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The Development of Gel Media and Columns for Large-Scale Chromatography of Proteins, a Historical Review

Chinese Journal of Chemical Engineering 2002年第6期10卷 690-695页

作者： jan-christer janson Center for Surface Biotechnology Uppsala Biomedical CenterUppsala University

The first dedicated protein chromatography media were introduced during the 1950s and 1960s. There was an early awareness of the possibility of using these for production applications within the biopharmaceutical industry. However, the crucial limitation was the fact that those media that were most compatible with proteins lent themselves less favourably to scaling-up. The problems were primarily physical. Thus the fibrous cellulose media showed bed cracking tendencies and the bead shaped polyacrylamide, dextran, and agarose gel media, then available, were too soft to stand the hydrodynamic forces acting in large columns, leading to bed compaction and increased pressure drop. At the time, the best solution to the latter problem, after a number of intermediary solutions were tried, was the introduction of the stacked column concept in which several short column segments were connected by small bore tubing, thus reducing the force acting on the particles in each bed copartment. However, the ultimate remedy, the introduction of chromatographic matrices that combine the desired features of adequate rigidity, macroporosity, biocompatibility, chemical stability (for CIP and SIP) and derivatizability, did not occur until the middle of the 1980s when adquately cross-linked agarose gel media such as Sepharose Fast Flow were made available. The paper also recognizes the many attempts made during the past 50 years to develop continous chromatography columns. Most of the designs are based on an annular bed or on an array of anularly arranged parallel columns continuously fed with samples in a cyclic manner. The introduction of media and columns for expanded bed adsorption followed a demand for fewer purification steps and shorter process times. In recent years, columns have been introduced that allow packing and repacking without needing to open the column. The review provides an historical account of the developments that have led to the present state-of-the-art both regarding

关键词： chromatography protein review

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表面活性剂辅助重组蛋白质复性

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化工学报 2005年第7期56卷 1288-1294页

作者：王君杨君秋刘铮 jan-christer janson 清华大学化学工程系北京100084 Department of Surface Biotechnology Uppsala University Uppsala 751-23 Sweden

以重组人溶菌酶(rhLys)与重组β甘露聚糖酶(rMan)为体系,综合采用活性测定、非还原性SDSPAGE以及荧光发射光谱分析等方法研究了十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、CTAB与β环糊精(βCD)组成的人工分子伴侣以及其他种类复性助剂对重组蛋白质... 详细信息

以重组人溶菌酶(rhLys)与重组β甘露聚糖酶(rMan)为体系,综合采用活性测定、非还原性SDSPAGE以及荧光发射光谱分析等方法研究了十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、CTAB与β环糊精(βCD)组成的人工分子伴侣以及其他种类复性助剂对重组蛋白质复性过程的影响.结果表明CTAB及人工分子伴侣均可有效地辅助rhLys复性,且rhLys与鸡卵清溶菌酶(Lys)呈现出类似的复性过程特性;人工分子伴侣可显著地提高rMan在高浓度下的复性率;表面活性剂带电性质、表面活性剂与蛋白质的摩尔比以及变性蛋白质的浓度等是影响复性率及复性产品分布的主要因素.这些结果对于此类复性技术应用于重组蛋白体系时的工艺选择和优化提供了重要的依据和参考.

关键词：蛋白质复性重组人溶菌酶重组β-甘露聚糖酶 CTAB β-CD

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蛋白质在层析过程中的失活与复性

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化工学报 2004年第7期55卷 1033-1040页

作者：李明 jan-christer janson 苏志国中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100080 Uppsala大学表面生物技术系

在层析分离过程中 ,层析的固相介质和溶液环境会引起蛋白质的结构变化 :天然的蛋白质可能会降低活性甚至完全失去活性 ,而结构变化了的蛋白质也可能重新折叠恢复活性 .此类现象已经引起研究者特别是生化工程学家的关注 ,层析介质的种类... 详细信息

在层析分离过程中 ,层析的固相介质和溶液环境会引起蛋白质的结构变化 :天然的蛋白质可能会降低活性甚至完全失去活性 ,而结构变化了的蛋白质也可能重新折叠恢复活性 .此类现象已经引起研究者特别是生化工程学家的关注 ,层析介质的种类和操作手段是影响此两个过程的关键因素 .利用不同的层析方法 ,对不同的蛋白质采取相应的措施有利于提高活性蛋白质的回收率 ,具有重要的理论和应用价值 .

关键词：层析蛋白质变性复性

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混合模式吸附色谱分离纯化贻贝粘蛋白的研究

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安徽农业科学 2010年第28期38卷 15484-15486页

作者：范恒瑞高敏 jan-christer janson 顾铭中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190 中国科学院研究生院北京100049 Department of Physical and Analytical Chemistry Uppsala Biomedical CentreUppsala University

[目的]研究高强度琼脂糖基质混合模式吸附介质分离纯化贻贝粘蛋白的方法并探讨分离机理。[方法]考察在不同酸碱度、不同离子强度下,贻贝粘蛋白在凝胶上的静态吸附、动态吸附及解吸附过程。[结果]氯化钠浓度从0增加到0.5mol/L,介质和蛋... 详细信息

[目的]研究高强度琼脂糖基质混合模式吸附介质分离纯化贻贝粘蛋白的方法并探讨分离机理。[方法]考察在不同酸碱度、不同离子强度下,贻贝粘蛋白在凝胶上的静态吸附、动态吸附及解吸附过程。[结果]氯化钠浓度从0增加到0.5mol/L,介质和蛋白之间平衡吸附量变化在6%以内;而酸碱度对吸附的影响较大,当酸碱度跨越蛋白等电点时,单位酸碱度(pH)最大吸附量变化百分比达23%。[结论]介质的复合配基与贻贝粘蛋白间表现了离子交换、疏水作用、氢键吸附的混合吸附作用,采用酸碱度高于等电点的洗脱液洗脱贻贝粘蛋白,得到纯度为90%的贻贝粘蛋白。

关键词：混合模式吸附纯化贻贝粘蛋

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疏水相互作用与亲水相互作用组合色谱纯化缩宫素

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过程工程学报 2010年第3期10卷 598-602页

作者：张晓鸥宋茂谦王长海 jan-christer janson 顾铭大连理工大学环境与生命学院生物科学与工程系辽宁大连116024 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190 Department of Physical and Analytical Chemistry Uppsala Biomedical CentreUppsala University

将疏水相互作用色谱与亲水相互作用色谱结合,建立了用于化学合成缩宫素粗品分离纯化的两步纯化工艺.先以纯水为流动相,采用Nylon6疏水相互作用色谱对粗品进行脱盐与富集,后以Superose12亲水相互作用色谱进行进一步纯化,两步纯化后,峰面... 详细信息

将疏水相互作用色谱与亲水相互作用色谱结合,建立了用于化学合成缩宫素粗品分离纯化的两步纯化工艺.先以纯水为流动相,采用Nylon6疏水相互作用色谱对粗品进行脱盐与富集,后以Superose12亲水相互作用色谱进行进一步纯化,两步纯化后,峰面积纯度达93.5%,提高了5.96倍,总回收率为50.1%,与用C18为介质的传统两步反相色谱纯化的结果相当.本方法有机溶剂用量仅为传统反相色谱的1/7,且两种介质都能耐受极端pH值清洗条件,重复利用率高.

关键词：聚己内酰胺琼脂糖凝胶疏水相互作用色谱亲水相互作用色谱缩宫素纯化

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雷丸多糖S-4002的抗炎免疫调节作用

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中国医学科学院学报 2016年第2期38卷 245-246页

作者：朱秀媛杜晓敏 jan christer janson 薛立明李宁元白金叶程桂芳中国医学科学院北京协和医学院药物研究所药理室北京100050 山东省医药工业研究所药理室济南250014 瑞典乌普萨拉大学化学室

雷丸（Polyporus mylittae Cook. et Mass,异名Omphalia lapidescens schraet ）为多孔菌科植物雷丸菌的干燥菌核，中医主要用于治疗绦虫、钩虫等多种寄生虫症。

关键词：雷丸多糖抗炎免疫调节

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坛紫菜藻红蛋白分离纯化研究

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安徽农业科学 2012年第23期40卷 11603-11605页

作者：宋茂谦周天琼高敏王长海 jan-christer janson 顾铭烟台大学生命科学学院山东烟台264005 杭州华津药业服份有限公司浙江杭州310013 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190 Department of Physical and Analytical Chemistry Uppsala Biomedical CentreUppsala University

[目的]建立一种新型、高效、快速的藻红蛋白分离纯化方法,并对其分离机理进行探讨。[方法]以坛紫菜的藻红蛋白搅切法提取物为原料,首先通过100和500 kDa的超滤离心管对其进行超滤分离,再在Superose 12色谱柱上以不同种类和不同浓度的流... 详细信息

[目的]建立一种新型、高效、快速的藻红蛋白分离纯化方法,并对其分离机理进行探讨。[方法]以坛紫菜的藻红蛋白搅切法提取物为原料,首先通过100和500 kDa的超滤离心管对其进行超滤分离,再在Superose 12色谱柱上以不同种类和不同浓度的流动相对藻红蛋白粗提物进行等度洗脱,分析其分离机理,并优化分离条件。[结果]在0.05 mol/L NaCl等度洗脱的条件下,藻红蛋白在Superose12色谱柱上表现为典型的氢键吸附模式;在优化的条件下,通过超滤-Superose 12氢键吸附分离的方法,可以使坛紫菜藻红蛋白提取物纯度(A565/A280)达到7.98,总回收率52.9%。[结论]该研究结果表明藻红蛋白在Superose 12色谱柱上存在氢键吸附作用,同时,该研究所建立的超滤-Superose 12氢键吸附分离方法是一种新型、高效、快速的藻红蛋白分离纯化方法。

关键词：藻红蛋白氢键吸附高交联琼脂糖分离

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利用β-环糊精键合固定相分离纯化葛根素

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色谱 2003年第6期21卷 610-613页

作者：贺湘凌谭天伟 janson jan-christer 北京化工大学生物工程系北京100029 Center for Surface Biotechnology Uppsala University

使用β 环糊精(β CD)与琼脂糖凝胶偶联合成的几种新型键合固定相对葛根黄酮进行液相色谱分离纯化,分离效果最好的介质为聚β CD偶联烯丙基 SepharoseHP所得的固定相,该固定相湿凝胶的样品负载量达1 21g/L。色谱分离时采用的流动相为10%... 详细信息

使用β 环糊精(β CD)与琼脂糖凝胶偶联合成的几种新型键合固定相对葛根黄酮进行液相色谱分离纯化,分离效果最好的介质为聚β CD偶联烯丙基 SepharoseHP所得的固定相,该固定相湿凝胶的样品负载量达1 21g/L。色谱分离时采用的流动相为10%(体积分数)醋酸水溶液,葛根素的收率在97%以上时,其纯度高于93%。

关键词： β-环糊精键合固定相分离纯化葛根素葛根中药有效成分

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β-环糊精键合固定相分离纯化银杏叶提取物和银杏黄酮

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中草药 2004年第10期35卷 1105-1109页

作者：邓利孙猛谭天伟王芳 janson jan christer 北京化工大学生命科学与技术学院 Surface Biotechnology Centre Uppslal UniversitySweden

目的考察以β-环糊精(β-CD)为键合固定相的色谱柱分离纯化银杏叶提取物和银杏黄酮的影响因素。方法以色谱图中色谱峰的个数和目标物为离度为指标,采用低压液相色谱技术对银杏叶提取物和银杏黄酮进行分离纯化。同时比较固定相、流动... 详细信息

目的考察以β-环糊精(β-CD)为键合固定相的色谱柱分离纯化银杏叶提取物和银杏黄酮的影响因素。方法以色谱图中色谱峰的个数和目标物为离度为指标,采用低压液相色谱技术对银杏叶提取物和银杏黄酮进行分离纯化。同时比较固定相、流动相、缓冲液、pH值、洗脱速度和上样体积对分离结果的影响。结果氯代环氧丙烷偶联β-CD-Superose 12 pg键合相能够较好地分离银杏叶提取物和银杏黄酮,优于葡聚糖凝胶Sephardex LH-20。结论 β-环糊精键合固定相适用于银杏叶提取物和银杏黄酮的分离与纯化。

关键词： β-环糊精键合固定相银杏叶提取物银杏黄酮分离纯化

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长白山白眉蝮蛇毒类凝血酶Gussurobin基因的克隆、表达与纯化(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第1期34卷 6-10页

作者：杨青,胡学军,许小明,安利佳,袁晓东,苏志国,janson jan-christer 大连理工大学化工学院生物工程研究所大连理工大学化工学院生物工程研究所大连理工大学化工学院生物工程研究所大连理工大学化工学院生物工程研究所宝生物大连公司中国科学院化工冶金研究所生物化学工程国家重点实验室 Biosurface Science Center 大连116012 大连116012

根据同源性 ,在高度保守的上游信号肽区域设计引物 ,通过RT PCR反应 ,从长白山白眉蝮蛇 (Gloydiusussurensis)毒腺总RNA中克隆得到类凝血酶 gussurobincDNA ,双向测序得到 gussurobin基因的全序列并由此推测出相应的氨基酸序列。与其他... 详细信息

根据同源性 ,在高度保守的上游信号肽区域设计引物 ,通过RT PCR反应 ,从长白山白眉蝮蛇 (Gloydiusussurensis)毒腺总RNA中克隆得到类凝血酶 gussurobincDNA ,双向测序得到 gussurobin基因的全序列并由此推测出相应的氨基酸序列。与其他已知的类凝血酶不同 ,gussurobin只含有一个可能的糖基化位点 ,即Asn12 4 Ser12 5 Thr12 6。将gussurobin基因克隆到表达载体 pPIC9K中 ,电极转化至毕氏酵母菌株GS115中 ,经G418抗性筛选和营养缺陷型筛选获得重组子。经摇瓶培养 ,获得表达。经过柱层析分离 ,获得SDS PAGE电泳纯的重组gussurobin。

关键词：类凝血酶 gussurobin cDNA序列表达纯化

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