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翻译起始区突变对猪卵透明带-3β蛋白在***表达的影响

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生殖与避孕 2005年第10期25卷 579-587,616页

作者：吴健虹陈小佳朱伟杰谢秋玲孙奋勇徐万祥李菁洪岸暨南大学生物工程研究所广州510632 暨南大学生殖免疫研究中心广州510632 上海市计划生育科研所上海200032 暨南大学医学院病理生理教研室广州510632

目的:探讨翻译起始区(translation initiation region,TIR)突变对两种氨基酸序列长度不同的猪卵透明带蛋白pZP3β161和pZP3β263在大肠杆菌中表达的影响。方法:应用DNASIS软件辅助分析,分别设计5条不同的上游引物对两种pZP3β基因的TIR... 详细信息

目的:探讨翻译起始区(translation initiation region,TIR)突变对两种氨基酸序列长度不同的猪卵透明带蛋白pZP3β161和pZP3β263在大肠杆菌中表达的影响。方法:应用DNASIS软件辅助分析,分别设计5条不同的上游引物对两种pZP3β基因的TIR区的G+C含量和自由能进行合理调整,PCR扩增后将获得的基因片段克隆入pET-3c载体,于大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中诱导表达。结果:TIR对pZP3β表达有明显的影响,其表达的pZP3β161蛋白和pZP3β263蛋白分别占菌总蛋白的25％和15％。结论:在不改变氨基酸的条件下,通过对目的基因TIR进行适当改造,能够有效提高目的蛋白的表达效率。

关键词：猪卵透明带截短型翻译起始区(TIR) 基因表达

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猪肺炎支原体黏附特性及黏附因子的研究进展

中国兽医科学 2018年第4期48卷 488-492页

作者：李高建陶宇舒建洪吴月红杨芳党占国何玉龙浙江理工大学生命科学学院浙江杭州310018 杭州洪桥中科基因技术有限公司浙江杭州310018

猪肺炎支原体是引起猪慢性呼吸道疾病的主要病原体，其感染后常导致继发感染而使病情加重，该病给世界各地的养猪业造成巨大的经济损失。研究表明，猪肺炎支原体在入侵后对呼吸道的黏附是其致病过程中的重要步骤，本文就猪肺炎支原体的... 详细信息

猪肺炎支原体是引起猪慢性呼吸道疾病的主要病原体，其感染后常导致继发感染而使病情加重，该病给世界各地的养猪业造成巨大的经济损失。研究表明，猪肺炎支原体在入侵后对呼吸道的黏附是其致病过程中的重要步骤，本文就猪肺炎支原体的黏附特性作一阐述，主要包括黏附相关的P97、P102和P110等黏附因子的介绍。

关键词：猪肺炎支原体黏附特性 P97 P102 P110

国产实时荧光定量PCR试剂与GeneXpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌的对比分析

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中国防痨杂志 2020年第1期42卷 60-65页

作者：吕纯芳吴健虹卢留珠徐阳凤刘盛元深圳市南山区慢性病防治院检验科 518054 深圳市南山区慢性病防治院结核病防治科 518054

目的评价国产实时荧光定量PCR(FQ-PCR)试剂与GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)检测痰标本结核分枝杆菌的临床应用价值,并比较两者的检测效能。方法收集2017年1月至2018年12月于深圳市南山区慢性病防治院就诊的210例疑似肺结核患者... 详细信息

目的评价国产实时荧光定量PCR(FQ-PCR)试剂与GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)检测痰标本结核分枝杆菌的临床应用价值,并比较两者的检测效能。方法收集2017年1月至2018年12月于深圳市南山区慢性病防治院就诊的210例疑似肺结核患者的痰标本,同时做涂片镜检、BACTEC MGIT 960(简称“MGIT 960”)培养、GeneXpert和FQ-PCR检测。以MGIT 960培养为参考,比较GeneXpert和FQ-PCR检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值,比较两者与MGIT 960培养结果的一致性及两者之间的一致性。按照涂片镜检结果分级报告标准,将痰标本分为荷菌量逐步递增的6个组,即阴性组、少量组、+组、++组、+++组、++++组,比较GeneXpert和FQ-PCR检测各个组阈值循环数(Ct值)均值的差异。结果GeneXpert检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为83.7%(123/147)、87.9%(51/58)、94.6%(123/130)、68.0%(51/75);FQ-PCR检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为83.7%(123/147)、89.8%(53/59)、95.3%(123/129)、68.8%(53/77)。FQ-PCR、GeneXpert分别与MGIT 960行Kappa检验,一致性分别为85.4%(176/206)和84.9%(174/205),Kappa值分别为0.70、0.66;对GeneXpert和FQ-PCR检测结果行Kappa检验,一致性为92.8%(194/209),Kappa值为0.85。FQ-PCR检测显示,阴性组与少量组的Ct值均值比较[(33.87±5.00)和(27.29±1.30)个],差异有统计学意义(t=5.56,P<0.001);GeneXpert检测分别为(33.32±6.05)和(23.99±3.36)个,差异有统计学意义(t=5.19,P<0.001)。检测涂片阴性标本时,FQ-PCR与GeneXpert检测的Ct值均值[(33.87±5.00)和(33.32±6.05)个]差异无统计学意义(t=0.32,P=0.750);检测涂片阳性(少量组、+组、++组、+++组、++++组)标本时,FQ-PCR检测的Ct值均值[分别为(27.29±1.30)、(27.95±2.85)、(25.88±3.62)、(24.79±2.46)、(22.38±2.72)个]均明显高于GeneXpert检测[分别为(23.99±3.36)、(23.10±4.05)、(20.22±2.81)、(20.31±4.16)、(16.48±2.78)个],差异均有统计学意义(t值分别为2.60、4.71、6.08、3.85、9.02,P值分别为0.030、<0.001、<0.001、<0.001、<0.001)。结论国产FQ-PCR试剂与GeneXpert检测结果一致性较好,对结核病大规模筛查、降低检测成本具有临床应用价值。

关键词：分枝杆菌,结核核酸扩增技术聚合酶链反应对比研究

非融合膜外型猪卵透明带-3β蛋白在原核系统中的表达

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生殖与避孕 2005年第5期25卷 259-262,299页

作者：陈小佳谢秋玲朱伟杰孙奋勇徐万祥洪岸李菁吴健虹暨南大学生物工程研究所广州510632 暨南大学生殖免疫研究中心广州510632 上海市计划生育科研所上海200032 暨南大学医学院病理生理教研室广州510632

目的:通过基因工程的方法在原核表达系统中表达去除了信号肽和跨膜区的膜外型猪卵透明带蛋白pZP3β。方法:设计适宜引物,采用PCR方法,在基因水平对膜外型pZP3β的翻译起始序列进行适当调整,获得的基因克隆入pET-3c载体,并进一步在大肠杆... 详细信息

目的:通过基因工程的方法在原核表达系统中表达去除了信号肽和跨膜区的膜外型猪卵透明带蛋白pZP3β。方法:设计适宜引物,采用PCR方法,在基因水平对膜外型pZP3β的翻译起始序列进行适当调整,获得的基因克隆入pET-3c载体,并进一步在大肠杆菌*** BL21(DE3) pLysS中表达。结果:得到表达率约10%的非融合膜外型pZP3β蛋白的表达,并经Western-blot鉴定为目的蛋白。结论:外源蛋白在不改变氨基酸序列条件下,在基因水平的适当调整可以有效提高其表达率。

关键词：非融合膜外型猪卵透明带基因表达

猪卵透明带-3β截短型蛋白在原核系统中的表达研究

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生殖与避孕 2005年第6期25卷 323-327页

作者：孙奋勇陈小佳朱伟杰谢秋玲吴健虹徐万祥洪岸李菁暨南大学生物工程研究所广州510632 暨南大学生殖免疫研究中心广州510632 上海市计划生育科研所上海200032 暨南大学医学院病理生理教研室广州510632

目的:制备具有猪卵透明带-3β抗原活性的截短型pZP3β蛋白(tunc-pZP3β),以便对该蛋白的抗原表位区域作深入研究。方法:采用PCR方法扩增原cDNA中编码第130个氨基酸到第290个氨基酸的DNA序列。获得的tunc-pZP3β基因片段通过引入其两端的... 详细信息

目的:制备具有猪卵透明带-3β抗原活性的截短型pZP3β蛋白(tunc-pZP3β),以便对该蛋白的抗原表位区域作深入研究。方法:采用PCR方法扩增原cDNA中编码第130个氨基酸到第290个氨基酸的DNA序列。获得的tunc-pZP3β基因片段通过引入其两端的NdeⅠ和BamHⅠ酶切位点被定向插入pET-3c质粒T7强启动子下游的多克隆区,筛选出重组子,经DNA测序验证正确后,转化表达菌株BL21(DE3)pLysS,再用IPTG对重组菌体进行诱导。结果:SDS-PAGE分析表明tunc-pZP3β在大肠杆菌系统中高水平表达,且在WesternBlot免疫印迹中能被特异性抗体识别。结论:对适当的抗原表位序列进行保留而截去两端一定的氨基酸序列,所获得的截短型蛋白能够实现在大肠杆菌中高效表达,这有利于深入研究该蛋白核心区域的功能。

关键词：截短型猪卵透明带-3β 人肠杆菌表达

Activatable chemiluminescence probe based on four-arm PEGconjugated-pyropheophorbide-a for in vivo autofluorescence-free imaging of peroxynitrite

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Science China Chemistry 2025年

作者： jianmei Ke Lei Ding Ronggui Lian Cheng Zheng Wenjun Li Aixian Zheng Yupeng Sun Ming wu Yongyi Zeng Xiaolong Liu Maochun hong Xiaolong Zhang The United Innovation of Mengchao Hepatobiliary Technology Key Laboratory of Fujian Province Mengchao Hepatobiliary Hospital of Fujian Medical University Ganjiang Innovation Academy Chinese Academy of Sciences School of Rare Earths University of Science and Technology of China College of Chemistry Fuzhou University State Key Laboratory of Structure Chemistry Fujian Institute of Research on the Structure of Matter Chinese Academy of Sciences

Peroxynitrite（ONOO-） is a highly reactive nitrogen species that plays pivotal roles in cell signal transduction and physiological or pathological progresses. However, commonly used ONOO-optical imaging probes are still hampered by high background/autofluorescence（fluorescence probe）, short emission wavelength, or poor selectivity in the case of chemiluminescence. Herein,we report a facile method to prepare an activatable chemiluminescence probe（PPA-PEG） with good biocompatibility and functionality for in vivo autofluorescence-free imaging of ONOO-. The PPA-PEG consists of pyropheophorbide-a（PPA）, a typical deep red photosensitizer that acts as both the recognition and signaling element, and 4-arm poly（ethylene glycol）(4-arm PEG), which improves the biosafety and water solubility of probe. These components can self-assemble into nanoparticles（namely PPA-PEG nanoprobe） in aqueous solution. The PPA-PEG nanoprobe showed an ultra-low chemiluminescence signal before interacting with ONOO-, but exhibited good selectivity, high sensitivity and a fast response toward ONOO-. The PPAPEG was successfully applied to image cellular ONOO-changes, as well as the endogenous ONOO-changes in inflammation models and subcutaneous or orthotopic hepatocellular carcinoma（HCC） tumors models in living mice. In vitro and in vivo studies verified the good detection and imaging capabilities of PPA-PEG for peroxynitrite, demonstrating suitable tissue penetration and a high signal-to-background ratio（SBR）. Thus, our nanoprobe can serve as a valuable activatable chemiluminescence imaging tool for studying important peroxynitrite-related chemical and biological applications.

关键词：

长江下游重点江段水质污染及对鱼类的毒性影响

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水生生物学报 2002年第6期26卷 635-640页

作者：陈家长孙正中瞿建宏吴伟胡庚东中国水产科学研究院淡水渔业研究中心无锡214081

通过对长江下游安庆、南京、镇江和长江口 4江段水质及其对鱼类毒性影响的调查发现 ,长江下游江段主航道的水质符合国家地面Ⅱ类标准 ,但近岸的污染带水质受到一定程度的污染 ,其主要污染物为石油烃类和挥发酚等 ,这些污染物对鱼类有一... 详细信息

通过对长江下游安庆、南京、镇江和长江口 4江段水质及其对鱼类毒性影响的调查发现 ,长江下游江段主航道的水质符合国家地面Ⅱ类标准 ,但近岸的污染带水质受到一定程度的污染 ,其主要污染物为石油烃类和挥发酚等 ,这些污染物对鱼类有一定的毒性影响 ,可引起鱼类的急性中毒 ,并可诱导鱼类产生微核。同时在上述几个江段内的鱼体内可检出较高的污染物残留。这表明长江下游江段已受到不同程度的污染 ,这种污染对区域性渔业有影响。

关键词：长江下游重点江段水质污染鱼类毒性影响

Deciphering fungal metabolon coupling tandem inverse-electrondemand Diels-Alder reaction and semipinacol rearrangement for the biosynthesis of spiro polycyclic alkaloids

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Science China Chemistry 2025年第1期68卷 288-296页

作者： Shuai Liu Wen-Qiang Xu Ying-Tong Di Man-Cheng Tang Ding-Kang Chen Ming-Ming Cao Yao-Wen Chang hong-Yu Tang Chun-Mao Yuan Jun-Bo Yang Zhi-Li Zuo Han Guo Zi-Fei Xu Ying Zeng Yun-Dong wu Xiao-jiang Hao Key Laboratory of Phytochemistry and Natural Medicines (Chinese Academy of Sciences) Kunming Institute of Botany Chinese Academy of Sciences University of Chinese Academy of Sciences Lab of Computational Chemistry and Drug Design State Key Laboratory of Chemical Oncogenomics Peking University Shenzhen Graduate School Shenzhen Bay Laboratory State Key Laboratory of Microbial Metabolism School of Life Sciences & Biotechnology Shanghai Jiao Tong University State Key Laboratory of Functions and Applications of Medicinal Plants Guizhou Medical University Molecular Biology Experimental Center Germplasm Bank of Wild Species in Southwest China Kunming Institute of Botany Chinese Academy of Sciences Yunnan Key Laboratory for Wild Plant Resources Kunming Institute of Botany Chinese Academy of Sciences Research Unit of Chemical Biology of Natural Anti-Virus Products Chinese Academy of Medical Sciences

In the intricate process of natural product biosynthesis, a metabolon can enhance metabolic flux by associating sequential enzymes. A fungal metabolon, comprising of flavin-dependent monooxygenase Spe F and P450 monooxygenase Spe G, is identified in the biosynthesis of spiro polycyclic alkaloids(+)-notoamide B and its diastereomer(+)-versicolamide B. Using notoamide E as a substance, Spe F/Spe G metabolon can control the stereoselectivity of its 2,3-epoxidation, followed by hydrogen atom ion at C-17 to generate reactive epoxide tau-m A with dienyl iminium unit. Subsequently,(+)-notoamide B and(+)-versicolamide B are produced via tandem nonenzymatic inverse-electron-demand Diels-Alder reaction and semipinacol rearrangement. This provides the first example of metabolon in the biosynthesis of spiro-prenylated indole alkaloids.

关键词： metabolon Diels-Alder reaction semipinacol rearrangement biosynthesis notoamides spiro polycyclic alkaloids

短葶山麦冬块根发育期光合日变化特征对水分胁迫的响应

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河南农业大学学报 2017年第1期51卷 87-93页

作者：范海兰陈灿谢安强林晗李键洪伟吴承祯福建农林大学林学院福建福州350002 福建省森林生态系统经营与过程重点实验室福建福州350002 武夷学院生态与资源工程学院福建南平354300

以盆栽短葶山麦冬为材料,研究块根发育的3个时期不同土壤水分处理(对照(CK)、轻度胁迫(W1)、中度胁迫(W2)、重度胁迫(W3)4个处理)下短葶山麦冬光合参数和水分利用效率日变化特征。结果表明,不同土壤水分条件下短葶山麦冬光合速率均在10... 详细信息

以盆栽短葶山麦冬为材料,研究块根发育的3个时期不同土壤水分处理(对照(CK)、轻度胁迫(W1)、中度胁迫(W2)、重度胁迫(W3)4个处理)下短葶山麦冬光合参数和水分利用效率日变化特征。结果表明,不同土壤水分条件下短葶山麦冬光合速率均在10:00达到最大值,光合速率日变化总体表现为单峰型曲线。3个时期光合速率日最大峰值和日平均值都表现为CK>W1>W2>W3,3个时期的蒸腾速率和气孔导度均表现为CK>W1>W2>W3,水分利用效率(wuE)日均值以W3最大,并且上午时段大于下午时段。不同土壤水分条件下光合速率、气孔导度和水分利用效率日均值和日峰值均表现为块根膨大前期>块根发生后期>块根发生中期,而蒸腾速率日均值则表现为块根发生中期>块根发生后期>块根膨大前期。综合分析表明,不同生育时期,水分胁迫导致净光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)和气孔导度(Gs)下降,提高了wuE,Pn下降的原因在不同生育时期表现不同,进入块根膨大期后短葶山麦冬光合速率与水分利用效率表现为上升趋势。

关键词：短葶山麦冬光合日变化水分胁迫块根发育