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溶藻弧菌vscO基因在不同环境下的表达差异

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吉首大学学报（自然科学版） 2014年第4期35卷 59-63页

作者：庞欢瑛周泽军丁燏黄郁葱吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

为阐明溶藻弧菌vscO的在不同环境下的表达情况,用半定量RT-PCR方法检测vscO mRNA在不同生长时期、不同环境因子(温度、盐度和pH值)培养下的相对表达量.结果表明,溶藻弧菌vscO在对数期,温度为28℃,盐度为2%以及培养基起始pH值为7.0时的... 详细信息

为阐明溶藻弧菌vscO的在不同环境下的表达情况,用半定量RT-PCR方法检测vscO mRNA在不同生长时期、不同环境因子(温度、盐度和pH值)培养下的相对表达量.结果表明,溶藻弧菌vscO在对数期,温度为28℃,盐度为2%以及培养基起始pH值为7.0时的表达量最高.

关键词：溶藻弧菌 Ⅲ型分泌系统(T3SS) vscO基因环境因子基因表达

斜带石斑鱼T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(TIM-4)基因表达及重组蛋白制备

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大连海洋大学学报 2022年第3期37卷 403-410页

作者：李金泽汤菊芬黄瑜简纪常施钢蔡佳广东海洋大学水产学院广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江)广东湛江524088 广西科学院广西北部湾海洋研究中心广西海洋天然产物与组合生物合成化学重点实验室广西南宁530007

为研究斜带石斑鱼Epinephelus coioides T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(T-cell immunoglobulin and mucin-domain-containing molecule 4,TIM-4)在免疫应答过程中的作用,通过聚合酶链式反应(PCR)获得斜带石斑鱼TIM-4的蛋白编码区(GenBank登录号:MZ465580),利用生物信息学分析其结构特征,采用荧光定量PCR(qPCR)分析TIM-4在健康鱼体中的组织分布,以及经LPS和Poly I:C刺激后的表达变化,并构建原核表达载体质粒TIM-4-4T,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行TIM-4重组蛋白诱导表达。结果表明:斜带石斑鱼TIM-4基因的蛋白编码区片段长度为702 bp,可编码234个氨基酸,含有V-Type(IGV)、BTK和PRY 3个功能结构域;qPCR显示,TIM-4基因在斜带石斑鱼10种组织中均有表达,在胃中的表达量最高(P<0.05),在脾脏中表达量最低;经LPS刺激后,脾脏细胞中的TIM-4表达量显著降低(P<0.05),而经Poly I:C刺激后,脾脏细胞中的TIM-4表达量显著升高(P<0.05);SDS-PAGE电泳显示,TIM-4重组蛋白相对分子质量约为25100,以包涵体形式表达,在0.4 mmol/L IPTG、37℃下诱导6 h时,TIM-4重组蛋白的表达量最大。研究表明,TIM-4基因可能参与了斜带石斑鱼抗感染免疫反应,本研究结果为深入了解TIM-4的生物学功能提供了理论基础。

关键词：斜带石斑鱼 T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4 基因表达 LPS Poly IC 重组蛋白

尼罗罗非鱼跨膜Bax抑制剂母体6基因Tmbim 6的克隆、表达及功能鉴定

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大连海洋大学学报 2023年第2期38卷 275-283页

作者：巫祎琴陈福暖张志强江栢坚简纪常黄瑜广东海洋大学水产学院广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室广东湛江524088

为了解跨膜Bax抑制剂母体6(transmembrane Bax inhibitor motif containing 6,TMBIM 6)在尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)病原体感染中的作用,利用聚合酶链式反应(PCR)对Tmbim 6基因进行克隆与鉴定,并采用实时荧光定量PCR(qPCR)分析Tmbim 6在健康尼罗罗非鱼(体质量为80~100 g)的组织分布模式及无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)、Poly I:C模拟病毒刺激后的表达变化。结果表明:尼罗罗非鱼Tmbim 6开放阅读框为714 bp,可编码237个氨基酸,包含6个跨膜结构域和1个C-末端基序;亚细胞定位显示,尼罗罗非鱼TMBIM 6定位于细胞质,双荧光素酶报告基因系统检测发现,Tmbim 6在HEK-293T细胞中过表达后极显著抑制NF-κB通路(P<0.01);qPCR分析显示,Tmbim 6基因在所检测的组织中广泛分布,在肝脏和肌肉中的表达量最高;经无乳链球菌感染和Poly I:C刺激后,Tmbim 6在肝脏、脾脏、头肾、脑和肠道中的表达水平均显著上调(P<0.05)。研究表明,尼罗罗非鱼TMBIM 6参与了无乳链球菌感染和Poly I:C刺激后的细胞应激过程及免疫反应。

关键词：尼罗罗非鱼 Tmbim 6 亚细胞定位 NF-κB 基因表达

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斜带石斑鱼热休克蛋白基因HSP70在LPS和Poly I∶C刺激下的表达分析及重组蛋白制备

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大连海洋大学学报 2021年第6期36卷 937-942页

作者：梁振宇邹子鸿汤菊芬黄瑜简纪常蔡佳广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 广西科学院广西北部湾海洋研究中心广西海洋天然产物与组合生物合成化学重点实验室广西南宁530007

为了解斜带石斑鱼Epinephelus coioides热休克蛋白(HSP70)基因(EcHSP70,GenBank登录号MW411059)在石斑鱼抗病原感染中的功能,采用荧光定量PCR检测了LPS与Poly I∶C刺激后48 h内,石斑鱼脾脏细胞(GS)中EcHSP70的表达变化;构建重组质粒EcHS... 详细信息

为了解斜带石斑鱼Epinephelus coioides热休克蛋白(HSP70)基因(EcHSP70,GenBank登录号MW411059)在石斑鱼抗病原感染中的功能,采用荧光定量PCR检测了LPS与Poly I∶C刺激后48 h内,石斑鱼脾脏细胞(GS)中EcHSP70的表达变化;构建重组质粒EcHSP70-4T,转化到BL21(DE3)后进行诱导表达,利用SDS-PAGE电泳和Western blot检测EcHSP70重组蛋白的表达形式。结果表明:LPS与Poly I∶C刺激后,石斑鱼脾脏细胞中EcHSP70基因表达量上调;SDS-PAGE与Western blot检测表明,EcHSP70-4T重组蛋白相对分子质量约为96000,主要以包涵体形式表达。研究表明,EcHSP70蛋白可能参与了石斑鱼的免疫反应,其在大肠杆菌中能以包涵体形式高效表达,并纯化获得了EcHSP70重组蛋白,本研究结果为鉴定EcHSP70的互作蛋白及进一步了解该蛋白在免疫反应中的作用机制提供了数据参考。

关键词：斜带石斑鱼 HSP70基因表达分析原核表达脂多糖聚肌胞

尼罗罗非鱼清道夫受体基因Scara3的克隆及病原微生物刺激后的表达响应

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大连海洋大学学报 2022年第1期37卷 71-79页

作者：胡惠玲汪志文黎源鲁义善简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东海洋大学深圳研究院广东省水生动物健康评估工程技术研究中心深圳市海水经济动物种苗健康评价公共技术平台广东深圳518120

为探究清道夫受体3(scavenger receptor class a member 3,Scara3)在尼罗罗非鱼Oreochromis niloticus抵御病原微生物过程中的作用,采用聚合酶链式反应克隆得到罗非鱼Scara3基因,利用荧光定量PCR技术分析Scara3在健康尼罗罗非鱼组织分... 详细信息

为探究清道夫受体3(scavenger receptor class a member 3,Scara3)在尼罗罗非鱼Oreochromis niloticus抵御病原微生物过程中的作用,采用聚合酶链式反应克隆得到罗非鱼Scara3基因,利用荧光定量PCR技术分析Scara3在健康尼罗罗非鱼组织分布及细菌、病毒感染后的表达情况,并进行亚细胞定位分析。结果表明:克隆得到尼罗罗非鱼Scara3基因cDNA全长序列为3889 bp,开放阅读框(ORF)为1827 bp,编码608个氨基酸,具有跨膜结构域和胶原(Collagen)结构域;多序列比对发现,Scara3氨基酸序列在脊椎动物中相对保守;亚细胞定位显示,Scara3蛋白在全细胞分布;荧光定量PCR分析显示,Scara3基因在健康罗非鱼各组织中均有表达,在血液、肠道、皮肤和胸腺等组织中表达量较高且显著高于其他组织(P<0.05);经脂多糖(LPS)、灭活无乳链球菌Streptococcus agalactiae和聚肌胞苷酸(Poly I:C)刺激罗非鱼头肾白细胞后,Scara3表达量显著上调(P<0.05),经灭活无乳链球菌和Poly I:C刺激后,肠道、头肾和皮肤组织中的基因表达量表现出时序性。研究表明,尼罗罗非鱼在对细菌和病毒感染的免疫反应活动中,Scara3基因起着重要作用,本研究结果为后期硬骨鱼类中Scara3基因的功能研究提供了科学参考。

关键词：尼罗罗非鱼清道夫受体3基因无乳链球菌聚肌胞苷酸

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中华鳖卵黄抗体的检测

湛江海洋大学学报 2000年第3期20卷 41-44页

作者：简纪常湛江海洋大学水产学院湛江524025

用新鲜的中华鳖卵提取卵黄粗提物 ,再与兔抗鳖 Ig M抗血清反应 ,琼脂免疫扩散法发现鳖卵黄粗提物可与兔抗鳖 Ig M的抗血清发生免疫沉淀反应 ,且效价可达 1∶ 4 ,表明鳖卵黄中存在着抗体 ,进而用 ELISA法测定到鳖卵黄中抗体的含量只有 2 ... 详细信息

用新鲜的中华鳖卵提取卵黄粗提物 ,再与兔抗鳖 Ig M抗血清反应 ,琼脂免疫扩散法发现鳖卵黄粗提物可与兔抗鳖 Ig M的抗血清发生免疫沉淀反应 ,且效价可达 1∶ 4 ,表明鳖卵黄中存在着抗体 ,进而用 ELISA法测定到鳖卵黄中抗体的含量只有 2 4 0 .5μg/m L,明显低于血清中抗体的含量。因而认为中华鳖母源抗体可通过卵黄传递给稚鳖 ,使稚鳖在孵化后可获得较弱的被动免疫力以抵抗病原体的感染。

关键词：中华鳖卵黄抗体检测日源抗体被动免疫

溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统效应蛋白Va1686基因的克隆和生物信息学分析

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基因组学与应用生物学 2018年第3期37卷 1210-1217页

作者：宋大伟庞欢瑛邱明生林紫薇汤菊芬梁珊珊简纪常广东海洋大学水产学院湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524088 广东省水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088

本研究从溶藻弧菌中成功克隆获得Va1686基因的编码区序列（GenBank：KX245316），该基因全长1164bp，可编码387个氨基酸，应用生物信息学的方法和工具对溶藻弧菌HY9901III型分泌系统效应蛋白Va1686的理化性质、蛋白结构、遗传进化关系... 详细信息

本研究从溶藻弧菌中成功克隆获得Va1686基因的编码区序列（GenBank：KX245316），该基因全长1164bp，可编码387个氨基酸，应用生物信息学的方法和工具对溶藻弧菌HY9901III型分泌系统效应蛋白Va1686的理化性质、蛋白结构、遗传进化关系和抗原特性等方面进行预测和分析。结果表明：Va1686蛋白为稳定的亲水性蛋白，蛋白呈酸性，不具有跨膜区和信号肽，二级结构以仅螺旋为主。进化分析显示溶藻弧菌HY9901与哈维氏弧菌（***）聚为一支，表明在进化关系上最为接近。Va1686蛋白包含一段与细胞分裂相关的Fic superfamily保守结构域。生物信息学分析表明Va1686可能的B细胞抗原优势表位，分别是第48～49、82～85、125～126、150～153、185～186、236～237等区段。利用SWISS-MODEL软件，模拟了Va1686亚基三维结构模型，发现与其同源蛋白副溶血弧菌vopS非常相似，相似度达到89．46％。本研究从生物信息学角度分析了Va1686作为弧菌共同抗原的可行性，为下一步的疫苗研发提供了理论依据。

关键词：溶藻弧菌三型分泌系统效应蛋白生物信息学分析

尼罗罗非鱼CD209基因的克隆、表达及功能鉴定

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大连海洋大学学报 2021年第3期36卷 374-382页

作者：罗国玲王孝谦简纪常鲁义善汤菊芬黄瑜广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 水产经济动物病害控制广东省普通高等学校重点实验室广东湛江524088

为揭示尼罗罗非鱼模式识别受体CD209的分子结构、组织表达特性并初步了解其免疫功能,利用聚合酶链式反应(PCR)获得尼罗罗非鱼Oreochromis niloticus(体质量为100 g±5 g)CD209基因的开放阅读框片段(open reading frame,ORF),命名为OnCD2... 详细信息

为揭示尼罗罗非鱼模式识别受体CD209的分子结构、组织表达特性并初步了解其免疫功能,利用聚合酶链式反应(PCR)获得尼罗罗非鱼Oreochromis niloticus(体质量为100 g±5 g)CD209基因的开放阅读框片段(open reading frame,ORF),命名为OnCD209;使用生物信息学软件对其氨基酸序列进行分析,采用RT-qPCR法对健康尼罗罗非鱼的各组织及无乳链球菌刺激后尼罗罗非鱼肝脏、脾脏、鳃和肠道的CD209基因表达量进行分析,并构建了CD209-pEGFP-N1及CD209-pcDNA3.1载体,研究了CD209基因在293T细胞中的定位及在细胞中过表达时对NF-κB酶活性的影响。结果表明:OnCD209的ORF区片段长度为1383 bp,可编码460个氨基酸,预测该蛋白具有一个C型凝集素结构域;多重氨基酸序列比对及系统进化分析显示,CD209氨基酸序列在各物种间相对不保守,尼罗罗非鱼与田纹狮子鱼Liparis tanakae的CD209氨基酸序列聚为一支,亲缘关系最近;RT-qPCR结果显示,所有组织(脑、血液、皮肤、肌肉、头肾、肠道、鳃、肝脏、脾脏和胸腺)中均能检测到OnCD209的mRNA表达,且在血液中表达量最高;尼罗罗非鱼在受到无乳链球菌感染后,OnCD209的表达在各组织中呈现相似的变化趋势,大致呈先在6 h时上调,后在12、24 h时下调,再在48 h后上调的表达模式;亚细胞定位分析显示,OnCD209定位于细胞膜上;双荧光素酶报告基因系统检测发现,OnCD209对NF-κB通路的活性显著性激活。研究表明,OnCD209可能参与尼罗罗非鱼对细菌的免疫应答过程及炎症反应过程。

关键词：尼罗罗非鱼模式识别受体荧光定量PCR 基因克隆亚细胞定位 NF-κB

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基于夹点分析技术的常减压塔换热网络优化

当代化工研究 2024年第2期 62-66页

作者：陈飞刘纪昌赵基钢张金山张健新疆石河子大学化学化工学院新疆832003 化工绿色过程兵团重点实验室新疆832003 华东理工大学化工学院上海200237 新疆佳宇恒能源科技有限公司新疆834018

本文采用夹点技术对某炼油厂常减压装置现有生产工况下的换热网络进行分析优化并提出改进方案。应用Aspen plus建立了常减压塔模型及相应的换热网络,计算各侧线流股流量和物性数据。利用Aspen Energy Analyzer计算得到该换热网络的夹点... 详细信息

本文采用夹点技术对某炼油厂常减压装置现有生产工况下的换热网络进行分析优化并提出改进方案。应用Aspen plus建立了常减压塔模型及相应的换热网络,计算各侧线流股流量和物性数据。利用Aspen Energy Analyzer计算得到该换热网络的夹点温度。通过夹点温度来分析诊断换热网络中跨越夹点物流,确定换热网络中瓶颈的位置。通过调整不合理配置的冷热流股换热器来优化换热网络,使脱盐原油进入常压塔的换热终温从288.0℃提高到310.4℃,优化后的冷、热公用工程用量各减少2808.0kW,显著降低了装置的操作费用。

关键词：夹点技术 Aspen Energy Analyzer能量分析换热网络优化