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里氏木霉GH61家族糖苷酶的高效表达及酶学特性研究

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微生物学通报 2014年第7期41卷 1261-1269页

作者：冯飞王绍文王娟刘刚深圳市微生物基因工程重点实验室深圳大学生命科学学院广东深圳518060

【目的】GH61家族糖苷水解酶具有葡聚糖氧化酶活性,通过对葡聚糖链的随机氧化而破坏木质纤维素的结晶结构,从而使木质纤维素容易被纤维素酶降解。重组表达、纯化获得里氏木霉的GH61家族糖苷水解酶(TrGH61,原名为EGⅣ),并研究其在纤维素... 详细信息

【目的】GH61家族糖苷水解酶具有葡聚糖氧化酶活性,通过对葡聚糖链的随机氧化而破坏木质纤维素的结晶结构,从而使木质纤维素容易被纤维素酶降解。重组表达、纯化获得里氏木霉的GH61家族糖苷水解酶(TrGH61,原名为EGⅣ),并研究其在纤维素酶水解木质纤维素中的作用。【方法】通过Overlap PCR将里氏木霉丙酮酸脱羧酶的启动子、纤维二糖水解酶cbh1的信号肽、EGⅣ基因和PDC终止子依次连接构建了里氏木霉的表达盒,通过该表达盒使TrGH61蛋白基因整合到里氏木霉的基因组DNA上进行同源表达。研究表达产物TrGH61的水解活性、与纤维素酶水解协同效应,以及TrGH61作为金属氧化酶的特性研究。【结果】在PDC启动子的作用下,TrGH61得到高效表达,摇瓶培养的表达量达到2.33 g/l。TrGH61有微弱的内切葡萄糖苷酶活性,比活力为0.02 IU/mg,但能显著提高纤维素酶水解稻草粉的活性,协同度最高可达1.998。低浓度的金属离子Cu2+、Co2+和还原性电子供体还原型谷胱甘肽、l-抗坏血酸、焦性没食子酸均能显著促进其水解效应。TrGH61能够降低稻草粉纤维素聚合度和结晶度。【结论】通过PDC启动子可以实现TrGH61蛋白高效组成型表达,TrGH61作为纤维素酶活性促进因子,通过破坏纤维素结晶结构作用机制协同增强纤维素酶水解木质纤维素。

关键词：里氏木霉纤维素酶 GH61糖苷酶金属氧化酶协同作用

高锰酸钾改性汉麻秆芯对亚甲基蓝吸附性能的研究

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林产化学与工业 2018年第6期38卷 81-87页

作者：许鹏博何晶俞娟范一民南京林业大学化学工程学院江苏南京210037

以汉麻秆芯(HP)为原料,通过高锰酸钾对其进行氧化改性制备高锰酸改性汉麻秆芯(K-HP),并研究改性前后汉麻秆芯对亚甲基蓝染料的吸附性能,探讨了溶液初始质量浓度、吸附时间、吸附温度和溶液pH值对其吸附性能的影响。结果表明:经高锰酸钾... 详细信息

以汉麻秆芯(HP)为原料,通过高锰酸钾对其进行氧化改性制备高锰酸改性汉麻秆芯(K-HP),并研究改性前后汉麻秆芯对亚甲基蓝染料的吸附性能,探讨了溶液初始质量浓度、吸附时间、吸附温度和溶液pH值对其吸附性能的影响。结果表明:经高锰酸钾改性后,汉麻秆芯中引入了新的Mn—O键,部分羟基被氧化成羧基,但汉麻秆芯的颗粒尺寸结构没有变化;汉麻秆芯的吸附量随亚甲基蓝溶液初始质量浓度的增加而升高,但染料去除率随之降低;当吸附温度为25℃,pH值为5,在10 m l亚甲基蓝溶液中添加0.010 0 g吸附剂时,HP的最大吸附量达71 mg/g,吸附平衡时间为30 min,K-HP最大吸附量增加到199 mg/g,吸附平衡时间为60 min; HP和K-HP对亚甲基蓝的吸附性能在25～45℃范围内不受影响,最优pH值为5;等温吸附模型拟合结果表明:HP和K-HP的吸附过程符合langmuir模型,说明吸附过程为理想的单分子层吸附;动力学吸附模型拟合结果表明:HP和K-HP的吸附过程符合准二级动力学模型,说明吸附速率主要受化学吸附机理控制。

关键词：汉麻秆芯化学改性吸附亚甲基蓝

聚合物电解质层层组装脂质纳米粒提高多柔比星的口服吸收

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药学学报 2016年第7期51卷 1136-1143页

作者：沈爱俊夏登宁甘勇李娟中国药科大学江苏南京210009 中国科学院上海药物研究所上海201203

载多柔比星(DOX)脂质纳米粒经聚合物电解质层层组装后,增加脂质纳米粒在胃肠道内的酶稳定性,以提高DOX的口服吸收。采用热熔均质-超声法制备了载DOX脂质纳米粒;利用静电作用将带相反电荷的聚合物电解质γ-聚谷氨酸(γ-PGA)和壳聚糖(chit... 详细信息

载多柔比星(DOX)脂质纳米粒经聚合物电解质层层组装后,增加脂质纳米粒在胃肠道内的酶稳定性,以提高DOX的口服吸收。采用热熔均质-超声法制备了载DOX脂质纳米粒;利用静电作用将带相反电荷的聚合物电解质γ-聚谷氨酸(γ-PGA)和壳聚糖(chitosan,CS)层层组装在脂质纳米粒表面,得到聚合物电解质层层组装的载DOX脂质纳米粒(DOX-NPs/CS/γ-PGA);采用动态光散射激光粒度仪测定了纳米粒的粒径、粒度分布及zeta电位;考察聚合物电解质层层组装后的脂质纳米粒的体外药物释放和在体外模拟消化道环境下的酶解稳定性;以人结肠癌细胞Caco-2为细胞模型,对纳米粒的摄取进行了研究;以SD大鼠为动物模型对口服吸收后的药物动力学进行了研究。结果表明,制备的DOX-NPs/CS/γ-PGA平均粒径为180.6±5.4 nm,粒度分布均一,多分散性指数(PDI)为0.220±0.02,zeta电位为-38.53±0.29 m V;体外药物释放研究表明,采用聚合物电解质在脂质纳米粒表面层层组装后延缓DOX的释放,同时降低脂质纳米粒被脂肪酶降解的速率;细胞摄取实验研究表明,该组制剂的细胞摄取明显高于DOX溶液组;动物实验研究表明,经聚合物电解质层层组装后的脂质纳米粒可明显提高DOX的口服吸收,DOX-NPs/CS/γ-PGA的Cmax和tmax分别为0.76±0.25μg·m l-1和0.5 h,AUC0-24 h是溶液参比制剂的3.02倍,与DOX溶液口服组相比,其相对生物利用度是302.46%。通过聚合物电解质在脂质纳米载体表面进行层层组装,延缓了药物释放,降低了消化道酶对载体的酶解,增加了其在消化道内的稳定性,提高了DOX的口服吸收。

关键词：多柔比星聚合物电解质层层组装脂质纳米粒口服吸收

再生水补给型城市景观水体中抗生素抗性基因的污染特征——以圆明园为例

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环境科学学报 2019年第12期39卷 4057-4063页

作者：陈惠鑫佟娟陈奕童程荣郑祥中国人民大学环境学院北京100872 中国科学院生态环境研究中心北京100085

由于抗生素抗性基因(Antibiotic Resistance Genes,ARGs)对环境和人类健康存在潜在威胁而逐渐受到人们的重视,高人口密度城市中典型景观水体是ARGs储存库和传播媒介.本研究采用实时荧光定量PCR技术,研究了圆明园不同点位的ARGs污染情况... 详细信息

由于抗生素抗性基因(Antibiotic Resistance Genes,ARGs)对环境和人类健康存在潜在威胁而逐渐受到人们的重视,高人口密度城市中典型景观水体是ARGs储存库和传播媒介.本研究采用实时荧光定量PCR技术,研究了圆明园不同点位的ARGs污染情况和分布特征.结果表明:园区中ARGs的绝对丰度范围在n.d.(未检出)~1.08×10^9copies·l^-1之间;园区进水口目标ARGs的丰度低于末端,表明封闭的水体可能为ARGs的积累提供了理想培养基.在所检测基因中,磺胺类ARGs占主导,ARGs的绝对丰度依次为:sulII>sulI>mefA>tetQ>tetM>ermB.磺胺类ARGs与指示微生物粪大肠菌群和大肠杆菌间存在显著相关性,表明指示微生物在ARGs的传播中可能起着关键作用.

关键词：抗生素抗性基因(ARGs) 城市景观水体分布特征指示微生物

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电化学阶边精饰法制备钯镍合金纳米线的研究

物理化学学报 2005年第6期21卷 602-606页

作者：苑娟肖耀坤余刚胡波年叶立元湖南大学化学化工学院长沙410082 湖南建材高等专科学校衡阳421008

运用连续恒电势三脉冲的电化学阶边精饰法在高定向石墨(HOPG)上制备钯镍合金纳米线阵列,并研究了合金成分的影响因素.结果表明,改变镀液组成可以调整钯镍合金成分,调整生长时间和生长电势来控制钯镍合金纳米线的直径.用7mmo·ll-1PdCl2,... 详细信息

运用连续恒电势三脉冲的电化学阶边精饰法在高定向石墨(HOPG)上制备钯镍合金纳米线阵列,并研究了合金成分的影响因素.结果表明,改变镀液组成可以调整钯镍合金成分,调整生长时间和生长电势来控制钯镍合金纳米线的直径.用7mmo·ll-1PdCl2,3mmo·l-1NiSO4,0.2mo·ll-1NH4Cl,pH8.5的混合溶液,控制脉冲电势-2.0V形核0.2s,在脉冲电势-0.4V生长1h,可以获得平均直径为200nm,长度约400μm的钯镍合金纳米线阵列,纳米线的合金成分中镍含量为12.4%(质量分数,w).

关键词： Pd-Ni合金,纳米线,恒电势脉冲,电化学阶边精饰法,制备

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响应面优化石橄榄总黄酮的提取工艺研究

河南工业大学学报（自然科学版） 2015年第2期36卷 89-95页

作者：陈文娟陈建福漳州城市职业学院食品工程系福建漳州363000 漳州职业技术学院农产品深加工及安全福建省高校应用技术工程中心福建漳州363000

以乙醇为溶剂,采用热浸提法提取石橄榄总黄酮.在单因素试验基础上,根据Box-Behnken中心组合设计原理,设计了4因素3水平试验,利用Design-Expert 8.05b软件进行响应面分析,建立了石橄榄总黄酮提取的四元二次回归方程,经检验该回归方程合... 详细信息

以乙醇为溶剂,采用热浸提法提取石橄榄总黄酮.在单因素试验基础上,根据Box-Behnken中心组合设计原理,设计了4因素3水平试验,利用Design-Expert 8.05b软件进行响应面分析,建立了石橄榄总黄酮提取的四元二次回归方程,经检验该回归方程合理可靠,能够较好地预测石橄榄总黄酮的提取率.对石橄榄总黄酮提取的最佳工艺条件进行了优化,结果表明,提取温度对总黄酮的提取率影响最大,其次为乙醇体积分数,提取时间和液料比影响较小,最佳工艺条件为提取温度66℃、乙醇体积分数65%、液料比30 m l·g-1、提取时间151 min,该条件下总黄酮提取率为1.23%,与理论值基本(1.24%)相差较小,相对误差为0.81%,充分验证了该模型的有效性.

关键词：石橄榄总黄酮提取优化

一株加纳链霉菌种子培养工艺及移种标准的研究

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中国畜牧杂志 2014年第7期50卷 79-84页

作者：黄艳赵春田裘娟萍浙江工业大学生物与环境工程学院浙江杭州310014

本研究为提高黄霉素的发酵效价及发酵稳定性，对加纳链霉菌种子培养工艺、生长特性及移种标准进行研究。结果表明：斜面移种标准为平板单菌落移种第一代斜面，菌龄8d；种子摇瓶培养的最佳培养条件为采用具挡板摇瓶、温度34℃、pH7．0；... 详细信息

本研究为提高黄霉素的发酵效价及发酵稳定性，对加纳链霉菌种子培养工艺、生长特性及移种标准进行研究。结果表明：斜面移种标准为平板单菌落移种第一代斜面，菌龄8d；种子摇瓶培养的最佳培养条件为采用具挡板摇瓶、温度34℃、pH7．0；液体种子移种标准为菌浓35％-41％，pH值二次回落6．9-7．0，还原糖28．8--30g/l，氨态氮二次回落1．05～2．57mg／l，种龄44～48h。摇瓶实验结果显示，使用最佳培养工艺及移种标准，黄霉素的最终效价提高了32．5％．不N批次间的差异低于7％。该实验为提高黄霉素发酵效价和发酵稳定性提供参考。

关键词：加纳链霉菌黄霉素种子培养工艺生长特性移种标准

镜泊湖浮游藻类组成及其与环境因子的相关分析

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中国环境科学 2015年第11期35卷 3403-3413页

作者：汪星刘录三李黎周娟王瑜夏甫夏阳中国环境科学研究院环境基准与风险评估国家重点实验室北京100012 中国环境科学研究院国家环境保护河口与海岸带环境重点实验室北京100012 北京中环国宏环境资源科技有限公司北京100012

2013年5月、9月及10月在镜泊湖26个采样位点共采集到浮游藻类8门74属140种.其中绿藻门最多,共58种,占41.5%.浮游藻类组成以绿藻和硅藻占优,并且藻类群落结构存在明显的时空差异,各调查位点藻的种类范围在3~35种,密度范围在0.5×104~230.... 详细信息

2013年5月、9月及10月在镜泊湖26个采样位点共采集到浮游藻类8门74属140种.其中绿藻门最多,共58种,占41.5%.浮游藻类组成以绿藻和硅藻占优,并且藻类群落结构存在明显的时空差异,各调查位点藻的种类范围在3~35种,密度范围在0.5×104~230.8×104个/l.调查期间,浮游藻类的Margalef指数、Shanoon-Wienner指数以及Pieloud指数范围分别为0.48~2.31,1.27~3.97,0.45~0.94,水体综合营养状态指数值TlI在40~60之间,总的来看,镜泊湖水体属于中营养-轻度富营养状态.Pearson相关分析结果显示,镜泊湖藻类群落分布受水环境因子影响明显.整体上,水温、DO、SD、CODMn及NH3-N是影响镜泊湖藻类种群分布格局的主要因素.

关键词：镜泊湖藻类组成营养等级环境因子

大流量PUF捕集气相色谱法同时测定大气中的毒死蜱、哒螨灵、甲氰菊酯和功夫菊酯

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生态与农村环境学报 2013年第1期29卷 122-127页

作者：孙娟王娜石利利陈国松南京工业大学理学院江苏南京210044 环境保护部南京环境科学研究所江苏南京210042

建立了同时测定大气中毒死蜱、哒螨灵、甲氰菊酯和功夫菊酯的快速分析方法。采用大流量PUF捕集法采集大气样品,以正己烷作为提取溶剂,采用索氏提取、气相色谱-电子俘获检测法测定样品中目标污染物浓度,外标法定量。4种农药的线性范围在0... 详细信息

建立了同时测定大气中毒死蜱、哒螨灵、甲氰菊酯和功夫菊酯的快速分析方法。采用大流量PUF捕集法采集大气样品,以正己烷作为提取溶剂,采用索氏提取、气相色谱-电子俘获检测法测定样品中目标污染物浓度,外标法定量。4种农药的线性范围在0.05～1 mg.l-1之间,相关系数均大于0.999;大气样品中4种农药的平均回收率在80.94%～112.43%之间,相对标准偏差(变异系数)为0.97%～8.58%;大气中毒死蜱、哒螨灵、甲氰菊酯和功夫菊酯的最低检出限分别为0.016 7、0.028 7、0.045 6和0.016 2 mg.m-3。该检测方法可用于农药厂周边大气中农药污染物浓度的测定。

关键词： PUF采样器气相色谱法毒死蜱哒螨灵甲氰菊酯功夫菊酯