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活性氧在柠檬醛抑制黄曲霉产毒过程中的作用

核农学报 2016年第7期30卷 1316-1322页

作者：李金寒商博梁丹丹 jonathan nimal selvaraj 鲁志松刘阳中国农业科学院农产品加工研究所/农业部农产品加工综合性重点实验室北京100193 西南大学洁净能源与先进材料研究院/洁净能源材料与技术重庆市重点实验室重庆400715

为探究ROS在柠檬醛抑制黄曲霉产毒过程中的作用,对柠檬醛作用下黄曲霉细胞释放ROS的含量、胞内ROS水平、抗氧化酶类活性和细胞氧化损伤程度的变化进行监测。结果表明,柠檬醛会使黄曲霉细胞内ROS含量明显增多,并部分释放到胞外。与甘油... 详细信息

为探究ROS在柠檬醛抑制黄曲霉产毒过程中的作用,对柠檬醛作用下黄曲霉细胞释放ROS的含量、胞内ROS水平、抗氧化酶类活性和细胞氧化损伤程度的变化进行监测。结果表明,柠檬醛会使黄曲霉细胞内ROS含量明显增多,并部分释放到胞外。与甘油处理组相比,柠檬醛处理组的黄曲霉毒素含量明显较低,柠檬醛作用下的黄曲霉胞内抗氧化酶(CAT、SOD和GSH-Px)活性明显增强,胞内MDA和蛋白质羰基含量明显增大。扫描电镜观察发现,柠檬醛处理组的细胞损伤程度明显高于甘油处理组。综上,黄曲霉在柠檬醛作用下产生ROS,造成黄曲霉氧化损伤,从而抑制黄曲霉毒素的产生。本研究结果对粮食仓储具有一定理论指导意义。

关键词：柠檬醛黄曲霉毒素 ROS 电化学传感器抑制机理

Study on distribution and characterization of Aspergillus flavus strains to screen potential biocontrol agents from different geographical locations of China

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Study on distribution and characterization of Aspergillus fl...

中国菌物学会2016年学术年会

作者： Firew Tafesse Mamo Bo Shang jonathan nimal selvaraj Yan Wang Yang Liu Institute of Food Science and Technology Chinese Academy of Agricultural Sciences/Key Laboratory of Agroproducts ProcessingMinistry of Agriculture

Aflatoxin contamination of crops like peanut,maize and rice is still a major public health and economic problem for the world,the impact is more significant for developing *** promising method for combating aflatoxin formation is biocontrol using competitive exclusion,currently under intensive study in peanut crops in different parts of *** *** strains as a biocontrol must be unable to produce both aflatoxin and cyclopiazonic acids and also must incapable to convert to *** the current study a total of 724 Aspergillus flavus strains isolated from peanut,maize and rice in 21 geographical locations of China were *** these,229 strains did not produce *** incidence of atoxigenic *** strains range from 28-35% from three *** productions in *** isolates were varied significantly among all sampled locations（X220,0.05= 0.012）.Non toxigenic（non AFB1 and CPA） strains were screened for their potential as biocontrol by examining the 28 aflatoxin biosynthesis genes,using a PCR *** which do not have afl R PCR products were selected for analysis of the other 27 biosynthetic *** four strains showed failure,in the,fas-2 and afl J genes,***（67%） of atoxigenic *** strains failed to show a PCR product in 10 or more ***,18 PCR product patterns were observed,usually common to only one or two isolates,exceptionally six of stains have the same（K） deletion pattern,indicating great diversity in the aflatoxin biosynthesis pathway in *** isolates taken from different crops and *** extensive deletions of 10 or more genes in the aflatoxin gene cluster identified in candidate’s nonaflatoxigenic biocontrol *** isolates serve as a safeguard in preventing adverse genetic reversion,thereby ensuring their safe application to agricultural *** genes dma T and mao A could be used a marker genes for CPA production capacity atoxigenic *** control o

关键词： Aflatoxin Cyclopiazonic acid(CPA) Aspergillus flavus atoxigenic strain toxigenic strains biocontrol

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一种分离自南极的新型低温碱性果胶裂解酶

一种分离自南极的新型低温碱性果胶裂解酶

第十一届中国酶工程学术研讨会

作者：唐雨蒙蒋思婧 jonathan nimal selvaraj 刘璐张桂敏生物催化技术湖北省工程实验室湖北大学

果胶裂解酶是切割多聚半乳糖醛酸α-1,4-糖苷键的一种酶类,能有效水解果胶,在纺织、造纸、食品、饲料等方面都有重大的应用价值。Massilia eurypsychrophila是分离自南极阿斯曼丘陵的一个低温菌,对其进行全基因组测序分析以后发现一个... 详细信息

果胶裂解酶是切割多聚半乳糖醛酸α-1,4-糖苷键的一种酶类,能有效水解果胶,在纺织、造纸、食品、饲料等方面都有重大的应用价值。Massilia eurypsychrophila是分离自南极阿斯曼丘陵的一个低温菌,对其进行全基因组测序分析以后发现一个新的果胶裂解酶基因,其编码产物注释为PEL1。序列分析表明它属于果胶裂解酶第6超家族,与己报告的果胶酶最高有66%的序列一致性。异源表达纯化以后进行酶学性质分析,重组蛋白34.7KDa,对多聚半乳糖醛酸有较高的活性,最适反应温度和pH分别为30℃和pH10.0,在10℃到40℃之间保持60%以上的相对活性,在0℃也有25%的相对活性,在30℃保持30分钟残余80%的活性。PEL1的比酶活为78.75U/mg,动力学参数为Km为0.930g/L,V为33.6μmol/min,K为46.67/s,在反应体系中加入浓度为0.5mM的钙离子时,比酶活提高了1.24倍。结构模拟和定向突变表明Arg207对于其活性是必需的,是催化三联体的其中一个。PEL1在低温碱性条件下的比酶活均高于已经报道的果胶酶,具有明显的应用潜力。

关键词：果胶裂解酶低温异源表达比酶活

蜂王浆中磷酸腺苷、核苷和碱基的鉴定及分布规律

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蜂王浆中磷酸腺苷、核苷和碱基的鉴定及分布规律

作者：吴黎明陈兰珍 jonathan nimal selvaraj 岳薇王勇李熠赵静薛晓锋

核苷酸,核苷和碱基广泛存在于在蜂王浆中,并在其生理活性中具有重要作用。本研究旨在开发一种同时测定蜂王浆中的核苷酸,核苷和核苷碱基HPLC方法,并以此作为蜂王浆新鲜度判定指标。该检测方法的LOD和LOQ分别为12.2-99.6μg/L和40.8-289....

核苷酸,核苷和碱基广泛存在于在蜂王浆中,并在其生理活性中具有重要作用。本研究旨在开发一种同时测定蜂王浆中的核苷酸,核苷和核苷碱基HPLC方法,并以此作为蜂王浆新鲜度判定指标。该检测方法的LOD和LOQ分别为12.2-99.6μg/L和40.8-289.4μg/L,回收率接近100.9%。通过对实际样品检测发现,蜂王浆中检测出除尿酸外的全部化合物,且新鲜王浆（2682.93 mg/kg）和商业样品（3152.78 mg/kg）中的平均含量存在显着差异。所有样品中均检测出AMP,腺苷和腺嘌呤,而在所有样品中,AMP、腺苷和腺嘌呤均占主导地位。在新鲜蜂王浆样品中发现ATP、ADP和AMP的含量显着较高,而ATP,ADP和AMP在新鲜蜂蜜中具有较高含量,IMP、尿苷、鸟苷和胸腺嘧啶在商业蜂蜜中具有较高浓度,因此本实验中所研究化合物可用作评估蜂王浆新鲜度和品质的指标。

关键词：

碱性果胶酶PEL168的分子改造和在生物煮练中的应用

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碱性果胶酶PEL168的分子改造和在生物煮练中的应用

第十一届中国酶工程学术研讨会

作者：望潇文卢争辉 jonathan nimal selvaraj 蒋思婧易犁张桂敏生物催化技术湖北省工程实验室湖北大学

碱性果胶酶可用于苎麻脱胶和棉织物前处理的精练工艺,与传统的高温碱煮方法相比,具有保护纤维、降低能耗、水耗等优势。碱性果胶酶PEL168的比酶活为353 U/mg,在50℃时的半衰期为2 h,该蛋白的晶体结构已经被解析。本研究基于对PEL168的... 详细信息

碱性果胶酶可用于苎麻脱胶和棉织物前处理的精练工艺,与传统的高温碱煮方法相比,具有保护纤维、降低能耗、水耗等优势。碱性果胶酶PEL168的比酶活为353 U/mg,在50℃时的半衰期为2 h,该蛋白的晶体结构已经被解析。本研究基于对PEL168的结构分析,分别从增加盐桥,增加二硫键、增加局部结构的柔韧性等方面进行理性设计提高PEL168的比酶活和稳定性,但是大部分设计都造成了酶活的降低或者完全失活,只得到了一个比酶活提高1.32倍,pH稳定性提高的突变体V132F。因此采用随机突变进行改造,利用error-prone P℃R建立突变体文库,通过果胶底物平板初筛和96孔板复筛得到一个比酶活提高1.81倍的突变体K47E（640U/mg）,在50℃时的半衰期也延长至4.5h。鉴于有利突变的累积效应,将突变位点V132F和K47E进行组合,得到双突变体K47EN132F,其比酶活提高至873 U/mg。由于第47号位点的突变是随机得到的,暗示该位点对PEL168的比酶活有着重要的影响,随后以双突变体K47EN132F为模板对47号位点进行定点饱和突变,筛选到比酶活提高至1388 U/mg的突变体K47D/V132F。最后根据文献报道的嗜热果胶酶或者最适温度较高的碱性果胶酶与PEL168进行同源序列比对,在活性中心附近确定了突变位点R272W/Y,最后获得突变体K47D/V132F/R272W,相对于野生型,其比酶活提高了4.37倍（1544 U/mg）,在50℃时的半衰期延长至5.6 h,动力学参数测定发现其催化效率也明显提高。结构分析发现K47D/V132F/R272W催化三联体的空间距离增加,使得底物更加容易与活性中心结合,且非共价键的增加使得催化三联体的结构也变得更加稳定,从而突变体的比酶活提高;47号位点氨基酸残基处的氢键增加,整个突变体的折叠自由能降低,使蛋白结构变得更加稳定可能是热稳定性增加的原因。为了测试该碱性果胶酶生物精练的效果,用胚布进行了酶法煮练的小试,发现用突变体酶K47D/V132F/R272W处理胚布后,胚布的润湿性明显增强,润湿圈面积为14.13 cm2,布料也变得更加柔软,而未经酶处理的布润湿性很差,润湿圈面积只有2.00 cm2。扫描电子显微镜（SEM）观察也发现经过酶处理后的纤维表面更加光滑。

关键词：碱性果胶酶结构分析理性设计比酶活稳定性能

Bmp8a和Bmp8b基因在体外培养小鼠卵巢颗粒细胞中的表达

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中国农业大学学报 2013年第3期18卷 108-114页

作者：王建起 selvaraj J.nimal 曹文广中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

为研究体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞Bmp8a和Bmp8b基因的表达情况,用10IU PMSG皮下注射21～23日龄健康雌性ICR小白鼠,48h后刺破卵泡获取颗粒细胞,置入10%FBS的DMEM/F12中体外培养5d,用Trizol提取总RNA,RT-PCR验证后切取目的 DNA片段进行... 详细信息

为研究体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞Bmp8a和Bmp8b基因的表达情况,用10IU PMSG皮下注射21～23日龄健康雌性ICR小白鼠,48h后刺破卵泡获取颗粒细胞,置入10%FBS的DMEM/F12中体外培养5d,用Trizol提取总RNA,RT-PCR验证后切取目的 DNA片段进行测序。RT-PCR测序结果表明体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞可扩增BMP-8atranscript variant 2和BMP-8b的mRNA序列,不扩增BMP-8atranscript variant 1的mRNA序列。结果显示体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞可表达BMP-8atranscript variant 2和Bmp8b基因。

关键词：小鼠卵巢颗粒细胞 Bmp8a Bmp8b

Bmp8a和Bmp8b基因在体外培养小鼠卵巢颗粒细胞中的表达

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中国畜牧兽医文摘 2014年第4期30卷 115-115页

作者：王建起 selvaraj J.nimal 曹文广中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

为研究体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞Bmp8a和Bmp8b基因的表达情况，用IOIUPMSG皮下注射21-23日龄健康雌性IcR小白鼠，48h后刺破卵泡获取颗粒细胞，置入10％FBS的DMEM／F12中体外培养5d，

关键词：卵巢颗粒细胞体外培养 b基因小鼠 DMEM F12 皮下注射小白鼠 IcR