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Expression and characterization of Gag protein of HIV-1（CN） in Pichia pastoris

第二军医大学学报 2006年第4期27卷 434-434页

作者： jiang wz jin ny li zj zhang ls wang hw zhang yj han wy Institute of Immunology Second Military Medical University of PLA Shanghai 200433 China

To express the core protein of HIV-1 of Chinese prevalent strain (HIV-1 (CN)) in Pichia pastoris, the fulllength gag gene was inserted into the secretory expression vector pHIls1。linearized recombinant plasmid pHILGAG by Sail was electrotransformed into the yeast strain GS115, and the yeast transformants were identified by PCR。To induce the interest protein to be expressed, the PCR positive transformants were inoculated in the medium of BMGY and BMMY, mRNA of the strain was detected by RT-PCR, and the expressed protein was analyzed by SDS-PAGE, Western blotting and thin layer scanning。mRNA (1.3 kb) was amplified by RT-PCR。SDS-PAGE and Western blotting analysis showed that the molecular mass of the expressed protein was 55 kD, which was similar to the expected value, and the expressed protein could react with McAb to HIV-1 p24。Thin layer scanning analysis demonstrated that the whole amount of the expressed protein was approximately 13 % of the soluble protein in the supernatant。The recombinant yeast had good genetic stability。The optimal expression conditions of the engineering yeast were as follows: BMMY medium, 80-90% of dissolved oxygen, 1% methanol, and 3-day-cultivation course。Gag proteins were expressed under the optimal expression condition and purified via gel filtration chromatography。The purity of the interest protein was up to 85 %。After the purified proteins were inoculated into BALB/c mice, the anti-HIV-1 antibodies in the immunized mice could be detected by Western blotting。

关键词： HIV-1/遗传学 HIV-1/代谢 HIV感染/免疫学病毒核心蛋白质类/代谢毕赤酵母/代谢基因产物 gag/代谢小鼠近交BALBC 动物小鼠

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Expression and characterization of Gag protein of HIV-1 （CN） in Pichia pastoris

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第二军医大学学报 2005年第11期26卷 1259-1259页

作者： jiang wz jin ny li zj zhang ls wang hw zhang yj han wy Institute of Immunology Second Military Medical University Shanghai 200433 China

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