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Identification of a chitinase from the hepatopancreas of Chinese black sleeper(Bostrychus sinensis)

Acta Oceanologica Sinica 2021年第6期40卷 50-60页

作者： Yulei Chen Zhipeng Tao Minghui Zhang lechang sun Guangming Liu Minjie Cao College of Food and Biological Engineering Jimei UniversityXiamen 361021China Fujian Collaborative Innovation Center for Exploitation and Utilization of Marine Biological Resources Xiamen 361102China

Chinese black sleeper(Bostrychus sinensis)is a fish that lives both in seawater and freshwater,feeds on crustaceans,aquatic insects and occasionally shellfish.The existence of digestive enzyme in viscera to act on chitinous exoskeleton of the prey is of interest.In this study,a chitinase was purified to homogeneity using ammonium sulfate precipitation,DEAE-Sephacel ion exchange,Sephacryl S-200 HR and Superdex 200 gel filtration columns.The purified protein presents a molecular mass of 58 kDa as determined by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis(SDS-PAGE)and results in a single band on native PAGE.According to peptide mass fingerprinting,two peptides containing a total of 20 amino acid residues,were 95%identical to a chitinase from yellow perch(Perca flavescens)and 100%identical to the chitinase from greater amberjack(Seriola dumerili).The purified chitinase showed optimum activity at pH 6.0,and was stable at acidic conditions and temperature below 55℃.The enzymatic activity was quite stable in the presence of NaCl,even at 1 mol/L.The chitinase was capable of degrading chitosan into low molecular mass chitooligosaccharides(COS)with sizes in a range of 200-700 Da,and the circular dichroism profile of the COS greatly differed from native chitosan.Full-length cDNA encoding the present chitinase was cloned and the transcript levels of chitinase in various tissues were determined by quantitative real-time PCR.The results showed that the transcript level of chitinase was highest in esophagus and hepatopancreas.

关键词： Bostrychus sinensis chitinase purification characterization molecular cloning chitosan

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不同干燥方式对低盐腌制鲍鱼复水及品质特性的影响

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食品工业科技 2024年第10期45卷 57-65页

作者：王舒娴杜瀚林端权翁凌曹敏杰孙乐常集美大学海洋食品与生物工程学院福建厦门361021 爱尔兰农业部农业与食品发展局Teagasc食品研究中心爱尔兰科克999014 水产品深加工技术国家地方联合工程中心福建厦门361021 海洋食品精深加工关键技术省部共建协同创新中心大连工业大学辽宁大连116034

为研究不同干燥方式对低盐腌制鲍鱼复水品质的影响,本研究采用真空冷冻干燥、冷风干燥与热风干燥对其进行干燥处理,研究其复水过程的质量体积和复水率,并通过低场核磁共振(low field nuclear magnetic resonance,LF-NMR)和磁共振成像(ma... 详细信息

为研究不同干燥方式对低盐腌制鲍鱼复水品质的影响,本研究采用真空冷冻干燥、冷风干燥与热风干燥对其进行干燥处理,研究其复水过程的质量体积和复水率,并通过低场核磁共振(low field nuclear magnetic resonance,LF-NMR)和磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)研究复水过程的水分分布以及复水后的色差、质构、组织形态、游离氨基酸等变化情况。结果表明,在72 h时真空冷冻干鲍的复水率为278.73%,显著高于冷风干鲍和热风干鲍的复水率(P<0.05)。由LF-NMR和MRI结果分析得出,不易流动水和自由水含量是三种干鲍水分含量增加的主要因素。真空冷冻干鲍、冷风干燥和热风干鲍分别在72、48和24 h时复水完成。不同的干燥方式影响复水后的质构,结果显示,三种干燥方式的鲍鱼样品硬度与咀嚼性均有显著差异(P<0.05),真空冷冻干燥鲍鱼复水后硬度和咀嚼性最低,分别为954.01和708.59 g;热风干燥鲍鱼复水后硬度与咀嚼性最高,分别为1230.14和920.02 g。组织学染色与扫描电镜结果显示,真空冷冻干鲍的肌肉组织为较疏松的多孔结构;冷风干鲍和热风干鲍的组织为较细长和致密的结构。综上,真空冷冻干燥鲍鱼的复水率最高,硬度和咀嚼性最低,口感最好,但滋味不及热风干燥鲍鱼。本研究结果可为了解不同干燥方法对低盐腌制鲍鱼产品品质的影响提供理论参考。

关键词：鲍鱼复水品质特性干燥方式

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Successive digestion of tilapia collagen by serine proteinase and proline specific endopeptidase to produce novel angiotensin l-converting enzyme inhibitory peptides

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Marine Life Science & Technology 2020年第3期2卷 268-278页

作者： Xin Hua lechang sun Chan Zhong Qiang Wu Panpan Xiao Asami Yoshida Guangming Liu Minjie Cao College of Food and Biological Engineering Jimei UniversityXiamen 361021China Collaborative Innovation Center of Marine Food Deep Processing Dalian Polytechnic UniversityDalian 116034China Department of Biological and Chemical Engineering Shaoyang UniversityShaoyang 422000China Faculty of Fisheries Nagasaki UniversityNagasaki 852-8521Japan

Serine proteinase,purified from the hepatopancreas of Pacific white shrimp(Litopenaeus vannamei), was used to hydrolyze acid solubilized collagen(ASC)isolated from Nile tilapia(Oreochromis sp.)skin to produce angiotensin I-converting enzyme(ACE)inhibitory peptides(ACEIPs).A series of column chromatography assays were used to separate the ACEIPs.A peptide,NPARTCR,was isolated as it exhibited high ACE inhibition potential.Further digestion of this peptide by a proline specific endopeptidase(PSEP),produced a pentapeptide ARTCR with ACE inhibitory activity(IC_(50))of 77.0 pmol/L.Both NPARTCR and ARTCR inhibited ACE in a non-competitive manner.An in vivo study in rats demonstrated that ARTCR has ACE inhibitory activity via lowering systolic blood pressure in spontaneously hypertensive rats(SHRs).These results suggest that processing by-products from shrimp and tilapia are ideal raw materials for the production of serine proteinase and collagen,respectively.Serine proteinase and collagen are both ideal raw materials that can be used to derive ACE inhibitory active peptides against hypertension.

关键词： Serine proteinase Purification Collagen ACE inhibitory peptides Hypertension Lowering blood pressure

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蓝圆鲹分离蛋白酶解产物的制备及其抗大米淀粉老化特性

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水产学报 2024年第4期48卷 376-390页

作者：孙乐常孙小舒林端权陈玉磊翁凌缪松曹敏杰集美大学海洋食品与生物工程学院集美大学水产品深加工技术国家地方联合工程研究中心大连工业大学海洋食品精深加工关键技术省部共建协同创新中心爱尔兰农业部农业与食品发展局Teagasc食品研究中心

为了进一步拓展海洋鱼类蛋白在食品中的应用，以蓝圆鲹分离蛋白为原料，利用酶解改性得到溶解性良好的蓝圆鲹分离蛋白酶解物(BPIH)，并研究其对大米淀粉(RS)短期老化的抑制作用。通过响应面法优化酶解改性工艺制备BPIH，并分别按RS的3%... 详细信息

为了进一步拓展海洋鱼类蛋白在食品中的应用，以蓝圆鲹分离蛋白为原料，利用酶解改性得到溶解性良好的蓝圆鲹分离蛋白酶解物(BPIH)，并研究其对大米淀粉(RS)短期老化的抑制作用。通过响应面法优化酶解改性工艺制备BPIH，并分别按RS的3%、6%、9%(质量百分比)进行添加。通过测定RS的凝沉性、动态黏弹性、热学特性以及微观结构分析评价BPIH的抗淀粉老化活性。结果显示，响应面法确定的最佳条件：酶底比5 000∶1 (U/g)、酶解时间3 h、料液比1.00∶3.81、酶解温度46.36℃、酶解pH 6.30，氮溶指数(NSI)实际值为85.41%±0.82%，与预测值86.37%接近。该酶解条件下BPIH水解度达到21.62%。BPIH中小于1 000 u的肽占79.94%，主要为小分子低聚寡肽。加入BPIH可以减弱RS的凝沉现象，降低RS在4℃保存过程中的储能模量(G')，显著降低老化后RS的峰值温度(Tp)和焓值(ΔHr)；加入BPIH的大米淀粉，老化后微观结构有较大孔洞，提升了淀粉糊化后保留内部水分的能力。研究表明，BPIH能够抑制RS在4℃保存期间凝胶网络和微晶结构的形成，同时可能限制了淀粉分子间的聚集，抑制或延缓RS的短期老化。本研究为蓝圆鲹分离蛋白酶解物在食品蛋白配料中的应用提供理论参考。

关键词：蓝圆鲹分离蛋白酶解淀粉短期老化

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Aminopeptidase Play a Critical Role in the Accumulation of Free Amino Acids in Abalone(Haliotis discus hannai)During Cold Storage

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Journal of Ocean University of China 2023年第4期22卷 1049-1058页

作者： REN Qiuying WANG Yujia sun Sha ZHANG Lingjing sun lechang WENG Ling LIU Guangming CAO Minjie College of Marine Food and Biological Engineering Jimei UniversityXiamen 361021China Collaborative Innovation Center for Marine Food Deep Processing Dalian Polytechnic University Dalian 116034China

Abalones reveal unique taste after processing,mainly because of their abundant free amino acids(FAAs)and nucleotides.FAAs are nutrition components that can contribute to the unique taste.However,which factor(s)is responsible for the accumulation of FAAs still need further studies.To analyze the production of FAAs,we studied the variation of FAAs during 7 days of storage at 4℃.The content of taste-active amino acids,including Asp,Glu,Ser,and Gly increased by 1.7-fold,2.0-fold,3.0-fold,and 8.4-fold,respectively.The relative activity of cathepsin L and aminopeptidase(AP)increased significantly during the cold storage period.To identify AP in abalone and its function in mediating the production of FAAs,an aminopeptidase with wide substrate specificity was then extracted and purified from abalone muscle to homogeneity.Purified AP with a molecular mass of 100 kDa exhibited its maximum activity at 30℃,pH 7.5,and was further confirmed by LC-MS.Bestatin specifically inhibited the activity of AP,and metalloproteinase inhibitors EDTA,EGTA and 1,10-phenanthroline also suppressed its activity to different degrees.Based on its highest activity to substrate Leu-MCA and its peptide sequences,the purified enzyme was identified as leucine aminopeptidase(LAP).Our present study indicated the essential role of AP for FAAs accumulation during cold storage of abalone.

关键词： abalone aminopeptidase purification characterization taste endogenous protease texture

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葡萄糖糖基化对蓝圆鲹分离蛋白限制性酶解产物结构及功能特性的影响

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南方水产科学 2024年第3期20卷 152-163页

作者：吴雨虹林端权刘康陈玉磊张凌晶何文雄孙乐常集美大学海洋食品与生物工程学院福建厦门361021 水产品深加工技术国家地方联合工程研究中心福建厦门361021 海洋食品精深加工关键技术省部共建协同创新中心辽宁大连116034 厦门爱逸零食研究所有限公司福建厦门361021

为拓展蓝圆鲹(Decapterus maruadsi)分离蛋白的应用范围,促进其高值化利用,以蓝圆鲹分离蛋白限制性酶解产物(Brown-striped mackerel scad protein isolate limited enzymatic hydrolysate,BPILH)为原料,采用葡萄糖对其进行糖基化反应,考察不同反应时间对BPILH结构与功能特性的影响。结果表明,葡萄糖与BPILH的糖基化反应程度与反应时间和色度呈正相关。结构表征结果显示,糖基化反应使α螺旋和无规则卷曲含量减少,并降低糖基化产物的内源荧光强度。此外,长时间的高温使蛋白质分子内部的疏水基团暴露,使其表面疏水性增加。溶解度在酸性、碱性条件下随着反应时间的延长呈现先升高后降低的趋势,其中,第8小时糖基化产物的溶解度在pH 10时达到最高值(90.49±0.01)%。乳化性随着反应时间的延长而增加,与第0小时相比,第12小时糖基化产物的乳化性提升了24.28%,乳化稳定性和持油性均随着反应时间的延长呈现先增加后减少的趋势,在第1小时乳化稳定性达到最高值(17.51±0.13)min,在第2小时持油性达到最高值(2.19±0.21)g·g^(-1)。因此,反应时间过长会对功能特性产生一定的负面影响,研究结果可为蓝圆鲹分离蛋白在食品配料蛋白中的应用提供一定的理论参考。

关键词：蓝圆鲹分离蛋白限制性酶解糖基化结构特性功能特性

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透明质酸对南美白对虾虾糜理化性质和凝胶特性的影响

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食品科学 2024年第12期45卷 78-89页

作者：尹开平林端权陈玉磊张凌晶何文雄翁凌曹敏杰孙乐常集美大学海洋食品与生物工程学院福建厦门361021 水产品深加工技术国家地方联合工程研究中心福建厦门361021 海洋食品精深加工关键技术省部共建协同创新中心辽宁大连116034 厦门爱逸零食研究所有限公司福建厦门361021

以南美白对虾(Litopenaeus vannamei)虾糜为研究对象,考察不同添加量(0.1%、0.3%、0.5%、0.8%和1.0%,以虾肉的质量计)透明质酸(hyaluronic acid,HA)对虾糜凝胶特性和理化性质的影响。结果显示,一定量HA能够改善虾糜凝胶的质构特性和凝... 详细信息

以南美白对虾(Litopenaeus vannamei)虾糜为研究对象,考察不同添加量(0.1%、0.3%、0.5%、0.8%和1.0%,以虾肉的质量计)透明质酸(hyaluronic acid,HA)对虾糜凝胶特性和理化性质的影响。结果显示,一定量HA能够改善虾糜凝胶的质构特性和凝胶强度,提高虾糜凝胶的亮度和白度。适量添加HA还能够促使虾糜凝胶内部自由水和不易流动水向结合水转变,改善虾糜凝胶的水结合特性,提高持水性(water-holding capacity,WHC)。流变学分析表明,一定量HA能使虾糜的储能模量提高,然而低添加量HA会对表观黏度产生不利影响。化学作用力分析表明,离子键和氢键随HA的添加分别呈现先减后增和先增后减的变化趋势,适量HA可以改善疏水相互作用,巯基氧化形成二硫键的过程则被HA抑制。HA还能与虾糜蛋白相互作用,抑制蛋白多聚体的形成,改变蛋白质的构象,促使蛋白质二级结构从α-螺旋向β结构和无规卷曲转变。添加适量HA对虾糜凝胶微观结构同样有所改善,促使虾糜凝胶形成更加均匀致密的微观结构。其中,添加0.8%HA虾糜凝胶具有最高的硬度、咀嚼性、胶着性、凝胶强度以及储能模量和最致密的微观结构,WHC较对照组也显著提高(P<0.05)。而添加0.1%HA虾糜凝胶的质构特性、凝胶强度、WHC、储能模量均较对照组有所降低,微观结构也较为松散。

关键词：南美白对虾虾糜透明质酸凝胶特性理化性质

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蓝圆鲹肝脏酯酶的分离纯化与性质分析

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食品科学 2022年第6期43卷 158-164页

作者：孙乐常文嘉欣杜瀚林怡晨刘光明曹敏杰集美大学海洋食品与生物工程学院福建厦门361021 水产品深加工技术国家地方联合工程中心福建厦门361021 大连工业大学海洋食品精深加工关键技术省部共建协同创新中心辽宁大连116034

以蓝圆鲹肝脏为对象,通过硫酸铵盐析、Q-Sepharose阴离子交换柱层析、Q-HP阴离子交换柱层析、Phenyl Fast Flow疏水柱层析和Superdex G75凝胶过滤柱层析技术分离纯化得到一种酯酶。该酶的回收率为0.69%,纯化倍数为1150倍。十二烷基硫酸... 详细信息

以蓝圆鲹肝脏为对象,通过硫酸铵盐析、Q-Sepharose阴离子交换柱层析、Q-HP阴离子交换柱层析、Phenyl Fast Flow疏水柱层析和Superdex G75凝胶过滤柱层析技术分离纯化得到一种酯酶。该酶的回收率为0.69%,纯化倍数为1150倍。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳与Superdex G75凝胶过滤柱层析结果显示纯化得到的酯酶分子质量为61.18 kDa。肽指纹图谱显示其肽段与红鳍东方鲀假定脂酰辅酶A水解酶一致。该酶的最适条件为pH 8.0、50℃;在pH 6.0~10.0、温度4~40℃条件下稳定性较高;金属离子K^(+)、Zn^(2+)、Cu^(2+)、Al^(3+)和Fe^(2+)会使酯酶活性显著下降,而Ba^(2+)、Ca^(2+)、Mn^(2+)、Co^(2+)和Mg^(2+)则会促进酶活性;该酶对甲醇、乙醇、丙酮和异丙醇等有机溶剂与盐具有较强的耐受性。底物特异性表明该酶在水溶液中偏向于水解中短链酯,对长链酯无水解活性,而在乳化体系中对长链酯也有较高的水解活性,显示出其具有酯酶与脂肪酶的双重活性。

关键词：蓝圆鲹肝脏酯酶纯化性质分析

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鲈鱼在4℃冷藏过程中的肌肉品质变化

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食品科学 2023年第1期44卷 239-245页

作者：杨汝晴陈玉磊孙乐常张凌晶刘光明曹敏杰集美大学海洋食品与生物工程学院福建厦门361021 大连工业大学海洋食品深加工协同创新中心辽宁大连116034

目的:探究4℃冷藏过程中鲈鱼肌肉品质的变化。方法:测定4℃冷藏过程中鲈鱼肌肉pH值、菌落总数、总挥发性盐基氮(total volatile base nitrogen,TVB-N)含量、K值和质构等指标,综合评价鲈鱼生理生化品质的变化,采用Masson染色和免疫组化... 详细信息

目的:探究4℃冷藏过程中鲈鱼肌肉品质的变化。方法:测定4℃冷藏过程中鲈鱼肌肉pH值、菌落总数、总挥发性盐基氮(total volatile base nitrogen,TVB-N)含量、K值和质构等指标,综合评价鲈鱼生理生化品质的变化,采用Masson染色和免疫组化分析评价组织形态学变化,利用酶解荧光肽底物测定特异性酶解胶原蛋白的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)活力变化。结果:鲈鱼在贮藏期间pH值呈先下降后升高趋势,菌落总数、TVB-N含量和K值随贮藏时间的延长而增加,并在第8天超过临界值。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析结果显示,贮藏至6 d鲈鱼肌肉蛋白组成没有明显变化,而在第8天肌球蛋白重链降解明显。Masson染色和I型胶原免疫组化分析结果显示,随贮藏时间的延长,肌内膜逐渐被降解,至第12天,肌膜I型胶原蛋白和肌纤维之间出现明显间隙。MMPs活力随贮藏时间的延长而明显增加,而鱼肉硬度不断下降。结论:鱼类冷藏期间肌肉的软化与胶原蛋白分解密切相关,而MMPs对I型胶原蛋白的降解可能是鱼死后肌肉软化的主要原因。

关键词：鲈鱼基质金属蛋白酶质构 Masson染色免疫组化

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谷氨酰胺转氨酶对荞麦分离蛋白凝胶特性的影响

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食品工业科技 2022年第24期43卷 112-122页

作者：孙乐常王瑜翁凌刘明缪松刘光明曹敏杰集美大学海洋食品与生物工程学院福建厦门361021 海洋食品精深加工关键技术省部共建协同创新中心大连工业大学辽宁大连116034 水产品深加工技术国家地方联合工程研究中心福建厦门361021 国家粮食和物资储备局科学研究院北京100037 爱尔兰农业部农业与食品发展局Teagasc食品研究中心芒斯特科克999014

以荞麦(Fagopyrum esculentum Moench.)为原料,通过碱溶酸沉法提取荞麦分离蛋白(BPI),分别采用真空冷冻干燥与喷雾干燥制备蛋白粉,研究谷氨酰胺转氨酶(TGase)及不同干燥方式对荞麦分离蛋白理化性质和凝胶特性的影响。结果表明,冷冻干燥... 详细信息

以荞麦(Fagopyrum esculentum Moench.)为原料,通过碱溶酸沉法提取荞麦分离蛋白(BPI),分别采用真空冷冻干燥与喷雾干燥制备蛋白粉,研究谷氨酰胺转氨酶(TGase)及不同干燥方式对荞麦分离蛋白理化性质和凝胶特性的影响。结果表明,冷冻干燥荞麦分离蛋白(FBPI)的蛋白组成与BPI类似,而喷雾干燥荞麦分离蛋白(SBPI)的13S球蛋白发生降解。FBPI和SBPI的α-螺旋含量分别为22.10%和20.00%,β-转角含量为19.40%和19.80%,表明喷雾干燥会使蛋白结构更加无序化。SBPI的表面疏水性指数显著(P<0.05)高于FBPI与BPI。与BPI相比,SBPI具有更高的表面疏水性和更均匀的粒径,但溶解度和持水能力较低,而FBPI具有与BPI相似的物理化学性质。加入TGase后,FBPI和SBPI的平均粒径分别由213.01与192.55 nm增加至2289.01与1439.67 nm,表明发生了交联反应。BPI、FBPI和SBPI的电位分别为−15.93、−29.43、−29.35 mV,表明干燥处理能进一步提高蛋白的溶液稳定性。相比于SBPI,BPI和FBPI在升温过程中G'持续下降,表明热处理会破坏BPI和FBPI的蛋白凝胶结构。经加热处理再进行冷却,FBPI的G'显著(P<0.05)高于SBPI与BPI,具有更好的凝胶性。TGase能显著(P<0.05)提高FBPI的储能模量与热稳定性,但对SBPI作用不明显。化学作用力结果显示,疏水相互作用和二硫键是凝胶主要作用力;TGase能有效促进凝胶结构中疏水相互作用和二硫键形成,但会导致蛋白分子间氢键断裂。由此可见,通过冷冻干燥制备的荞麦蛋白能在TGase的作用下形成凝胶性与稳定性较好的凝胶。本研究的结果为荞麦分离蛋白凝胶特性研究及其凝胶类食品的开发与应用提供理论参考。

关键词：荞麦分离蛋白冷冻干燥喷雾干燥谷氨酰胺转氨酶(TGase) 凝胶特性

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