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Study of intracellular anabolism of 5-fluorouracil and incorporation in nucleic acids based on an LC-HRMS method

Journal of Pharmaceutical Analysis 2021年第1期11卷 77-87页

作者： Christelle Machon Frederic Catez Nicole Dalla Venezia Floriane Vanhalle Laetitia Guyot Anne Vincent Maxime Garcia Beatrice Roy Jean-Jacques Diaz jerome guitton Laboratoire de Chimie Analytique Faculte de Pharmacie de LyonUniversite Lyon 18 Avenue RockefellerLyon69373France Laboratoire de Biochimie et de Pharmaco-toxicologie Centre Hospitalier Lyon-SudeHCLPierre Benite69495France Inserm U1052 CNRS UMR5286 Centre de Recherche en Cancerologie de LyonF-69000 LyonFrance.Centre Leon BerardF-69008 LyonFranceUniversite de Lyon 1F-69000 LyonFrance Institut des Biomolecules Max Mousseron(IBMM) UMR 5247 CNRSUniversite de MontpellierENSCMCampus TrioletMontpellierFrance Laboratoire de toxicologie Faculte de pharmacie de Lyon8 avenue RockefellerF-69373 LyonFrance

5-Fluorouracil(5-FU)is an anticancer drug extensively used for different *** metabolic activation leads to several nucleoside and nucleotide metabolites essential to exert its cytotoxic activity on multiple cellular targets such as enzymes,DNA and *** this paper,we describe the development of a method based on liquid chromatography coupled with high resolution mass spectrometry suitable for the simultaneous determination of the ten anabolic metabolites(nucleoside,nucleotide and sugar nucleotide)of *** chromatographic separationwas optimized on a porous graphitic carbon column allowing the analysis of the metabolites of 5-FU as well as endogenous *** detection was performed on an Orbitrap■tandem mass *** of the method was verified in intracellular content and in RNA *** limit of detection was equal to 12 pg injected on column for nucleoside metabolites of 5-FU and 150 pg injected on column for mono-and tri-phosphate nucleotide *** effect was evaluated in cellular contents,DNA and RNA extracts for nucleoside and nucleotides *** method was successfully applied to i)measure the proportion of each anabolic metabolite of 5-FU in cellular contents,ii)follow the consequence of inhibition of enzymes on the endogenous nucleotide pools,iii)study the incorporation of metabolites of 5-FU into RNA and DNA,and iv)to determine the incorporation rate of 5-FUrd into 18 S and 28 S sub-units of rRNA.

关键词： 5-Fluorouracil LC-MS-HRMS Nucleotide RNA DNA Incorporation rate

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