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Transfer of disulfide bond formation modules via yeast artificial chromosomes promotes the expression of heterologous proteins inKluyveromyces marxianus

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mLife 2024年第1期3卷 129-142页

作者： Pingping Wu Wenjuan Mo Tian Tian kunfeng song Yilin Lyu Haiyan Ren Jungang Zhou Yao Yu Hong Lu State Key Laboratory of Genetic Engineering School of Life SciencesFudan UniversityShanghaiChina Shanghai Engineering Research Center of Industrial Microorganisms ShanghaiChina

Kluyveromyces marxianus is a food-safe yeast with great potential for producing heterologous proteins.Improving the yield in K.marxianus remains a challenge and incorporating large-scale functional modules poses a technical obstacle in engineering.To address these issues,linear and circular yeast artificial chromosomes of K.marxianus(KmYACs)were constructed and loaded with disulfide bond formation modules from Pichia pastoris or K.marxianus.These modules contained up to seven genes with a maximum size of 15 kb.KmYACs carried telomeres either from K.marxianus or Tetrahymena.KmYACs were transferred successfully into K.marxianus and stably propagated without affecting the normal growth of the host,regardless of the type of telomeres and configurations of KmYACs.KmYACs increased the overall expression levels of disulfide bond formation genes and significantly enhanced the yield of various heterologous proteins.In high-density fermentation,the use of KmYACs resulted in a glucoamylase yield of 16.8 g/l,the highest reported level to date in K.marxianus.Transcriptomic and metabolomic analysis of cells containing KmYACs suggested increased flavin adenine dinucleotide biosynthesis,enhanced flux entering the tricarboxylic acid cycle,and a preferred demand for lysine and arginine as features of cells overexpressing heterologous proteins.Consistently,supplementing lysine or arginine further improved the yield.Therefore,KmYAC provides a powerful platform for manipulating large modules with enormous potential for industrial applications and fundamental research.Transferring the disulfide bond formation module via YACs proves to be an efficient strategy for improving the yield of heterologous proteins,and this strategy may be applied to optimize other microbial cell factories.

关键词： disulfide bond formation expression of heterologous proteins Kluyveromyces marxianus telomere yeast artificial chromosome

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调制周期数对Mo/AZO成分调制多层膜透光、反光特性以及电性能的影响

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武汉科技大学学报 2024年第2期47卷 107-113页

作者：张邵奇吴隽王凯丰宋坤峰卢志红祝柏林武汉科技大学材料学部湖北武汉430081 武汉科技大学省部共建耐火材料与冶金国家重点实验室湖北武汉430081

采用射频(RF)和单极中频脉冲直流(UMFPDC)磁控溅射技术,在300℃下制备了Mo/AZO成分调制多层膜。测试结果表明,Mo/AZO成分调制多层膜以(002)为取向的六方纤锌矿型ZnO结构为主;薄膜中Mo的化学态随薄膜厚度而变化,当薄膜厚度为1.67 nm时,M... 详细信息

采用射频(RF)和单极中频脉冲直流(UMFPDC)磁控溅射技术,在300℃下制备了Mo/AZO成分调制多层膜。测试结果表明,Mo/AZO成分调制多层膜以(002)为取向的六方纤锌矿型ZnO结构为主;薄膜中Mo的化学态随薄膜厚度而变化,当薄膜厚度为1.67 nm时,Mo除单质态外,还存在部分+4和+5的离子价态,当薄膜厚度降至0.83 nm时,已无单质态Mo;调制周期数对成分调制多层膜的透光、反光特性以及电性能影响显著,当调制周期数为3时,Mo/AZO成分调制多层膜的综合性能达到最佳,电阻率、霍尔迁移率和载流子浓度分别为8.64×10^(-4)Ω·cm、8.78 cm^2)/(V·s)和8.23×10^(20)cm^(-3)。在保持金属层、半导体层总厚度不变的情况下,通过改变调制周期数可以增加薄膜的光学透过率并可在较宽范围内调节多层膜的综合性能,这为制备综合性能优异的金属/半导体型透光导电薄膜提供了一条切实可行的途径。

关键词：磁控溅射 Mo/AZO多层膜调制周期光性能电性能

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热浸镀锌低碳钢丝表面结瘤及镀层脱落分析及控制

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中国冶金 2024年第2期34卷 134-141页

作者：王海宾李坤峰贾建平王建忠狄增文宋仁伯河钢集团宣钢公司河北宣化075100 河北省钢结构用钢工程技术研究中心河北宣化075100 北京科技大学材料科学与工程学院北京100083

针对热浸镀锌低碳钢丝表面的锌瘤及镀层脱落问题,利用X射线光电子能谱、扫描电子显微镜以及能谱仪进行了成因分析,并提出了控制措施。结果表明,热浸镀锌低碳钢丝表面产生锌瘤是由于原料丝表面残留的含硅氧化物与锌液反应产生“圣德林效... 详细信息

针对热浸镀锌低碳钢丝表面的锌瘤及镀层脱落问题,利用X射线光电子能谱、扫描电子显微镜以及能谱仪进行了成因分析,并提出了控制措施。结果表明,热浸镀锌低碳钢丝表面产生锌瘤是由于原料丝表面残留的含硅氧化物与锌液反应产生“圣德林效应”,导致局部镀层增厚;镀层脱落是由于钢丝浸镀时间过长,导致塑性不佳的合金层过度生长。因此建议严格控制加热、酸洗工艺,以清除钢丝表面的氧化物残留,同时可往锌锅中加入一定量的镍和铝,以抑制“圣德林效应”的发生和防止合金层的过度长大。研究结果对提升产品质量、实现产品升级有着重要意义。

关键词：热镀锌钢丝锌瘤镀层脱落圣德林效应表面缺陷

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Effects of Early Infection of Tobacco Mosaic Virus on Photosynthetic Proteins and Its Control

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Agricultural Biotechnology 2019年第2期8卷 5-9页

作者： Xiaojing XU kunfeng song Fengsheng HAO Jiajia ZHAO Hongxiang GUO Weiqun LIU Zhumadian Branch of Henan Province Tobacco Company College of Life Science Henan Agricultural University

[Objectives] This study was conducted to explore the optimal period of TMV control and the physiological sites that interfere with TMV infection. [Methods] Proteome analysis was performed on the host tissues(tobacco plants) at different time periods of viral infection, to verify the changes in the expression of differential protein genes and N and PR1-a in the photosynthetic pathway and porphyrin metabolism and chlorophyll metabolism pathways in proteome; and the tobacco plants were treated with different preparations. [Results] The expression levels of N and PR1-a in the tobacco leaves treated with preparation B reached the highest level, and the effects on the expression levels of the differential protein genes were also the most significant. The control effects of the preparations were tested by the half-leaf method, and the results showed that preparation B had a significant control effect against the early infection of the virus.[Conclusions] This study lays a foundation for the prevention and control of tobacco mosaic virus on crops.

关键词： Tobacco mosaic virus Proteome Photosynthetic system Control effect

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全内镜下椎板开窗减压术(Endo-LOVE)治疗青壮年钙化型L_(5)/S_(1)椎间盘突出症

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中国微创外科杂志 2022年第1期22卷 14-18页

作者：宋坤锋马海军周红刚河南省直第三人民医院椎间盘中心郑州450006

目的探讨全内镜下椎板开窗减压术(即Endo-LOVE技术)治疗青壮年钙化型L_(5)/S_(1)椎间盘突出症的近期疗效。方法回顾性收集2018年4月~2020年10月Endo-LOVE技术治疗青壮年钙化型L_(5)/S_(1)椎间盘突出症56例资料,男38例,女18例,年龄16~45... 详细信息

目的探讨全内镜下椎板开窗减压术(即Endo-LOVE技术)治疗青壮年钙化型L_(5)/S_(1)椎间盘突出症的近期疗效。方法回顾性收集2018年4月~2020年10月Endo-LOVE技术治疗青壮年钙化型L_(5)/S_(1)椎间盘突出症56例资料,男38例,女18例,年龄16~45岁,(33.7±12.6)岁。根据椎间盘突出方向与患侧S_(1)神经根位置,腋下型27例,肩型22例,混合型7例。记录术前及术后3天、3个月、6个月、12个月腰腿痛视觉模拟评分(Visual Analogue Scale,VAS)和Oswestry功能障碍指数(Oswestry Disability Index,ODI)。按照MacNab标准评定术后疗效。结果所有病例均顺利完成手术,无神经根损伤、硬膜囊撕裂等并发症。术后各时间点腰腿痛VAS、ODI均较术前明显改善(P=0.000)。术后随访12~24个月,(14.2±8.3)月。按照MacNab标准,优40例,良11例,可5例,优良率91.1%(51/56)。结论Endo-LOVE治疗青壮年钙化型L_(5)/S_(1)椎间盘突出症简单、实用,安全性可控,尤其对于椎板间窗严重狭窄以及肩型压迫的情况,近期疗效满意。

关键词：全内镜钙化型腰椎间盘突出症全可视化环锯椎板开窗

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直接电纺纤维海绵的制备及应用

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化学进展 2023年第11期35卷 1686-1700页

作者：宋一龙赵爽李昆锋费志方陈国兵杨自春海军工程大学动力工程学院武汉430033

静电纺丝纤维海绵是一种以一维纤维为构筑单元的蓬松三维(3D)材料,由于维度的增加,该材料具备许多比传统电纺薄膜更加突出的优点,在各领域都表现巨大的应用潜力。随着对电纺三维结构研究的深入,如何直接通过静电纺丝获取稳定的纤维海绵... 详细信息

静电纺丝纤维海绵是一种以一维纤维为构筑单元的蓬松三维(3D)材料,由于维度的增加,该材料具备许多比传统电纺薄膜更加突出的优点,在各领域都表现巨大的应用潜力。随着对电纺三维结构研究的深入,如何直接通过静电纺丝获取稳定的纤维海绵并提高其性能已成为当前面临的关键挑战。本文系统综述了近年来直接电纺制备纤维海绵的各种新策略,讨论了其内在机理、特点以及代表性的研究成果,总结了该材料在组织工程、环境治理、安全防护和智能设备等领域的应用现状,提出了其现阶段面临的一些挑战,展望了电纺海绵在未来的发展方向。

关键词：直接电纺三维结构纤维固化组织工程环境保护

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西秦岭温泉斑岩钼矿床岩浆-热液演化

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岩石学报 2015年第11期31卷 3391-3404页

作者：邱昆峰宋开瑞宋耀辉中国地质大学地质过程与矿产资源国家重点实验室北京100083 美国地质调查局丹佛中心丹佛80225 核工业航测遥感中心石家庄050000

西秦岭北缘广泛出露印支期中酸性侵入岩和相关的斑岩-矽卡岩矿床。温泉矿床位于该矿带东段,是其内已探明规模最大的斑岩钼矿床。温泉矿床发育多阶段热液脉体,黄铁矿作为其中的贯通性金属硫化物,其化学组成蕴含着岩浆-热液演化及金属沉... 详细信息

西秦岭北缘广泛出露印支期中酸性侵入岩和相关的斑岩-矽卡岩矿床。温泉矿床位于该矿带东段,是其内已探明规模最大的斑岩钼矿床。温泉矿床发育多阶段热液脉体,黄铁矿作为其中的贯通性金属硫化物,其化学组成蕴含着岩浆-热液演化及金属沉淀过程等诸多信息,对于斑岩系统模型的厘定具有重要意义。温泉矿床热液脉体时序为:钾长石-黑云母-石英脉(A脉)、石英-黄铜矿脉、石英-辉钼矿脉(B脉)和石英-绢云母-黄铁矿脉(D脉)。A脉是斑岩系统岩浆-热液演化的最早期脉体,主要矿物组合为钾长石+黑云母+石英+黄铁矿±磁铁矿±磷灰石±黄铜矿,代表了引起早期基性岩浆矿物被蚀变为黑云母的流体通道;B脉与钾长石化蚀变关系密切,围岩中斜长石斑晶大量被蚀变为钾长石;石英-辉钼矿脉切割所有早期黑云母化-钾化蚀变阶段的石英-硫化物网脉,并形成于所有斑岩侵位之后,少量黄铁矿和黄铜矿共生于辉钼矿裂隙及边部;D脉是斑岩系统岩浆-热液成矿作用的最晚期事件,其主要被黄铁矿和石英及少量黄铜矿填充,发育晚期的绢英岩化和泥化蚀变,长石多发生破坏性蚀变。四个阶段石英网脉中黄铁矿电子探针分析显示,A脉的黄铁矿中Cu、Mo和Au含量均较低,有少量的金属硫化物(黄铁矿+黄铜矿)沉淀,但通常不能形成规模矿体;石英-黄铜矿脉的黄铁矿中Cu含量明显较高,且多与高品位Cu矿体的空间产出位置相一致,可能是斑岩系统伴随钾化蚀变作用主要的铜沉淀阶段;B脉的黄铁矿中Mo含量明显较高,与高品位钼矿体空间产出关系密切,可能代表了斑岩系统钼成矿作用的主要阶段;D脉的黄铁矿中Au含量明显升高,可能代表了金在斑岩系统岩浆-热液成矿作用的最晚期事件中的沉淀。

关键词：岩浆-热液作用石英网脉黄铁矿微量元素温泉矿床西秦岭

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单侧双通道脊柱内镜技术治疗单节段胸椎黄韧带骨化症

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中国修复重建外科杂志 2023年第2期37卷 174-179页

作者：杨贺军牛旺唐骞刘洋王宇鹏简磊宋坤锋马草源河南省直第三人民医院椎间盘中心郑州450006

目的探讨单侧双通道脊柱内镜(unilateral biportal endoscopy,UBE)技术治疗单节段胸椎黄韧带骨化症(thoracic ossification of ligamentum flavum,TOLF)的安全性和临床疗效。方法 2020年8月—2021年12月应用UBE技术治疗11例单节段TOLF患者。男6例,女5例;年龄49~72岁,平均58.2岁。责任节段:T6、71例,T7、81例,T8、92例,T9、102例,T10、112例,T11、123例。影像学检查示骨化部位位于左侧4例、右侧3例、双侧4例。主要临床症状为胸背痛或下肢痛,伴下肢麻木、乏力。病程2~28个月,中位病程17个月。记录手术时间、术后住院时间以及并发症发生情况。术前及术后3 d、1个月、3个月、末次随访时采用疼痛视觉模拟评分(VAS)评价胸背痛及下肢痛程度,Oswestry功能障碍指数(ODI)及日本骨科协会(JOA)评分评价功能恢复情况。手术前后采用CT测量冠状面椎管前后径,评价手术减压效果。结果手术均顺利完成,手术时间50~105 min,平均80.0 min;均无硬膜囊撕裂、脑脊液漏、脊髓神经损伤或感染等并发症发生。术后住院时间2~5 d,平均3.1 d。术后切口均Ⅰ期愈合。患者均获随访,随访时间6~22个月,平均14.8个月。术后3 d CT测量示椎管前后径为(8.63±1.61)mm,较术前(3.67±1.37)mm增大(t=-12.181,P0.05)外,其余各时间点两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。随访期间无TOLF复发。结论 UBE技术是治疗单节段TOLF的一种安全有效方法,但远期疗效有待进一步研究明确。

关键词：单侧双通道脊柱内镜技术胸椎黄韧带骨化症微创手术

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运载火箭风场高精度拟合方法

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宇航学报 2023年第2期44卷 303-312页

作者：胡瑞光钟文安宋征宇路坤锋潘豪邵梦晗王昭磊北京航天自动控制研究所北京100854 西昌卫星发射中心西昌615600 中国运载火箭技术研究院北京100076

针对运载火箭风场传统拟合方法精度低的问题,提出一种基于最少参数神经网络的高精度拟合方法。该方法将运载火箭飞行高度作为网络输入,将风场的速度和朝向作为网络输出,在满足精度要求下使用最少的网络层数和神经元个数完成风场拟合,并... 详细信息

针对运载火箭风场传统拟合方法精度低的问题,提出一种基于最少参数神经网络的高精度拟合方法。该方法将运载火箭飞行高度作为网络输入,将风场的速度和朝向作为网络输出,在满足精度要求下使用最少的网络层数和神经元个数完成风场拟合,并给出了隐层节点数的下界公式。和传统的最小二乘多项式拟合及其分段形式相比,最少参数神经网络只使用一套框架即可完成风速和风向的拟合,并提高了拟合精度。大量仿真结果充分说明了所提出方法的有效性、简洁性和鲁棒性。

关键词：风场模型曲线拟合最小二乘多项式最少参数神经网络

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磁控溅射参数和锂添加对LiPON薄膜离子电导率的影响

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武汉科技大学学报 2023年第6期46卷 424-429页

作者：王凯丰吴隽张邵奇宋坤峰祝柏林武汉科技大学材料学部湖北武汉430081

锂磷氧氮化合物(LiPON)是一种广泛应用于全固态薄膜电池体系的固态电解质。本文采用射频磁控溅射工艺制备LiPON薄膜,研究了溅射工艺参数和烧结锂片添锂对LiPON薄膜离子电导率的影响。结果表明,在溅射功率为120 W时,随着N_(2)/Ar流量比由... 详细信息

锂磷氧氮化合物(LiPON)是一种广泛应用于全固态薄膜电池体系的固态电解质。本文采用射频磁控溅射工艺制备LiPON薄膜,研究了溅射工艺参数和烧结锂片添锂对LiPON薄膜离子电导率的影响。结果表明,在溅射功率为120 W时,随着N_(2)/Ar流量比由3∶7升高至7∶3,薄膜离子电导率由1.31×10^(-6)S/cm增至2.24×10^(-6)S/cm;当N_(2)/Ar流量比为7∶3时,随着溅射功率由160 W降至120 W,薄膜离子电导率由2.09×10^(-6)S/cm增至2.24×10^(-6)S/cm。分析认为,高氮气比例和低溅射功率有助于双配位和三配位氮结构含量的提升,从而提高LiPON薄膜的离子电导率。此外,烧结锂片添锂法能有效实现靶材添锂,相同溅射参数下,所制薄膜的离子电导率提升了21.4%。

关键词：射频磁控溅射固态电解质 LiPON薄膜锂添加离子电导率

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