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Vaccination of Goats with 31 kDa and 32 kDa Schistosoma japonicum Antigens by DNA Priming and Protein Boosting

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Cellular & Molecular Immunology 2007年第2期4卷 153-156页

作者： lianfei tang Zhijun Zhou Yuxiao Chen Yonghui Luo Linqian Wang Liyu Chen Fushen Huang Xianfang Zeng Xinyuan Yi Hunan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of the People＇s Republic of China Changsha 410007 Hunan China Department of Parasitology Xiangya School of Medicine Central South University Changsha 410078 Hunan China Department of Laboratory Animal Xiangya School of Medicine Central South University Changsha 410078 Hunan China College of Animal Science Hunan Agriculture University Changsha 410128 Hunan China

Two Schistosomajaponicum vaccine candidate antigens Sj 31 and Sj 32, which have shown particular promise to induce protective immunity in mice, were used to immunize goats by using a DNA priming-protein boosting strategy in present work. DNA vaccine formulations of the two antigens （VRSj31 and VRSj32） were produced and injected intramuscularly twice at a 2-week interval and then recombinant proteins （rSj31 and rSj32） together with Freund Complete Adjuvant （FCA） were used to boost the goats. The experiment was repeated in different batche cercariae. A strong anamnestic antibody response was induced after boost. A significant reduction of liver egg counts and miracidial hatching was showed in both experiments. Significant protections against challenge infection were elicited with 31.6% of percentage reduction for worm recovery in the second experiment and 20.9% in the first experiment, respectively.

关键词： subunit vaccine DNA vaccine Schistosoma japonicum

以萘酰亚胺衍生物基荧光高分子为载体和指示剂的相分离免疫分析方法

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化学学报 2009年第2期67卷 162-166页

作者：龚福春唐连飞郑兴良曹忠谭淑珍谭亚非长沙理工大学化学与生物工程学院长沙410076 湖南省出入境检验检疫局长沙410004

以4-甲氧基-N-(2-N',N'-二甲基氨基乙基-N'-烯丙基)萘二甲酰亚胺氯化铵(DMNAA)为荧光单体,合成了一种pH敏感荧光高分子聚N-异丙基丙烯酰胺-4-甲氧基-N-(2-N',N'-二甲基氨基乙基-N'-烯丙基)萘二甲酰亚胺氯化铵-N,N-二甲基氨丙基甲基丙烯... 详细信息

以4-甲氧基-N-(2-N',N'-二甲基氨基乙基-N'-烯丙基)萘二甲酰亚胺氯化铵(DMNAA)为荧光单体,合成了一种pH敏感荧光高分子聚N-异丙基丙烯酰胺-4-甲氧基-N-(2-N',N'-二甲基氨基乙基-N'-烯丙基)萘二甲酰亚胺氯化铵-N,N-二甲基氨丙基甲基丙烯酰胺[P(NIP-DMAPM-DMNAA)].采用共聚法将日本血吸虫抗原(SjAg)固定在P(NIP-DMAPM-DMNAA)上,制备P(NIP-DMAPM-DMNAA)-SjAg连接物,与日本血吸虫抗体(待测,SjAb)发生免疫反应后,调节pH值,使荧光高分子相变分离高分子-免疫组分连接物,最后,利用蛋白A对抗体的亲和性捕获P(NIP-DMAPM-DMNAA)-SjAg-SjAb,通过测定高分子自身的荧光信号来定量SjAb.该新型高分子具有良好的荧光特性,对pH响应快速,37℃下相转变pH值为7.2,分离免疫复合物时造成的损害低.与传统相分离免疫分析比较,新方法通过高分子相变分离和蛋白A捕获双重分离作用,消除了非特异性组分和未反应的特异性免疫成分等的干扰;利用高分子自身的荧光信号检测,无须另外的标记物,大大提高了免疫分析的简便性.以日本血吸虫抗体为分析对象,测得线性范围为1～1500ng/mL,抗体检出限为1.3ng/mL,相对标准偏差为3.6%(n=10),结果令人满意.

关键词： pH敏感荧光高分子高分子标记相分离免疫分析日本血吸虫

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检测阴沟肠杆菌的数字PCR定量方法建立

畜牧与兽医 2016年第3期48卷 1-4页

作者：禹思宇唐连飞陈雪琴周慧平梁斌湖南出入境检验检疫局检验检疫技术中心湖南长沙410004 湖南省桂阳县畜牧兽医水产局湖南郴州424400

以阴沟肠杆菌Amp C酶基因为靶基因,建立了可对其准确定量的数字PCR(dd PCR)方法。对dd PCR反应中的探针浓度进行了优化,并将该方法与实时荧光PCR方法做对比来检测阴沟肠杆菌。结果表明,最终确定dd PCR反应中的最佳探针浓度为400 nmol/L... 详细信息

以阴沟肠杆菌Amp C酶基因为靶基因,建立了可对其准确定量的数字PCR(dd PCR)方法。对dd PCR反应中的探针浓度进行了优化,并将该方法与实时荧光PCR方法做对比来检测阴沟肠杆菌。结果表明,最终确定dd PCR反应中的最佳探针浓度为400 nmol/L,该方法检测阴沟肠杆菌的最低DNA拷贝数为8.9拷贝/μL,且重复性良好。表明数字PCR方法灵敏度高、特异性好,可用于阴沟肠杆菌的鉴定。

关键词：阴沟肠杆菌数字PCR(ddPCR) 实时定量PCR

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一起大闸蟹重金属镉污染的溯源分析研究

渔业研究 2017年第5期39卷 392-396页

作者：侯义宏唐连飞熊波刘利荣常德出入境检验检疫局湖南常德415000 湖南出入境检验检疫局技术中心湖南长沙410004 荆门市动物疫病预防控制中心湖北荆门448000

在常德市进行出口食用性水生动物例行安全风险监控时发现,辖区一批大阐蟹存在重金属镉(Cd)含量超标现象,抽检的4批样品中有3批超过0.5 mg/kg(国家标准:大闸蟹Cd限量为0.5 mg/kg)。为此,对大闸蟹养殖基地的养殖水质、底质以及投喂饵料中... 详细信息

在常德市进行出口食用性水生动物例行安全风险监控时发现,辖区一批大阐蟹存在重金属镉(Cd)含量超标现象,抽检的4批样品中有3批超过0.5 mg/kg(国家标准:大闸蟹Cd限量为0.5 mg/kg)。为此,对大闸蟹养殖基地的养殖水质、底质以及投喂饵料中的重金属Cd展开调查分析和研究。抽采大闸蟹养殖水质、底泥、饵料(螺狮、小杂鱼)等25份样品进行Cd含量检测分析。结果显示:底泥Cd含量高于0.5 mg/kg,螺蛳Cd含量高于0.5mg/kg,水中Cd含量符合渔业水质标准,小杂鱼Cd含量较低。结果表明该养殖基地底泥已受到一定程度的重金属Cd污染,大阐蟹Cd超标是由该养殖基地底泥Cd含量超标和投喂饵料螺蛳中Cd含量较高引起,所投螺蛳体内Cd含量较高也是由该水域底泥Cd含量较高所致。

关键词：大闸蟹镉污染分析研究

MALDI-TOF-MS鉴定水稻细菌性叶鞘褐腐病菌的方法研究

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植物检疫 2014年第6期28卷 54-58页

作者：黄迎波周慧平莫瑾谭建锡彭梓朱金国唐连飞湖南出入境检验检疫局湖南长沙410004

利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术对3株水稻细菌性叶鞘褐腐病菌(Pseudomonas fuscovaginae)标准菌株进行蛋白质指纹图谱分析,将不同培养基、不同培养时间和不同样品处理方法等条件下所收集到的质谱峰进行比较,... 详细信息

利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术对3株水稻细菌性叶鞘褐腐病菌(Pseudomonas fuscovaginae)标准菌株进行蛋白质指纹图谱分析,将不同培养基、不同培养时间和不同样品处理方法等条件下所收集到的质谱峰进行比较,筛选出最佳实验方法,收集20张参考图谱与水稻常见病原细菌质谱峰进行比较,建立该病菌的蛋白质指纹图谱。结果显示用金氏B培养基分离纯化后经提取处理法进行MALDI-TOF-MS分析为最佳的实验方法。该方法对检测与鉴定水稻细菌性叶鞘褐腐病菌具有较高的灵敏度和重复性,且分析过程简单快速,有一定的应用价值。

关键词：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱蛋白质指纹图谱水稻细菌性叶鞘褐腐病菌鉴定

湖南省4株猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因组序列测定与分析

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中国动物检疫 2020年第2期37卷 66-70页

作者：胡忆文唐连飞谭建锡禹思宇长沙海关技术中心

为了解湖南省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异情况,对湖南省2016-2019年分离的4株PRRSV(Hunan/2016/075、Hunan/2017/085、Hunan/2018/123、Hunan/2019/055)进行全基因组测序,对其ORF5、NSP2基因以及全基因组核苷酸序列进行分析。结果显示,分离的4株病毒株均为美洲型,全基因组同源性为83.1%~98.7%,其中3株属于高致病型,1株为属于类NADC30型。Hunan/2016/075、Hunan/2017/085毒株全长序列与谱系5中亚系5.1的代表性毒株BJ-4亲缘关系相近,聚为一簇;Hunan/2018/123毒株与谱系8.7中的tjnh1501毒株聚为一簇;Hunan/2019/055毒株独立成一簇,与谱系1亲缘关系相近。本研究掌握了湖南省PRRSV的遗传变异情况,从而为制定有效的防控策略提供了依据。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 NSP2基因序列分析

分子信标荧光定量PCR检测H3N2亚型猪流感病毒方法的建立

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中国动物检疫 2015年第7期32卷 67-71,76页

作者：禹思宇周宇唐连飞孟芳袁晓芬梁斌湖南出入境检验检疫局检验检疫技术中心湖南长沙410004 惠州出入境检验检疫局广东惠州516006

利用新型荧光探针—分子信标,建立一种检测猪流感病毒的新方法。根据H3N2亚型猪流感病毒(SIV)的HA和NA基因的保守基因序列,分别设计并合成了特异性引物和分子信标探针,利用实时荧光定量PCR技术检测H3N2亚型SIV。构建重组质粒p SK-H3和p ... 详细信息

利用新型荧光探针—分子信标,建立一种检测猪流感病毒的新方法。根据H3N2亚型猪流感病毒(SIV)的HA和NA基因的保守基因序列,分别设计并合成了特异性引物和分子信标探针,利用实时荧光定量PCR技术检测H3N2亚型SIV。构建重组质粒p SK-H3和p SK-N2并绘制标准曲线。结果显示,该检测方法的敏感性达到102拷贝/μL;与其它主要相关病毒均不发生交叉反应,批内和批间试验的重复性变异系数(CV)均小于3%,表明该方法灵敏度强、特异性好。此方法的建立将为流感病毒H3N2亚型定型检测提供一种快速有效的方法。

关键词：猪流感病毒 H3N2亚型分子信标探针实时荧光定量PCR

H1亚型猪流感病毒微滴数字RT-PCR定量检测方法的建立

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中国动物检疫 2019年第11期36卷 77-82页

作者：谭建锡禹思宇唐连飞胡忆文白雪侯义宏长沙海关技术中心湖南长沙410004 岳阳海关湖南岳阳414000 常德海关湖南常德415000

本研究针对H1亚型猪流感病毒(swineinfluenzavirus,SIV)HA基因保守序列设计引物和探针,通过反应条件优化,建立了一种快速、准确检测H1亚型SIV的微滴数字RT-PCR定量方法。该方法特异性强,除H1亚型SIV外,H3、H5、H7亚型SIV以及猪瘟病毒、... 详细信息

本研究针对H1亚型猪流感病毒(swineinfluenzavirus,SIV)HA基因保守序列设计引物和探针,通过反应条件优化,建立了一种快速、准确检测H1亚型SIV的微滴数字RT-PCR定量方法。该方法特异性强,除H1亚型SIV外,H3、H5、H7亚型SIV以及猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等检测均为阴性;敏感性高,最低可检测4.7拷贝/μL;重复性好,对5个不同稀释度的H1亚型SIVRNA进行3次重复试验,每个稀释度的变异系数均小于5%。利用该方法对湖南省规模化养殖场收集的30份猪鼻拭子样品进行检测,发现与荧光RT-PCR检测结果一致。试验表明,该方法快速、准确、灵敏,可为H1亚型SIV的快速筛查及流行病学研究提供可靠的技术保障。

关键词： H1亚型猪流感病毒微滴数字RT-PCR 绝对定量检测方法

非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

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中国动物检疫 2010年第11期27卷 28-30页

作者：黄萍肖家勇欧阳振宇陈盼白雪朱中武孟芳吴愈柏唐连飞湖南出入境检验检疫局检验检疫技术中心湖南长沙410004 湖南出入境检验检疫局动物检疫处湖南长沙410004

根据GenBank公布的非洲猪瘟病毒(ASFV)P72基因序列,设计了一对特异性引物和探针,使用含有选定检测序列的重组质粒标准品绘制标准曲线,建立了非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法。结果表明:该方法的敏感性可达100个拷贝值,具有良好的... 详细信息

根据GenBank公布的非洲猪瘟病毒(ASFV)P72基因序列,设计了一对特异性引物和探针,使用含有选定检测序列的重组质粒标准品绘制标准曲线,建立了非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法。结果表明:该方法的敏感性可达100个拷贝值,具有良好的敏感性和重复性。

关键词：非洲猪瘟病毒 P72基因实时荧光定量PCR 质粒