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抗端粒酶核酶质粒的构建筛选及其对CNE-2Z细胞增殖与凋亡的影响

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癌症 2004年第1期23卷 50-55页

作者：赵颖海陈小毅 john R.arrand 广东医学院病理学教研室广东湛江524023 Institute for Cancer Studies University of BirminghamVincent DriveBirmingham B15 2TTUK

背景与目的:已证实端粒酶(telomerase,TLMA)对肿瘤的进展和肿瘤细胞的无限增殖起着重要的决定作用。核酶是具有特殊核酸内切酶活性的反义RNA,可序列特异性地与靶RNA分子配对并切割靶基因RNA。有报道人低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞端粒酶阳性... 详细信息

背景与目的:已证实端粒酶(telomerase,TLMA)对肿瘤的进展和肿瘤细胞的无限增殖起着重要的决定作用。核酶是具有特殊核酸内切酶活性的反义RNA,可序列特异性地与靶RNA分子配对并切割靶基因RNA。有报道人低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞端粒酶阳性,本实验目的是构建抗端粒酶RNA模板区特异性核酶的真核表达载体并用电穿孔法将其导入人低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞,研究该核酶对CNE-2Z细胞增殖、凋亡的影响。方法:设计合成针对端粒酶RNA模板区的锤头状核酶基因teloRZ作为端粒酶抑制剂,构建3种带有绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)报道基因和嘌呤霉素(puromycin)抗性基因的teloRZ真核表达质粒pGFPuro-teloRZ2.1、pGFPuro-teloRZ7.1、pGFPuro-teloRZ7.7,这3种质粒的不同点在于teloRZ基因和puromycin抗性基因按3种不同方向设计,然后将上述3种质粒及载体质粒pPAT-GFP电转染CNE-2Z细胞,用荧光显微镜检测GFP表达情况;用流式细胞仪、荧光染色法检测细胞增殖指数及凋亡等指标。结果:CNE-2ZGTR7.1细胞(转染目的基因质粒pGFPuro-teloRZ7.1的CNE-2Z细胞)增殖指数(25.100±0.141)%明显低于CNE-2Z细胞(未转染质粒的细胞)的(53.663±16.981)%、CNE-2ZG细胞(转染空载质粒pPAT-GFP的CNE-2Z细胞)的(61.575±5.166)%、CNE-2ZGTR2.

关键词：抗端粒酶核酶质粒构建筛选 CNE-2Z 细胞增殖凋亡鼻咽癌

EBV-LMP1对鼻咽癌细胞系CNE1细胞转移相关因素的影响

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癌症 2003年第5期22卷 481-485页

作者：苟新敏陈燕陈小毅 john R arrand 广东医学院病理教研室广东湛524023 Institute for Cancer Studies University of BirminghamVincentDrive

背景与目的:已证实EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)编码的潜伏膜蛋白1(latentmembraneprotein1,LMP1)能够诱导鼻咽癌细胞中基质金属蛋白酶9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)的表达。本实验的目的是观察EB病毒潜伏膜蛋白1(EBV-LMP1)对鼻咽癌细胞系CNE1细胞转移相关因素的影响,探讨LMP1在鼻咽癌侵袭、转移过程中的作用。方法:用免疫组化法及Westernblot法检测CNE1-GL(转染LMP1基因的CNE1细胞)和CNE1细胞中MMP-9的表达情况;用细胞-基质粘附实验、细胞运动实验和肿瘤细胞重组基底膜侵袭实验检测LMP1对CNE1细胞粘附、运动及侵袭能力的影响。结果:免疫组化法及Westernblot法结果均显示CNE1-GL细胞中MMP-9的表达明显高于CNE1细胞(P<0.05);肿瘤细胞-基质粘附实验结果显示,CNE1-GL的粘附能力(平均吸光度值为1.2508±0.0711),高于CNE1细胞(平均吸光度值为0.9519±0.068),两者相比差异有显著性(P<0.01)。运动实验及重组基底膜侵袭实验结果均显示,穿过游离的聚乙烯吡咯烷酮膜(polyvinylpyrroli-done-free,PVP-F)的CNE1-GL细胞数明显高于CNE1细胞(P<0.01)。结论:LMP1能够诱导CNE1细胞中MMP-9的表达,且增强CNE1细胞与基底膜的粘附能力、运动能力及侵袭能力。

关键词： EBV-LMPl 鼻咽癌细胞系 CNEl细胞转移相关因素

Epstein-Barr病毒特异性T细胞对重组痘苗病毒表达LMP和EBNA2的靶细胞的识别

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病毒学报 1991年第2期7卷 125-131页

作者：陈小毅 A.Ghosh M.Moore john arrand 广东湛江医学院病理教研室英国曼彻斯特柏特森癌症研究院免疫学实验室英国曼彻斯特柏特森癌症研究院分子生物学实验室

本文用EB病毒转化自体淋巴细胞所建立的类淋巴母细胞系(LCL),以及用EB病毒潜伏感染膜蛋白(LMP)基因和核蛋白-2(EBNA2)基因与痘苗病毒重组的重组病毒(Vac-LMP和Vac-EBNA2)感染的自身纤维母细胞,同时作为刺激细胞和靶细胞,以^(51)Cr释放... 详细信息

本文用EB病毒转化自体淋巴细胞所建立的类淋巴母细胞系(LCL),以及用EB病毒潜伏感染膜蛋白(LMP)基因和核蛋白-2(EBNA2)基因与痘苗病毒重组的重组病毒(Vac-LMP和Vac-EBNA2)感染的自身纤维母细胞,同时作为刺激细胞和靶细胞,以^(51)Cr释放法检测5例血清中EB病毒VCA—IgA抗体阳性者及1例阴性健康者外周血单个核细胞(PBMC)的特异性T细胞杀伤效应。结果表明,用自身LCL激活的EB病毒特异性T细胞杀伤效应高峰出现在第14～28天;参与杀伤性细胞免疫反应的T细胞亚群主要是T3、T8阳性的细胞毒性T细胞,其对靶细胞的识别及杀伤受HLA-I的限制。用重组牛痘病毒感染的纤维母细胞作靶细胞或刺激细胞,有1例供者可接受LMP,另1例可接受EBNA2的刺激,并对相应的靶细胞产生特异性T细胞杀伤反应,表明EB病毒-LMP和EBNA2可能既是EB病毒特异性T细胞的刺激抗原,又是其识别的靶抗原。

关键词： EB病毒重组痘苗病毒特异T细胞

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人6型疱疹病毒糖蛋白H基因测序与表达

中华微生物学和免疫学杂志 1996年第3期16卷 207-210页

作者：孙宁 johnRarrand 广东医学院病理学教研室湛江524023 paterson癌症研究院分子生物学实验

用随机双脱氧核苷酸链末端终止法对人６型疱疹病毒糖蛋白Ｈ基因进行ＤＮＡ序列测定，找出开读框架，将其大部分插入到质粒ｐＥＴ３ＣＰ并分别转染大肠杆菌株ＢＬ２１，ＰＬＹＳＳ和ＰＬＹＳＥ。＾３５Ｓ甲硫氨基酸掺入试验表明，带有部... 详细信息

用随机双脱氧核苷酸链末端终止法对人６型疱疹病毒糖蛋白Ｈ基因进行ＤＮＡ序列测定，找出开读框架，将其大部分插入到质粒ｐＥＴ３ＣＰ并分别转染大肠杆菌株ＢＬ２１，ＰＬＹＳＳ和ＰＬＹＳＥ。＾３５Ｓ甲硫氨基酸掺入试验表明，带有部分ＨＨＶ－６ｇＨ基因片段的ｐＥＴ３ＣＰ质粒，可在上述大肠杆菌株表达，分子量约为３７×１０＾３。

关键词：人6型疱疹病毒糖蛋白H 测序表达

第六型人疱疹病毒糖蛋白H基因的确认和在大肠杆菌中的表达

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广东医学院学报 1991年第3期10卷 151-155页

作者：孙宁 john R arrand 湛江医学院病理教研室英国曼彻斯特帕特逊癌症研究院分子生物学实验室

新发现的一种DNA病毒(第六型人疱疹病毒,HHV-6),是疱疹病毒家族成员。用随机法对HHV-6 DNA BamHⅠ8Kb片段进行克隆,并测定其核苷酸序列后,与其它疱疹病毒对比,发现了HHV-6编码糖蛋白H(gH)的基因,它与人细胞肥大病毒(HCMV)的gH有高达46... 详细信息

新发现的一种DNA病毒(第六型人疱疹病毒,HHV-6),是疱疹病毒家族成员。用随机法对HHV-6 DNA BamHⅠ8Kb片段进行克隆,并测定其核苷酸序列后,与其它疱疹病毒对比,发现了HHV-6编码糖蛋白H(gH)的基因,它与人细胞肥大病毒(HCMV)的gH有高达46％的相似率。找出它的读码框架后,将其大部份克隆到质粒pET3CP并分别转染大肠杆菌株BL21、PLYSS和PLYSE.^(35)S甲硫氨基酸掺入试验表明,带有部份HHV-6gH基因片段的pET3CP质粒,可在上述大肠杆菌株表达。HHV-6gH基因的确定和表达,对今后研究HHV-6和其它疱疹病毒的诊断、治疗将有重要作用.

关键词：第六型人疱疹病毒序列分析糖蛋白H 表达

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鼻咽癌的比较基因组杂交研究

临床与实验病理学杂志 2002年第5期18卷 503-505页

作者：姚运红陆元志孙宁陈小毅 john R arrand 广东医学院病理学教研室湛江524023 英国曼彻斯特Paterson研究所分子生物学实验室

目的 :研究鼻咽癌的遗传变异特性。方法 :采用激光微切割技术分离鼻咽癌细胞DNA ,用比较基因组杂交检测 6例鼻咽癌组织。结果 :6q1 2 2 2、8q染色体区域的扩增 ,染色体 1 1 q2 3 2 4、1 3q基因缺失。结论 :鼻咽癌具有染色体变异 ,其中... 详细信息

目的 :研究鼻咽癌的遗传变异特性。方法 :采用激光微切割技术分离鼻咽癌细胞DNA ,用比较基因组杂交检测 6例鼻咽癌组织。结果 :6q1 2 2 2、8q染色体区域的扩增 ,染色体 1 1 q2 3 2 4、1 3q基因缺失。结论 :鼻咽癌具有染色体变异 ,其中 6q1 2 2 2、8q、1 1 q2 3 2 4和 1

关键词：鼻咽癌比较基因组杂交诊断

抗端粒酶模板区核酶诱导鼻咽癌细胞凋亡的实验研究

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肿瘤防治杂志 2004年第1期11卷 38-42页

作者：赵颖海蔡康荣陈小毅 arrand john R. 广东医学院病理学教研室广东湛江524023 广东医学院分析中心广东湛江524023 Paterson癌症研究所

目的 :研究端粒酶RNA模板区特异性核酶对人低分化鼻咽癌CNE 2Z细胞增殖、凋亡的影响。方法 :用电转染的方法将带有绿色荧光蛋白GFP报道系统的端粒酶核酶基因的真核表达质粒PGFPuro teloRZ7 1及空载质粒PPAT GFP导入人低分化鼻咽癌CNE 2... 详细信息

目的 :研究端粒酶RNA模板区特异性核酶对人低分化鼻咽癌CNE 2Z细胞增殖、凋亡的影响。方法 :用电转染的方法将带有绿色荧光蛋白GFP报道系统的端粒酶核酶基因的真核表达质粒PGFPuro teloRZ7 1及空载质粒PPAT GFP导入人低分化鼻咽癌CNE 2Z细胞 ;检测转染细胞的GFP表达情况、细胞增殖指数及凋亡。结果 :CNE 2ZGTR7 1细胞 (转染目的基因质粒PGFPuro teloRZ7 1的CNE 2Z细胞 )和CNE 2ZG细胞 (转染空载质粒PPAT GFP的CNE 2Z细胞 )有GFP表达 ,而未转染的CNE 2Z细胞无GFP表达。流式细胞仪检测显示 ,CNE 2ZGTR7 1细胞增殖指数 [(2 5 10 0±0 14 1) % ]明显低于CNE 2Z细胞 ,即未转染的细胞 [(5 3 663± 16 981) % ]和CNE 2ZG细胞 [(61 5 75± 5 166) % ] ,差异有统计学意义 ,P <0 0 1。CNE 2ZGTR7 1细胞传第 12代后有凋亡出现 ,CNE 2Z及CNE 2ZG细胞无凋亡。结论 :端粒酶核酶基因的导入使CNE 2Z细胞的增殖能力下降并可诱导CNE 2Z细胞凋亡。端粒酶RNA模板区可以作为鼻咽癌的一个治疗靶点 ,端粒酶RNA模板区特异性核酶可望成为有效的端粒酶抑制剂。

关键词：鼻咽肿瘤醇学核糖核酸酶类端粒末端转移酶脱噬作用

IMMUNE RESPONSES TO EBV LATENT ANTIGENS EXPRESSED BY RECOMBINANT VACCINIA VIRUSES

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广东医科大学学报 1993年第Z1期 108-108页

作者： JamesP.Stewart,XiaoyiChen,Anna K.Ghosh,Michael,Mackett,john R.arrand Paterson Institute for Cancer Research Christie Hospital&Holt Radiun Institute Wilmslow Road Withington Manchester M20 9BX. Paterson Institute for Cancer Research Christie Hospital&Holt Radiun Institute Wilmslow Road Withington Manchester M20 9BX. Paterson Institute for Cancer Research Christie Hospital&Holt Radiun Institute Wilmslow Road Withington Manchester M20 9BX. Paterson Institute for Cancer Research Christie Hospital&Holt Radiun Institute Wilmslow Road Withington Manchester M20 9BX. Paterson Institute for Cancer Research Christie Hospital&Holt Radiun Institute Wilmslow Road Withington Manchester M20 9BX. Paterson Institute for Cancer Research Christie Hospital&Holt Radiun Institute Wilmslow Road Withington Manchester M20 9BX.

The complete EBNA1,LMP and terminal protein genes,as well as deleted versions of the EBNA2 and EBNA3 genes were cloned into vectors suitable for insertion and expression in vaccinia *** EBNA2 construct contains the po... 详细信息

关键词： EBV IMMUNE RESPONSES TO EBV LATENT ANTIGENS EXPRESSED BY RECOMBINANT VACCINIA VIRUSES

Epstein—Barr病毒特异性T细胞对重组痘苗病毒表达LMP和EBNA2的靶细胞的识别

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广东医科大学学报 1993年第Z1期 211-211页

作者：陈小毅,A.Ghosh,M.Moore,john arrand 湛江医学院湛江医学院湛江医学院湛江医学院

本文用EB病毒转化自体淋巴细胞所建立的类淋巴母细胞系（LCL）,以及用EB病毒潜伏感染膜蛋白（LMP）基因和核蛋白—2（EBNA2）基因与痘苗病毒重组的重组病毒（Vac—LMP和Vac—EBNA2）感染的自身纤维母细胞,同时作为刺激细胞和靶细胞,以5... 详细信息

本文用EB病毒转化自体淋巴细胞所建立的类淋巴母细胞系（LCL）,以及用EB病毒潜伏感染膜蛋白（LMP）基因和核蛋白—2（EBNA2）基因与痘苗病毒重组的重组病毒（Vac—LMP和Vac—EBNA2）感染的自身纤维母细胞,同时作为刺激细胞和靶细胞,以51Cr释放法检测5例血清中EB病毒VCA—IgA抗体阳性者

关键词：靶细胞刺激细胞 EBNA2 Barr Epstein LMP 特异性