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四环素诱导调控DEC1表达的Vero细胞系的构建及鉴定

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畜牧与兽医 2017年第5期49卷 103-108页

作者：郇文彬明鑫鲍晨沂洪涛 jung yong-sam 钱莺娟南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为了构建四环素(tetracycline,Tet)诱导的利用Tet-on诱导表达系统调控的Vero-TR母细胞,建立Tet诱导表达或沉默DEC1的Vero细胞系并加以鉴定。试验将表达Tet阻遏蛋白(Tet repressor protein,TetR)的pc DNA6转染至Vero细胞,通过Blasticidin筛选稳定表达TetR的阳性细胞克隆,即Vero-TetR母细胞系。将克隆有DEC1基因(CDS区的pc DNA4真核表达载体或克隆有特异性靶向DEC1基因的shRNA的p Babe-H1真核表达载体,分别转染至Vero-TR细胞,通过Zeocin或Puromycin筛选诱导表达或沉默DEC1的阳性细胞克隆,命名为Vero-DEC1和VerosiDEC1。利用Western blot检测Vero细胞中Tet诱导表达或沉默DEC1的效果。最后成功构建了Vero-TR、Vero-DEC1和Vero-siDEC1的稳定细胞系,Western blot结果显示DEC1能够在Tet的调控下有效表达或沉默。Vero-TR母细胞系的成功构建为建立其他宿主细胞基因表达或沉默的细胞系提供了重要材料,Vero-DEC1和Vero-siDEC1细胞系的成功构建为研究DEC1在正常或感染等应激情况下的生物学功能奠定了基础。

关键词： Tet诱导调控细胞系 DEC1 基因表达基因沉默

马立克病病毒致瘤蛋白Meq转录调节鸡p21基因的表达

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畜牧与兽医 2018年第5期50卷 84-88页

作者：鲍晨沂连雪杨莎莎张旭 jung yong-sam 钱莺娟南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业部细菌学重点实验室

为研究马立克病病毒（Marek＇s disease virus,MDV）致瘤蛋白Meq对细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21表达的调节作用,采用RTPCR、Western blot方法检测Meq蛋白表达在鸡胚成纤维细胞（Chicken embryo fibroblasts,CEF）中对p21 mRNA和... 详细信息

为研究马立克病病毒（Marek＇s disease virus,MDV）致瘤蛋白Meq对细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21表达的调节作用,采用RTPCR、Western blot方法检测Meq蛋白表达在鸡胚成纤维细胞（Chicken embryo fibroblasts,CEF）中对p21 mRNA和蛋白水平的影响。然后,构建p21启动子的荧光素酶报告载体,检测Meq蛋白对p21的启动子活性的影响。最后,分别用MDV Md5强毒株和CVI988/Rispens疫苗毒株感染CEF细胞,利用Western blot检测MDV感染后p21蛋白水平的变化。结果：过表达Meq上调p21的mRNA和蛋白表达水平,Meq能够激活p21基因启动子活性,MDV感染细胞中p21蛋白的表达水平也有明显升高。这些发现为了解Meq在MDV感染中的作用机理奠定了基础。

关键词： MDV Meq致瘤蛋白 p21基因

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黄连素抑制猪流行性腹泻病毒复制和组装

中国兽医学报 2019年第9期39卷 1829-1835页

作者：叶跃天郇文彬陈欢钱莺娟 jung yong-sam 戴建君南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

通过Western blot、qRT-PCR、噬斑形成试验等方法检测细胞病变、病毒增殖水平、细胞中病毒蛋白水平与基因水平表达来探究黄连素是否具有抗猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)活性,并通过检测细胞凋亡相关的标志蛋... 详细信息

通过Western blot、qRT-PCR、噬斑形成试验等方法检测细胞病变、病毒增殖水平、细胞中病毒蛋白水平与基因水平表达来探究黄连素是否具有抗猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)活性,并通过检测细胞凋亡相关的标志蛋白PARP1、caspase7以探究黄连素是否影响病毒引起的细胞凋亡。结果显示,黄连素明显抑制了PEDV在Vero细胞中引起的细胞病变,明显降低了细胞内与上清中的病毒粒子的产生。在后续研究中,发现黄连素抑制了PEDV的复制和组装阶段,对病毒的吸附、入胞、释放的过程并没有明显影响。另外,检测了细胞凋亡的标志蛋白PARP1和caspase7,发现黄连素下调了PARP1、caspase7的剪切,减弱了PEDV诱导的细胞凋亡。结果表明,黄连素具有抗PEDV活性,并抑制PEDV的复制与组装阶段,可作为一种针对PEDV感染的潜在抗病毒药物。

关键词： PEDV 黄连素复制组装细胞凋亡

鸡细胞周期检验点激酶2(cChk2)单克隆抗体制备和鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第9期32卷 1255-1259页

作者：高俊娜连雪孙海伟李泽君张训海 jung yong-sam 陈鸿军钱莺娟南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 安徽科技学院家禽疫病防控监测安徽省重点实验室安徽凤阳233100

目的制备特异性鸡细胞周期检验点激酶2(cChk2)单克隆抗体(m Ab)。方法反转录PCR扩增cChk2基因,将其克隆入原核表达质粒p GEX-4T-3中,在BL21(DE3)中经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经SDS-PAGE检测可溶性。用cChk2腹腔免疫BALB/c小鼠... 详细信息

目的制备特异性鸡细胞周期检验点激酶2(cChk2)单克隆抗体(m Ab)。方法反转录PCR扩增cChk2基因,将其克隆入原核表达质粒p GEX-4T-3中,在BL21(DE3)中经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经SDS-PAGE检测可溶性。用cChk2腹腔免疫BALB/c小鼠,利用间接免疫荧光法(IFA)和Western blot法检测抗血清;血清检测阳性后,取小鼠脾脏与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,利用IFA和有限稀释法筛选阳性单克隆杂交瘤细胞株。结果 cChk2主要以包涵体形式存在,多抗血清具有良好的效价,获得9株阳性杂交瘤细胞株,即1F4、2D9、2G1、3D9、3E3、4B5、4E2、5C9及5F7。结论成功制备了特异性良好的cChk2 m Ab。

关键词：鸡细胞周期检验点激酶2(cChk2) 原核表达单克隆抗体

鸡细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21单克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2017年第6期47卷 701-706页

作者：李雪琪连雪鲍晨沂孙海伟陈鸿军 jung yong-sam 钱莺娟南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

为制备特异性的鸡细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21单克隆抗体(mAb),利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增鸡p21基因,将其克隆入原核表达载体pET-30a中,随后转化进入BL21(DE3)中,利用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经SDS-聚丙烯... 详细信息

为制备特异性的鸡细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21单克隆抗体(mAb),利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增鸡p21基因,将其克隆入原核表达载体pET-30a中,随后转化进入BL21(DE3)中,利用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离。切胶研磨,将收集的鸡p21蛋白腹腔免疫BALB/c小鼠,三免后,选取抗体阳性的小鼠脾与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合并筛选单抗。结果显示,经亚克隆纯化,共筛选获得12株阳性杂交瘤细胞株,即1B12、1E12、1H7、2B5、2C5、2C8、2D8、2F2、3C11、3D6、3G7和4G6。利用间接免疫荧光(IFA)、酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫印迹检测单抗效价。成功制备了特异性鸡p21单抗。这为进一步研究鸡p21生物学功能奠定了基础。

关键词：鸡 p21 单克隆抗体原核表达

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鸡源p53单克隆抗体的制备和鉴定

中国动物传染病学报 2018年第3期26卷 72-77页

作者：李雪琪陈鸿军连雪鲍晨沂孙海伟孙雯 jung yong-sam 钱莺娟南京农业大学动物医学院南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

转录因子p53广泛参与调节机体生理和病理过程,包括生长发育、新陈代谢、免疫应答、肿瘤发生、发展等,但是禽类p53的生物学功能尚不清楚。本研究扩增鸡p53基因并连入p ET-30a原核表达载体,将载体转化至大肠杆菌BL21中,利用IPTG诱导表达p5... 详细信息

转录因子p53广泛参与调节机体生理和病理过程,包括生长发育、新陈代谢、免疫应答、肿瘤发生、发展等,但是禽类p53的生物学功能尚不清楚。本研究扩增鸡p53基因并连入p ET-30a原核表达载体,将载体转化至大肠杆菌BL21中,利用IPTG诱导表达p53蛋白。经SDS-PAGE分离,收集p53蛋白并免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体。取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,利用免疫印记、间接免疫荧光和酶联免疫吸附法筛选阳性细胞株。共获得6株稳定分泌鸡p53蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1D7、3C4、4D4、4F6、4F7和4H2,均为Ig G亚类,并鉴定了1D7的特异性。本研究成功实现了鸡源p53蛋白的重组表达,制备出特异性较好的抗体,为研究p53在鸡体内的生物学作用奠定了基础。

关键词： p53 原核表达单克隆抗体鸡

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马立克病病毒Meq单克隆抗体的制备

中国兽医科学 2016年第9期46卷 1073-1078页

作者：高俊娜张幸星连雪孙海伟郇文彬张训海 jung yong-sam 陈鸿军钱莺娟南京农业大学动物医学院江苏南京210095 安徽科技学院家禽疫病防控监测安徽省重点实验室安徽凤阳233100 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

为研制马立克病病毒RB1B超强毒株致瘤蛋白Meq单克隆抗体,本研究通过聚合酶链式反应（PCR）扩增马立克病病毒（Md5）meq基因5′端第1~507位核苷酸,将其克隆入原核表达载体p Cold-TF,转化到BL21（DE3）感受态中,经异丙基硫代半乳糖苷（IPT... 详细信息

为研制马立克病病毒RB1B超强毒株致瘤蛋白Meq单克隆抗体,本研究通过聚合酶链式反应（PCR）扩增马立克病病毒（Md5）meq基因5′端第1~507位核苷酸,将其克隆入原核表达载体p Cold-TF,转化到BL21（DE3）感受态中,经异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,对表达产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行检测。用融合蛋白His-Meq169腹腔免疫BALB/c小鼠,利用间接免疫荧光（IFA）和Western-blot检测多抗血清;血清检测阳性后,取小鼠脾脏与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,利用IFA和有限稀释法筛选阳性单克隆杂交瘤细胞株,最后筛选出了4株阳性杂交瘤细胞株,即1C11、3E4、3G10和5H11。将获得的单抗经IFA方法检测强毒株Md5或弱毒株CVI988感染的CEF细胞,结果显示,Meq单抗可特异性识别MDV感染形成的细胞空斑。这为进一步研究Meq的生物学功能奠定了基础。

关键词：马立克病病毒 Meq 原核表达单克隆抗体

A Cu-Pd alloy catalyst with partial phase separation for the electrochemical CO_(2) reduction reaction

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Journal of Energy Chemistry 2024年第6期93卷 8-15,I0001页

作者： Gyeong Ho Han jung yong Seo Minji Kang Myung-gi Seo Youngheon Choi Soo Young Kim Sang Hyun Ahn School of Chemical Engineering and Material Science Chung-Ang UniversitySeoul 06974Republic of Korea Lotte Chemical Institute of Technology Daejeon 34110Republic of Korea Department of Materials Science and Engineering Korea UniversitySeoul 02841Republic of Korea

Cu catalysts can convert CO_(2) through an electrochemical reduction reaction into a variety of useful carbon-based ***,this capability provides an obstacle to increasing the selectivity for a single ***,we report a simple fabrication method for a Cu-Pd alloy catalyst for use in a membrane electrode assembly(MEA)-based CO_(2) electrolyzer for the electrochemical CO_(2) reduction reaction(ECRR)with high selectivity for CO *** the composition of the Cu-Pd alloy catalyst was fabricated at 6:4,the selectivity for CO increased and the production of multi-carbon compounds and hydrogen is *** a Cu-Pd alloy catalyst with 6:4 ratio as the cathode of the MEAbased CO_(2) electrolyzer showed a CO faradaic efficiency of 92.8%at 2.4 V_(cell).We assumed that these results contributed from the crystal planes on the surface of the Cu-Pd *** phases of the Cu-Pd alloy catalyst were partially separated through annealing to fabricate a catalyst with high selectivity for CO at low voltage and C_(2)H_4 at high *** results of CO-stripping testing confirmed that when Cu partially separates from the lattice of the Cu-Pd alloy,the desorption of~*CO is suppressed,suggesting that C-C coupling reaction is favored.

关键词： Cu-Pd catalyst Electrodeposition Electrochemical carbon dioxide reduction Partial phase separation Membrane electrode assembly-based electrolyzer

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蓝舌病毒14型的分离与鉴定

中国兽医科学 2019年第7期49卷 855-860页

作者：曹雨张莹辉赵炜陈新薄宗义姚文生 jung yong-sam 戴建君钱莺娟印春生南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部细菌学重点实验室江苏南京210095 中国兽医药品监察所北京100081

为了解我国新疆地区羊蓝舌病的流行情况,对某羊场疑似发生蓝舌病的羊病料进行了采集,并进行病毒分离和鉴定。应用间接ELISA试剂盒检测血清抗体,抗凝血样品接种敏感的BHK21细胞进行连续盲传,对细胞病变呈阳性的样品进行间接免疫荧光鉴定... 详细信息

为了解我国新疆地区羊蓝舌病的流行情况,对某羊场疑似发生蓝舌病的羊病料进行了采集,并进行病毒分离和鉴定。应用间接ELISA试剂盒检测血清抗体,抗凝血样品接种敏感的BHK21细胞进行连续盲传,对细胞病变呈阳性的样品进行间接免疫荧光鉴定,同时针对VP7片段和VP2片段设计引物进行RT-PCR检测鉴定,并对其L2基因进行系统发育树分析。结果显示,血清中BTV抗体检测均为阳性,接种BHK21细胞后均产生了特异性细胞病变,并与FITC标记的抗BTV单抗特异性结合,针对VP7扩增出1156bp片段,针对VP2分别扩增出850bp和1581bp片段,经测序和序列分析确定为BTV-14型。结果表明,我国新疆地区存在蓝舌病毒14型,这也是我国境内首次分离到蓝舌病毒14型,为进一步防控我国蓝舌病疫情提供了科学依据。

关键词：蓝舌病毒 14型分离鉴定