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Construction of Salmonella Pullorum ghost by co-expression of lysis gene E and the antimicrobial peptide SMAP29 and evaluation of its immune efficacy in specific-pathogen-free chicks

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Journal of Integrative Agriculture 2018年第1期17卷 197-209页

作者： TIAN Qiu-feng ZHOU Wei si Wei YI Fei HUA Xin YUE Min CHEN Li-ping liu si-guo YU Shen-ye Division of Bacterial Diseases State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology Harbin Veterinary Research Institute Chinese Academy of Agricultural Sciences Harbin 150069 P.R. China Heilongjiang Bayi Agricultural University Daqing 163319 P.R. China College of Animal Sciences Zhejiang University Hangzhou 310058 P.R. China

In this study, a safety enhanced Salmonella Pullorum （S. Pullorum） ghost was constructed using an antimicrobial peptide gene, and evaluated for its potential as a Pullorum disease （PD） vaccine candidate. The antimicrobial peptide SMAP29 was co-expressed with lysis gene E to generate S. Pullorum ghosts. No viable bacteria were detectable either in the fermentation culture after induction of gene E- and SMAP29-mediated lysis for 24 h or in the lyophilized ghost products. Specific-pathogen- free （SPF） chicks were intraperitoneally immunized with ghosts at day 7 of age and no mortality, clinical symptoms or signs of PD such as anorexia, depression and diarrhea were observed. On challenge with a virulent S. Pullorum strain at 4 wk post-immunization, a comparatively higher level of protection was observed in the S. Pullorum ghost immunized chickens with a minimum of pathological lesions and bacterial loads compared to the birds in inactivated vaccine groups. In addition, immunization with the S. Pullorum ghosts induced a potent systemic IgG response and was associated with significantly increased levels of cytokine IFN-y and IL-4 and relative percentages of CD4＋ and CD8＋ T lymphocytes. Our results indicate that SMAP29 can be employed as a new secondary lethal protein to enhance the safety of bacterial ghosts, and to prepare a non-living bacterial vaccine candidate that can prevent PD in chickens.

关键词： Salmonella Pullorum bacterial ghost antimicrobial peptide immune response immune protection

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Characteristics of Mycobacterium tuberculosis serine protease Rv1043c in enzymology and pathogenicity in mice

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Journal of Integrative Agriculture 2023年第12期22卷 3755-3768页

作者： TANG Yang-yang CUI Ying-ying JIANG Yan-yan SHAO Ming-zhu ZANG Xin-xin DANG Guang-hui liu si-guo State Key Laboratory for Animal Disease Control and Prevention Harbin Veterinary Research InstituteChinese Academy of Agricultural SciencesHarbin 150069P.R.China

The serine proteases of Mycobacteria tuberculosis(Mtb)are important contributors to the process of bacterial invasion and its *** the present study,we systematically characterized the role of the Rv1043c protein in Mycobacterium infection by purifying the Rv1043c protein in Escherichia coli and constructing a Mycobacterium smegmatis(Msg)strain overexpressing Rv1043c(Msg_Rv1043c).We found that Rv1043c had serine protease activity and localized to the surface of *** determined that the optimal pH and temperature for the Rv1043c serine protease were 9.0 and 45°C,***,the serine protease activity of Rv1043c was enhanced by divalent metal ions of Ca^(2+)and Mg^(2+).site-directed mutagenesis studies demonstrated that the serine 279 residue in Rv1043c plays a catalytic ***,mouse model studies confirmed that Rv1043c significantly enhanced the survival of Msg in vivo,induced pulmonary injury and lung cell apoptosis,and promoted the release of pro-inflammatory cytokines interleukin-1βand interleukin-6 in *** study presents novel insights into the relationship between mycobacterial serine protease and the pathogenesis of the disease.

关键词： Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium smegmatis serine protease Rv1043c pathogenicity

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蛋白质:生物界中又一类信息的储存者和传递者——对prion生物学相关知识的重新解读

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生物化学与生物物理进展 2005年第8期32卷 698-706页

作者：俞国华刘思国成国祥上海转基因研究中心

蛋白质在相当一段时间内一直被认为只是DNA或RNA等遗传物质的表达形式,其单独不具有储存和传递生物信息的功能,而储存和传递生物信息却是遗传物质的两个基本属性.随着近年来prion生物学的出现和研究的逐步深入,人们已经认识到蛋白质单... 详细信息

蛋白质在相当一段时间内一直被认为只是DNA或RNA等遗传物质的表达形式,其单独不具有储存和传递生物信息的功能,而储存和传递生物信息却是遗传物质的两个基本属性.随着近年来prion生物学的出现和研究的逐步深入,人们已经认识到蛋白质单独就具有储存和传递生物信息的功能,从这个意义上讲,蛋白质也是一类遗传物质.所以很有必要站在这个角度对prion生物学的相关知识进行重新的梳理和再认识,通过对哺乳动物prion生物学和真菌prion生物学各自发展历程的简要回顾和最新研究成果的介绍,以及它们之间相同点和不同点的比较,总结出蛋白质储存和传递生物信息的一般规律并指出其表现形式的多样性.

关键词： prion生物学生物信息的储存和传递蛋白质空间构象

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新时期我国外资医疗政策变迁及对策思考

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中国卫生政策研究 2017年第9期10卷 75-80页

作者：刘畅郭思遥天津财经大学经济学院天津300222

改革开放以来,我国政府不断调整外资医疗政策,大力引导外资在试点省市开办医疗机构。本文以"健康中国2030"规划纲要为背景,总结了我国外资医疗政策从最初建立、停滞、发展到改革的变迁进程,我国政府逐步放开外资医疗市场,但外资医院在... 详细信息

改革开放以来,我国政府不断调整外资医疗政策,大力引导外资在试点省市开办医疗机构。本文以"健康中国2030"规划纲要为背景,总结了我国外资医疗政策从最初建立、停滞、发展到改革的变迁进程,我国政府逐步放开外资医疗市场,但外资医院在我国发展面临一系列问题,如缺失法律保障、审批程序繁琐、发展规模受限等。未来外资医疗的发展应在我国法律约束和政策引导下有序发展,开展特色的医疗服务,提高我国居民的健康水平。

关键词：政策变迁外资医疗机构健康中国

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牛分枝杆菌mpb64-ag85b-esat-6融合基因真核表达载体的构建及其在SP2/0细胞中的表达

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中国生物制品学杂志 2008年第7期21卷 565-567页

作者：宫强刘思国河南科技大学食品与生物工程学院洛阳471003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

目的构建牛分枝杆菌mpb64-ag85b-esat-6融合基因真核表达载体,并在SP2/0细胞中表达。方法利用PCR技术和重叠延伸剪接(SOE)技术扩增牛分枝杆菌ag85b、mpb64、esat-6基因和mpb64-ag85b融合基因,克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)上,构建重组... 详细信息

目的构建牛分枝杆菌mpb64-ag85b-esat-6融合基因真核表达载体,并在SP2/0细胞中表达。方法利用PCR技术和重叠延伸剪接(SOE)技术扩增牛分枝杆菌ag85b、mpb64、esat-6基因和mpb64-ag85b融合基因,克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)上,构建重组质粒pcMAE。将该重组质粒体外转染SP2/0细胞,间接免疫荧光法检测目的基因的表达。结果真核表达质粒pcMAE经酶切鉴定及测序,证实构建正确,转染后SP2/0细胞膜上出现均质的蓝绿色荧光。结论已成功构建了牛分枝杆菌mpb64-ag85b-esat-6融合基因真核表达载体,并在SP2/0细胞中获得表达,为进一步研制牛结核病多基因融合DNA疫苗奠定了基础。

关键词：牛分枝杆菌融合基因真核表达 SP2/0细胞

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纤维增强自密实混凝土早龄期非自由收缩研究

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建筑材料学报 2008年第1期11卷 8-13页

作者：刘思国丁一宁大连理工大学海岸和近海工程国家重点实验室辽宁大连116024

通过坍落流动度、J环和U型管试验,评价了纤维混凝土拌和物的流动性能、粘度、钢筋间隙通过性能和抗离析性能,得到了满足工作性能和强度要求的纤维自密实混凝土.在此基础上深入研究了各种不同类型纤维(高耐碱玻璃纤维HARGF、改性聚丙烯纤... 详细信息

通过坍落流动度、J环和U型管试验,评价了纤维混凝土拌和物的流动性能、粘度、钢筋间隙通过性能和抗离析性能,得到了满足工作性能和强度要求的纤维自密实混凝土.在此基础上深入研究了各种不同类型纤维(高耐碱玻璃纤维HARGF、改性聚丙烯纤维MPPF、混杂纤维CF)对自密实混凝土早龄期非自由收缩性能的影响.结果表明:通过阻止骨料沉降和水分上浮,减少泌水通道和泌水量,纤维可减缓混凝土中水分的蒸发速率,起到一定的保水作用;单掺HARGF或MPPF可以有效限制混凝土基体早龄期的塑性收缩和干缩,阻止收缩裂缝的产生和发展;CF限制混凝土基体早龄期收缩和裂缝展开的能力优于HARGF和MPPF,呈现出明显的正混杂效应.

关键词：纤维工作性能自密实混凝土早龄期收缩

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钢纤维自密实混凝土梁抗剪性能的试验研究

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水利学报 2011年第4期42卷 461-468页

作者：丁一宁刘亚军刘思国刘赫凯大连理工大学海岸和近海工程国家重点实验室辽宁大连116024

对15根自密实钢筋-钢纤维混凝土梁和6根普通自密实钢筋混凝土梁的抗剪性能进行了试验研究,通过荷载-跨中挠度曲线、剪跨区荷载-混凝土主应变曲线和荷载-箍筋应变曲线,分析了钢纤维掺量、剪跨比和配箍率对梁抗剪性能的影响。基于试验结果... 详细信息

对15根自密实钢筋-钢纤维混凝土梁和6根普通自密实钢筋混凝土梁的抗剪性能进行了试验研究,通过荷载-跨中挠度曲线、剪跨区荷载-混凝土主应变曲线和荷载-箍筋应变曲线,分析了钢纤维掺量、剪跨比和配箍率对梁抗剪性能的影响。基于试验结果,对比了RilemTC162-TDF和CECS38:2004抗剪公式,并与实测值进行了比较。结果表明,钢纤维能够显著的提高无腹筋梁的变形能力和承载能力,改善破坏形态。由钢纤维部分取代箍筋使梁具有更好的抗剪性能;RilemTC162-TDF与实测值吻合较好。

关键词：钢纤维自密实混凝土破坏形态抗剪承载力计算混凝土主应变

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绵马酚抑制多粘菌素耐药关键蛋白MCR-1的机制研究

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中国预防兽医学报 2020年第5期42卷 427-433页

作者：贾月华欣刘思国吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 东北林业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150040

mcr-1是近几年发现的一种多粘菌素耐药基因,该基因可随质粒在不同菌株间快速传播,目前已在多个国家及地区被检出,本研究团队前期筛选发现联合使用绵马酚与多粘菌素时可以抑制mcr-1阳性大肠杆菌的生长。为了评价两者联合使用时的抑菌效果... 详细信息

mcr-1是近几年发现的一种多粘菌素耐药基因,该基因可随质粒在不同菌株间快速传播,目前已在多个国家及地区被检出,本研究团队前期筛选发现联合使用绵马酚与多粘菌素时可以抑制mcr-1阳性大肠杆菌的生长。为了评价两者联合使用时的抑菌效果,本研究采用棋盘稀释法对mcr-1阳性大肠杆菌进行了绵马酚与多粘菌素联合药敏实验,结果显示,当联合使用绵马酚与多粘菌素时相比单独使用多粘菌素时,多粘菌素的MIC由8μg/m L降低至1μg/m L,FIC指数小于0.5,二者属于协同作用。以终浓度为32μg/m L绵马酚与10μg/m L多粘菌素联合使用,进一步通过平板计数和透射电镜检测其杀菌效果和大肠杆菌菌体的破损程度,结果显示,当联合使用绵马酚与多粘菌素时,大肠杆菌在2 h^8 h逐渐全部死亡,大肠杆菌菌体破损最严重;但不管是单独使用绵马酚还是多粘菌素,大肠杆菌均不能被彻底杀灭。采用氯仿/甲醇/水混合相萃取法分别提取mcr-1阳性大肠杆菌JD08菌株和含有16μg/m L的绵马酚的mcr-1阳性大肠杆菌JD08菌株中类脂A,利用质谱仪检测类脂A的结构,结果显示在绵马酚存在的情况下,MCR-1蛋白的作用受到抑制,发生转移的酰基键含量大大减少。采用双酶切法构建PET-28a-mcr-1重组表达载体,经诱导表达后通过镍柱亲和层析纯化得到MCR-1蛋白,利用Biacore大分子作用仪验证绵马酚与重组MCR-1蛋白的相互作用,结果显示绵马酚与MCR-1蛋白之间的亲和力为1.47μmol/L,属于直接结合。表明单独使用绵马酚对mcr-1阳性大肠杆菌无效,但其与多粘菌素联合时则产生了良好的抑菌及杀菌效果,绵马酚是MCR-1的小分子抑制剂。本研究首次确认了绵马酚是MCR-1的小分子抑制剂,对于开发新型抗多粘菌素耐药菌的药物具有重要意义。

关键词：大肠杆菌多粘菌素耐药关键蛋白MCR-1 绵马酚抑制剂大分子互作

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牛结核杆菌MPB64蛋白的真核表达

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华北农学报 2009年第5期24卷 214-216页

作者：宫强曲宁刘思国河南科技大学食品与生物工程学院河南洛阳471003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

利用PCR技术扩增出牛结核杆菌mpb64基因片段,克隆到真核载体pcDNA3.1(+)上,构建重组质粒pCM64,将该重组质粒转染SP2/0细胞,间接免疫荧光试验和Western blotting检测目的基因的表达情况。结果表明,在转染了重组质粒pCM64的SP2/0细胞中出... 详细信息

利用PCR技术扩增出牛结核杆菌mpb64基因片段,克隆到真核载体pcDNA3.1(+)上,构建重组质粒pCM64,将该重组质粒转染SP2/0细胞,间接免疫荧光试验和Western blotting检测目的基因的表达情况。结果表明,在转染了重组质粒pCM64的SP2/0细胞中出现绿色荧光,转染的SP2/0细胞泳道23 kDa处出现特异条带,说明mpb64基因在SP2/0细胞中成功进行了瞬时表达。

关键词：牛结核杆菌 mpb64基因表达

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Unraveling brain aging through the lens of oral microbiota

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Neural Regeneration Research 2025年第7期20卷 1930-1943页

作者： Qinchao Hu si Wang Weiqi Zhang Jing Qu Guang-Hui liu State Key Laboratory of Membrane Biology Institute of ZoologyChinese Academy of SciencesBeijingChina Hospital of Stomatology Guanghua School of StomatologyGuangdong Provincial Key Laboratory of StomatologySun Yat-sen UniversityGuangzhouGuangdong ProvinceChina Advanced Innovation Center for Human Brain Protection and National Clinical Research Center for Geriatric Disorders Xuanwu HospitalCapital Medical UniversityBeijingChina Aging Translational Medicine Center International Center for Aging and CancerBeijing Municipal Geriatric Medical Research CenterXuanwu HospitalCapital Medical UniversityBeijingChina CAS Key Laboratory of Genomic and Precision Medicine Beijing Institute of GenomicsChinese Academy of Sciences and China National Center for BioinformationBeijingChina University of Chinese Academy of Sciences BeijingChina Institute for Stem Cell and Regeneration Chinese Academy of SciencesBeijingChina Aging Biomarker Consortium BeijingChina State Key Laboratory of Stem Cell and Reproductive Biology Institute of ZoologyChinese Academy of SciencesBeijingChina Beijing Institute for Stem Cell and Regenerative Medicine BeijingChina

The oral cavity is a complex physiological community encompassing a wide range of *** of oral microbiota can lead to various oral infectious diseases,such as periodontitis and tooth decay,and even affect systemic health,including brain aging and neurodegenerative *** studies have highlighted how oral microbes might be involved in brain aging and neurodegeneration,indicating potential avenues for intervention *** this review,we summarize clinical evidence demonstrating a link between oral microbes/oral infectious diseases and brain aging/neurodegenerative diseases,and dissect potential mechanisms by which oral microbes contribute to brain aging and *** also highlight advances in therapeutic development grounded in the realm of oral microbes,with the goal of advancing brain health and promoting healthy aging.

关键词： Alzheimer's disease brain aging multiple sclerosis neurodegeneration neurodegenerative diseases oral microbiota Parkinson's disease periodontitis bacteria Porphyromonas gingivalis

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