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两个三角公式及其证明

高等数学研究 2011年第4期14卷 42-43页

作者：张娟娟巩优花青岛大学数学科学学院山东青岛266071

利用线性变换思想可证明三角公式:sum from i=0 to |n|-1 (cos(i.(2π)/n)=0,sum from i=0 to |n|-1(sin(i.(2π)/n))=0,n∈Z,n≠0,±1.

关键词：三角公式向量线性变换

cos-7细胞胞内pH的31P核磁共振测定

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分析化学 2005年第9期33卷 1298-1300页

作者：乔娟黄荣清肖炳坤骆传环吴德雨赵焱杨建云军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850 军事医学科学院放射与辐射医学研究所

生物细胞内pH的测定对于细胞内代谢、游离离子及离子通道的研究有重要的意义,而且一些酶的活性也与细胞内pH密切相关。猴的肾细胞cos-7细胞常用于外源基因的转染表达,研究这一细胞株细胞内的pH,可为基因转染提供可靠的依据。本文采用31... 详细信息

生物细胞内pH的测定对于细胞内代谢、游离离子及离子通道的研究有重要的意义,而且一些酶的活性也与细胞内pH密切相关。猴的肾细胞cos-7细胞常用于外源基因的转染表达,研究这一细胞株细胞内的pH,可为基因转染提供可靠的依据。本文采用31P核磁共振对cos-7细胞胞内的pH进行了分析测定。

关键词： 31PnMR cos-7细胞 pH

人血管内皮生长因子-C基因的体外重组和表达

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上海交通大学学报（医学版） 2006年第5期26卷 503-506页

作者：周剑国曹卫刚胡学庆刘德莉刘宁飞李圣利吴娟娟上海交通大学医学院第九人民医院整复外科上海200011

目的体外重组人血管内皮生长因子-C(VEGF-C)基因,检验其在细胞中的表达。方法以RT-PCR法从人真皮成纤维细胞中克隆VEGF-C基因功能片断的cDnA,制备pcDnA3.1(+)-VEGF-C质粒载体,通过Fugene 6介导转染人成纤维细胞及cos7细胞。RT-PCR及免... 详细信息

目的体外重组人血管内皮生长因子-C(VEGF-C)基因,检验其在细胞中的表达。方法以RT-PCR法从人真皮成纤维细胞中克隆VEGF-C基因功能片断的cDnA,制备pcDnA3.1(+)-VEGF-C质粒载体,通过Fugene 6介导转染人成纤维细胞及cos7细胞。RT-PCR及免疫组化法检测VEGF-C基因表达情况。结果从成纤维细胞中克隆得到1 053 bp的VEGF-C基因cDnA,碱基序列与已知的人VEGF-C基因cDnA完全一致。重组pcDnA3.1(+)-VEGF-C质粒所携带的目的基因VEGF-C在细胞中有强表达。结论成功重组了一个pcDnA3.1(+)-人VEGF-C质粒,为进一步研究淋巴水肿的基因治疗提供了物质基础。

关键词：血管内皮生长因子-C 转染基因表达载体淋巴水肿

信号肽和辅助性T细胞表位增强HBV核心抗原DnA疫苗诱导的免疫应答

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生物化学与生物物理学报 2002年第3期34卷 341-346页

作者：赵平赵兰娟曹洁洪海燕戚中田第二军医大学微生物学教研室第二军医大学微生物学教研室上海200433

为增强HBVDnA疫苗的免疫效率 ,于HBV核心抗原 (HBcAg)基因 5′末端引入人IL 2信号肽和一个通用型辅助性T淋巴细胞表位基因 ,并构建成DnA疫苗 ,转染cos7细胞后经ELISA检测出分泌型HBcAg。通过肌肉注射途径分别将这种DnA疫苗和编码天然HB... 详细信息

为增强HBVDnA疫苗的免疫效率 ,于HBV核心抗原 (HBcAg)基因 5′末端引入人IL 2信号肽和一个通用型辅助性T淋巴细胞表位基因 ,并构建成DnA疫苗 ,转染cos7细胞后经ELISA检测出分泌型HBcAg。通过肌肉注射途径分别将这种DnA疫苗和编码天然HBcAg的DnA疫苗免疫BALB/c小鼠 ,检测小鼠的血清抗体、T细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞反应 ,结果表明前者诱导细胞和体液免疫应答的强度均明显超过后者 ,且更趋向于T辅助细胞 1(Th1)型免疫应答 ,故其对慢性HBV感染的治疗可能有潜在的应用价值

关键词：乙型肝炎病毒 DnA疫苗信号肽辅助性T淋巴细胞表位免疫应答

KCnE2的两种突变体I57T和V65M对Kv4.3通道功能的调节

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生物化学与生物物理进展 2008年第2期35卷 180-186页

作者：刘文娟邓鹏程蔚蔚邓建新潘秉兴姜勇刘杰广州南方医科大学病理生理学教研室广东省休克微循环重点实验室广州510515

Mink相关蛋白1(MiRP1)是由KCnE基因家族成员KCnE2编码的具有一个跨膜结构的小分子蛋白质,发生在KCnE2上的相关突变能够引起遗传性长QT间期综合症(long QT syndrome,LQT6),但其机制不明.以往的工作表明,MiRP1调节瞬间外向钾电流(transien... 详细信息

Mink相关蛋白1(MiRP1)是由KCnE基因家族成员KCnE2编码的具有一个跨膜结构的小分子蛋白质,发生在KCnE2上的相关突变能够引起遗传性长QT间期综合症(long QT syndrome,LQT6),但其机制不明.以往的工作表明,MiRP1调节瞬间外向钾电流(transient outward current,Ito)的功能,对维持心电稳定性具有重要的调节作用.在哺乳细胞系cos-7表达系统利用膜片钳全细胞记录方式,研究了两种LQT6相关的突变体I57T和V65M对Kv4.3通道功能的影响,从MiRP1对Ito功能调控的改变探讨LQT6引起心律失常的电生理机制.结果表明,KCnE2与Kv4.3共表达后对通道功能具有明显的调控作用,使通道的激活和失活明显减慢,电压依赖性失活发生正向移位,同时加快Kv4.3通道从失活中的恢复.I57T与Kv4.3共表达的通道,门控动力学以及通道的恢复特性更接近Kv4.3单独表达的通道,表现为丧失KCnE2的功能——"loss of function",而V65M的作用则与之刚好相反,对Kv4.3门控动力学和恢复特性的调节较KCnE2更强,同时,使通道电流密度明显降低,表现为增强KCnE2的功能——"gain of function".由此推论,KCnE2对Ito功能有重要的调节作用,发生在KCnE2基因上的突变,无论是增强(V65M)还是减弱(I57T)KCnE2的功能都可能通过改变Ito在心脏电稳定性中的贡献,从而使心脏在某些条件下发生心律失常.

关键词： KCnE2 瞬间外向钾电流 Kv4.3 长QT间期综合症突变

人肝再生增强因子抑制层黏连蛋白B1链基因转录活性的研究

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中华肝脏病杂志 2006年第1期14卷 70-71页

作者：邵凤娟成军马英骥杨倩纪冬王琳哈尔滨医科大学第一医院传染科 150001 北京地坛医院传染病研究所解放军第三○二医院传染病研究所

肝再生增强因子（ALR）不仅有促进肝细胞再生和抗肝损伤作用，还有一定的抗肝纤维化作用。本研究利用生物信息学技术，对层黏连蛋白B1链（LAMB）基因上游调控序列进行分析克隆，采用基因重组技术构建pCAT3-LAMBp报告基因载体，与pcDnA3.... 详细信息

肝再生增强因子（ALR）不仅有促进肝细胞再生和抗肝损伤作用，还有一定的抗肝纤维化作用。本研究利用生物信息学技术，对层黏连蛋白B1链（LAMB）基因上游调控序列进行分析克隆，采用基因重组技术构建pCAT3-LAMBp报告基因载体，与pcDnA3.1（-）-ALR表达载体共转染cos7细胞，证明ALR的转基因表达对LAMB启动子具有下调作用，使下游CAT基因的表达减弱。本研究为阐明ALR的生物学作用和抗肝纤维化用用提供新的实验及理论基础。

关键词：肝纤维化层黏连蛋白人肝再生增强因子

大鼠EAAT3真核表达载体的构建及在Hella细胞中的表达

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第四军医大学学报 2008年第3期29卷 204-207页

作者：晁晓东费舟张磊李娟仝武军第四军医大学西京医院神经外科研究所陕西西安710033

目的:克隆大鼠谷氨酸转运蛋白3(EAAT3)的cDnA,构建其真核表达载体并转染Hella细胞.方法:从大鼠的脑组织中提取RnA,采用RT-PCR技术扩增EAAT3的基因编码区序列,将序列定向克隆至真核表达载体pcDnA3.1(+).经酶切及测序鉴定后用阳离子脂质... 详细信息

目的:克隆大鼠谷氨酸转运蛋白3(EAAT3)的cDnA,构建其真核表达载体并转染Hella细胞.方法:从大鼠的脑组织中提取RnA,采用RT-PCR技术扩增EAAT3的基因编码区序列,将序列定向克隆至真核表达载体pcDnA3.1(+).经酶切及测序鉴定后用阳离子脂质体将其转染到Hel-la细胞中,通过免疫印迹法鉴定其表达.结果:经双酶切、测序鉴定证实EAAT3基因的真核表达载体构建成功.免疫印迹法证实EAAT3基因的表达.结论:成功克隆了EAAT3编码区序列,并构建了其真核表达载体,为以EAAT3为基础的中枢神经系统疾病的治疗奠定了基础.

关键词：载体蛋白质类谷氨酸真核表达载体

人β防御素-2稳定表达细胞株的建立及其表达产物对耐药大肠埃希菌抗菌活性研究

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免疫学杂志 2014年第8期30卷 704-706,711页

作者：杨剑陈新年李娟陈逸轩陈文莉兰州大学基础医学院病理生理研究所 730000

目的建立稳定表达人β防御素2(hBD2)的cos-7细胞株,并检测其表达产物对耐药大肠埃希菌的抗菌活性。方法将重组hBD2真核表达载体pCMV-hBD2通过脂质体转染cos-7细胞,筛选稳定表达hBD2单克隆细胞株;经RT-PCR和Western blot检测稳定转染后... 详细信息

目的建立稳定表达人β防御素2(hBD2)的cos-7细胞株,并检测其表达产物对耐药大肠埃希菌的抗菌活性。方法将重组hBD2真核表达载体pCMV-hBD2通过脂质体转染cos-7细胞,筛选稳定表达hBD2单克隆细胞株;经RT-PCR和Western blot检测稳定转染后目的基因在转录水平和蛋白水平的表达;用微量稀释法检测稳定转染后细胞培养上清液对耐药大肠埃希菌的抗菌作用。结果筛选出稳定表达hBD2的cos-7细胞株,检测到目的基因在转录水平和蛋白水平均有表达,且其表达产物使耐药大肠埃希菌存活率降至15%。结论建立了稳定表达hBD2的cos-7细胞株,其表达产物对耐药大肠埃希菌具有一定的抗菌活性。

关键词：人β防御素-2 稳定表达耐药大肠埃希菌抗菌活性

hBD1稳定表达细胞株的建立及其表达产物对多重耐药菌的活性检测

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中华微生物学和免疫学杂志 2011年第12期31卷 1138-1142页

作者：崔南陈新年魏莲花李娟邹凤梅兰州大学基础医学院病理生理研究所 730000 甘肃省新药临床前研究重点实验室甘肃省人民医院

目的构建人β防御素1（ hBD1）稳定表达细胞株并检测其对多种多重耐药菌的抗菌活性.方法将重组质粒pCMV-hBD1通过阳离子脂质体转染于非洲绿猴SV40转化的肾细胞（cos-7细胞）,经过G418压力筛选后获得单克隆细胞株；提取细胞总RnA,用RT-... 详细信息

目的构建人β防御素1（ hBD1）稳定表达细胞株并检测其对多种多重耐药菌的抗菌活性.方法将重组质粒pCMV-hBD1通过阳离子脂质体转染于非洲绿猴SV40转化的肾细胞（cos-7细胞）,经过G418压力筛选后获得单克隆细胞株；提取细胞总RnA,用RT-PCR检测目的基因在转录水平的表达；收集细胞培养上清液,用Western blot检测hBD1基因蛋白的表达；将含有表达产物hBD1的细胞培养上清液分别同各耐药菌液混合,37℃孵育不同时间后涂布于LB平板,以各实验组和对照组的菌落数的比值作为该耐药菌的存活率.结果经过G418压力筛选所得到的稳定表达细胞株,在转录水平和蛋白水平均检测到目的基因hBD1的表达,在表达产物hBD1的作用下,多重耐药鲍氏不动杆菌、多重耐药大肠埃希菌存活率和多重耐药肺炎克雷伯杆菌的存活率可以分别降至9%、22%和50%,多重耐药嗜麦芽窄食单胞菌的存活率同对照组没有明显差异.结论成功获得hBD1稳定表达细胞株,目的基因hBD1的表达产物对多种多重耐药菌均具有抗菌活性.

关键词：人β防御素1 稳定表达多重耐药生物活性