstream applications such as sequencing, amplification, hybridization, and cloning. Many commercial kits and methods are currently available that allow the extraction of only one type of nucleic acids-DNA or RNA. However, in parallel clinical detection of several diseases, a method for simultaneous extraction of both DNA and RNA from the same source is needed in such cases. In this study, a method for simultaneous extraction of DNA and RNA from bacteria based on magnetic nanoparticles(MNPs) was described. Lysis buffers were prepared to help the nucleic acid released and adsorbed to MNPs. Then, two washing buffers were used to remove the contamination of proteins and carbohydrates. The nucleic acids were finally eluted by Deoxyribonuclease(DNase) and Ribonucleases(RNase) free water. Different factors which might affect the purification of the nucleic acid were investigated, and the quantity and quality parameters of the nucleic acid were also recorded. The DNA and RNA extracted from bacteria were then respectively subjected to polymerase chain reaction(PCR) and reverse transcription PCR(RT-PCR) to further confirm its quality. The results indicated that our method can be successfully used to simultaneously extract DNA and RNA from bacteria.

关键词： nucleic acids simultaneous extraction magnetic nanoparticles (MNPs) bacteria

不同提取及扩增方法检测大肠杆菌DNA的性能比较

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湘潭大学学报（自然科学版） 2024年第2期46卷 110-122页

作者：余小妹钱纯亘聂立波汤建新吴力强黄钊易辉湖南工业大学生命科学与化学学院生物医用纳米材料与器件湖南省重点实验室湖南株洲412007 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司广东深圳518116 株洲市人民医院湖南株洲412008

大肠杆菌O157∶H7是一种危害性极大的食源性致病菌,为实现大肠杆菌O157∶H7的快速检测,分别采用碱加热裂解法、TritonX-100加热裂解法、溶菌酶加十二烷基硫酸钠(SDS)裂解法、SDS加蛋白酶K裂解法及热裂解法5种方法提取大肠杆菌O157∶H7... 详细信息

大肠杆菌O157∶H7是一种危害性极大的食源性致病菌,为实现大肠杆菌O157∶H7的快速检测,分别采用碱加热裂解法、TritonX-100加热裂解法、溶菌酶加十二烷基硫酸钠(SDS)裂解法、SDS加蛋白酶K裂解法及热裂解法5种方法提取大肠杆菌O157∶H7基因组DNA,考察了环介导等温扩增(LAMP)和实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)扩增法对所提取DNA的检测效果,并建立最佳的核酸快速提取样品预处理方法.结果表明,以碱加热裂解预处理提取的大肠杆菌O157∶H7基因组DNA为检测样本时,LAMP扩增及qPCR扩增法的检测性能最好,检出限达到10^(1)CFU/mL,与常规商品化试剂盒提取所得菌液基因组DNA的检测性能一致.所建立的碱加热裂解样品预处理方法耗时短、成本低,无须进行复杂的核酸提取,操作简单,可用于大肠杆菌O157∶H7的快速检测.

关键词：大肠杆菌O157∶H7 LAMP qPCR 碱加热裂解法核酸提取

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磁性纳米颗粒在生物医学领域中的应用

化学通报 2009年第6期72卷 489-494页

作者：王秀利聂立波湖南工业大学绿色包装与生物纳米技术应用省重点实验室株洲412008

磁性纳米颗粒作为一种新型纳米材料,在许多领域,特别是在生物医药、生物工程等方面具有广阔的应用前景。本文着重论述了近年来磁性纳米颗粒在生物分离、靶向给药、热疗以及磁共振成像对比剂等方面的应用,并对其应用前景进行了展望。

关键词：磁性纳米颗粒磁分离靶向给药热疗磁共振成像

Determination of trace amount of antimony (Ⅲ) by adsorption voltammetry on carbon paste electrode

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Journal of Southeast University(English Edition) 2004年第2期20卷 221-225页

作者：郭会时肖鹏峰聂立波李益恒何农跃东南大学吴健雄实验室南京210096 湘潭大学化学系湘潭411105

A sensitive method is described for the determination of trace antimony based on the antimony-bromopyrogallol red (BPR) adsorption at a carbon paste electrode (CPE). Three steps were involved in the overall analysis: preconcentration,reduction and stripping. Optimal conditions were found to be an electrode containing 25% paraffin oil and 75% high purity graphite powder as working electrode;a 0.10 mol/L HCl solution containing 40 μmol/L BPR as accumulation medium;a 0.20 mol/L HCl solution as reduction and stripping electrolyte;accumulation time,150 s;reduction potential and time,-0.50 V,60 s;scan range from -0.50 to 0.20 V. Interferences by other ions were studied as well. The detection limit was found to be 0.5 nmol/L for 150 s preconcentration. The linear range was from 1.0 nmol/L to 0.50 μmol/L. Application of the proposed method to the determination of antimony in water and human hair samples gave good results.

关键词： antimony bromopyrogallol red carbon paste electrode adsorptive voltammetry

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量子点制备与表面修饰

化学通报 2013年第9期76卷 822-827页

作者：刘富华麻鹏聂立波湖南工业大学绿色包装与生物纳米技术应用重点实验室株洲412007

量子点具有荧光强度高、光化学稳定性高、可反复多次激发等优点,在生物医学以及新能源等方面有广阔的应用前景。本文介绍了量子点的制备与表面修饰,制备方法主要包括沉淀法、溶胶-凝胶法、微乳液法、水热法等,表面修饰方法主要有双功能... 详细信息

量子点具有荧光强度高、光化学稳定性高、可反复多次激发等优点,在生物医学以及新能源等方面有广阔的应用前景。本文介绍了量子点的制备与表面修饰,制备方法主要包括沉淀法、溶胶-凝胶法、微乳液法、水热法等,表面修饰方法主要有双功能团配体交换、硅烷化、聚合物包埋等。

关键词：量子点制备表面修饰荧光

磁性Fe_3O_4/mSiO_2复合微球的研究进展

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中国生物医学工程学报 2017年第3期36卷 348-353页

作者：聂立波杨鸿成姜鹏飞湖南工业大学绿色包装与生物纳米技术应用省重点实验室湖南株洲412008

磁性Fe_3O_4/介孔二氧化硅(Fe_3O_4/mSiO_2)复合微球兼具Fe_3O_4纳米粒子的磁性与介孔二氧化硅的空间负载能力,在生物医学领域有着广泛的应用。主要介绍核壳型、空腔型和响铃型复合微球的合成方法,以及Fe_3O_4/mSiO_2复合微球在靶向载... 详细信息

磁性Fe_3O_4/介孔二氧化硅(Fe_3O_4/mSiO_2)复合微球兼具Fe_3O_4纳米粒子的磁性与介孔二氧化硅的空间负载能力,在生物医学领域有着广泛的应用。主要介绍核壳型、空腔型和响铃型复合微球的合成方法,以及Fe_3O_4/mSiO_2复合微球在靶向载药系统、核磁成像系统、磁热疗载药系统以及生物分离等方面的应用。

关键词：四氧化三铁纳米颗粒磁性介孔二氧化硅

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光学分析方法在DNA检测中的应用

化学通报 2007年第8期70卷 571-576页

作者：聂立波张黎明侯清麟贺全国湖南工业大学绿色包装与生物纳米技术应用湖南省重点实验室株洲412008 中山大学化学与化学工程学院广州510275

介绍了用于DNA检测的各种光学分析方法及其原理,主要包括荧光法、化学发光法、光纤传感法、比色法、表面等离子共振法以及其他光学衍生方法。

关键词：荧光化学发光光纤传感比色表面等离子共振

BSPDA-Eu配合物的合成及其时间分辨荧光性质

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材料研究学报 2006年第2期20卷 208-212页

作者：贺全国李松聂立波陈洪汤建新何农跃株洲工学院包装印刷学院株洲412008 中南林学院生命学院

制备了一种含巯基的时间分辨荧光配体 BSPDA(4,7-二巯基苯基-1,10-菲罗啉-2,9-二羧酸)及其铕(Ⅲ)配合物,研究了铕配合物的荧光性质．结果表明,该巯基配体可与铕(Ⅲ)形成1：1和2：1具有时间分辨荧光特性的配合物,能发射出铕的特征谱线,其... 详细信息

制备了一种含巯基的时间分辨荧光配体 BSPDA(4,7-二巯基苯基-1,10-菲罗啉-2,9-二羧酸)及其铕(Ⅲ)配合物,研究了铕配合物的荧光性质．结果表明,该巯基配体可与铕(Ⅲ)形成1：1和2：1具有时间分辨荧光特性的配合物,能发射出铕的特征谱线,其1：1与2：1的配合物具有数百微秒以上的荧光寿命,在相关的发射特征峰位处后者的寿命稍长于前者．这表明,在后者铕配合物中存在更强的配位作用和更有效配体对中心离子(即 BSPDA 到 Eu^(3+))能量传递．

关键词：无机非金属材料 BSPDA巯基化时间分辨荧光荧光寿命铕配合物

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枯草芽孢杆菌纤维素酶基因整合载体的构建

食品科学 2017年第10期38卷 31-36页

作者：聂利波王占彬史敦胜宋洋洋李旺河南科技大学动物科技学院河南洛阳471003

目的:以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为宿主,构建纤维素酶基因整合表达载体,获得能够表达纤维素酶并且降解纤维素的工程菌。方法:通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)从*** LN基因组中克隆同源片段M1、M2基因片段,... 详细信息

目的:以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为宿主,构建纤维素酶基因整合表达载体,获得能够表达纤维素酶并且降解纤维素的工程菌。方法:通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)从*** LN基因组中克隆同源片段M1、M2基因片段,以质粒pGEM-T为载体,将同源片段M1、M2、启动子P43和葡萄糖苷酶基因CelKg连接在一起构建整合载体pGEM-Kmpgmt,并采用双交换同源重组的方式将其转化进入*** LN基因组中。结果:通过PCR和双酶切验证整合载体构建完成,并成功整合到野生型*** LN中,获得重组菌*** Kpg。刚果红染色结果显示重组菌对羧甲基纤维素钠有降解作用。改良培养基37℃条件下摇瓶培养,重组菌*** Kpg生长至18 h时上清液中纤维素酶活力比野生型*** LN提高了115%。

关键词：同源重组纤维素酶基因枯草芽孢杆菌