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Molecular cloning,characterization and expression analysis of Sox9a and Foxl2 genes in half-smooth tongue sole(Cynoglossussemilaevis)

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Acta Oceanologica Sinica 2011年第1期30卷 68-77页

作者： DONG Xiaoli CHEN Songlin ji xiangshan SHAO Changwei College of Fisheries Ocean University of China Qingdao 266003 China Key Laboratory for Sustainable Utilization of Marine Fisheries Resources of Ministry ofAgriculture Yellow Sea Fisheries Research Institute Chinese Academy of Fishery SciencesQingdao 266071 China College of Animal Science and Technology Shandong Agricultural University Taian 271018 China

Two transcription factors, Sox9a and Foxl2 were cloned from half-smooth tongue sole （Cynoglossus semilaevis）. Sox9a is a new duplication of *** Sox9 gene. The complete cDNA of Sox9a gene was 1 842 bp long coding for 487 amino acids and Foxl2 gene was 1 817 bp coding for 308 amino acids. Sox9a was expressed higher in male brain, pituitary and gonad and Foxl2 were higher in female brain, pituitary and gonad. The expression of Sox9a gene in gonads of neo-males was higher than that of normal females. Sox9a and Foxl2 were expressed higher in gastrula stage than in other stages. In the period of sex differentiation, the expression of Sox9a was first going up and then going down and Foxl2 was higher expressed at 37 dph. The highest expressions of Sox9a and Foxl2 genes occurred in nine-month and 12-month old gonad tissues, respectively. Sox9a gene was considered to have inevitable links with sex reversal, sex differentiation and cell differentiation of embryos and formation of spermatogenic ceils. Foxl2 was considered to play a role in sex differentiation, cell differentiation of embryos but not to be necessary for sex determination and sex reversal.

关键词： half-smooth tongue sole Cynoglossus semilaevis Sox9 Foxl2 real-time PCR sexreversal neo-male

精子冷冻保存对大菱鲆后代遗传结构影响的微卫星分析

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高技术通讯 2005年第6期15卷 87-91页

作者：陈松林刘云国季相山中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室青岛266071 中国海洋大学生命科学与技术学部青岛266003 山东农业大学水产系泰安271018

用微卫星技术对大菱鲆冻精和鲜精受精鱼苗的遗传结构进行了分析比较,以期间接地检验冷冻保存没有对精子的遗传结构产生影响.精子冷冻按三步法进行,冻后成活率为65%(对照为85%).精子在液氮中保存半小时后解冻授精,冻精受精率和孵化率与... 详细信息

用微卫星技术对大菱鲆冻精和鲜精受精鱼苗的遗传结构进行了分析比较,以期间接地检验冷冻保存没有对精子的遗传结构产生影响.精子冷冻按三步法进行,冻后成活率为65%(对照为85%).精子在液氮中保存半小时后解冻授精,冻精受精率和孵化率与鲜精的没有显著差异.实验用冻精和鲜精受精鱼苗各15条,且来自相同的父母本,这减少了亲本遗传结构不同对实验结果的干扰.10对微卫星引物的分析结果显示,15条鲜精受精大菱鲆苗共得到等位基因30个,基因型25个,杂合度为0.5747;15条冻精受精大菱鲆苗共得到等位基因30个,基因型25个,杂合度为0.5714.在鲜精受精大菱鲆和冻精受精大菱鲆的30个等位基因中,只有7个等位基因的频率发生了比较显著变化.

关键词：冷冻保存大菱鲆微卫星分析精子结构影响等位基因后代遗传结构微卫星技术微卫星引物分析比较分析结果基因型杂合度鲜精冻精三步法成活率孵化率受精率父母本鱼苗实验授精解冻亲本

牙鲆自然杀伤细胞增强因子（NKEF）全长cDNA的克隆及表达分析

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高技术通讯 2005年第11期15卷 86-90页

作者：王志坚陈松林季相山中国海洋大学海洋生命学院青岛266003中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室青岛266071 中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室青岛266071

采用快速扩增cDNA末端(rapid amplification of cDNA ends,RACE)的方法,分离和测定了牙鲆自然杀伤细胞增强因子(NKEF)cDNA的全长核苷酸序列,5'RACE扩增分离得到了400bp左右的片段,3'RACE扩增得到了800bp左右的片段,经过拼接得到了牙鲆N... 详细信息

采用快速扩增cDNA末端(rapid amplification of cDNA ends,RACE)的方法,分离和测定了牙鲆自然杀伤细胞增强因子(NKEF)cDNA的全长核苷酸序列,5'RACE扩增分离得到了400bp左右的片段,3'RACE扩增得到了800bp左右的片段,经过拼接得到了牙鲆NKEF全长cDNA序列.牙鲆NKEF cDNA全长1028bp(不包含polyA),其中包括67bp的5'非翻译区、597bp的开放阅读框和364bp的3'非翻译区(不包含polyA),整个开放阅读框编码198个氨基酸.RT-PCR分析表明,NKEF基因在牙鲆不同组织中普遍表达,但是表达水平存在着明显的差异.研究结果为提高牙鲆自身免疫防御能力的研究提供了理论依据.

关键词：牙鲆自然杀伤细胞增强因子快速扩增cDNA末端 cDNA

降解亚硝酸盐的大山芽孢杆菌JY-1的分离、鉴定及其作用

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中国水产科学 2022年第2期29卷 284-294页

作者：周敏宁文陈红菊季相山赵燕山东农业大学动物科技学院

为得到稳定高效降解亚硝酸盐的益生菌,通过菌株富集分离培养、菌株鉴定、发酵培养基优化等实验对菌株进行了分离、鉴定,对菌株降亚硝酸盐效果进行了分析,并克隆了亚硝酸盐还原酶基因。结果显示,从养殖池塘、污水处理厂等5处混合水体中... 详细信息

为得到稳定高效降解亚硝酸盐的益生菌,通过菌株富集分离培养、菌株鉴定、发酵培养基优化等实验对菌株进行了分离、鉴定,对菌株降亚硝酸盐效果进行了分析,并克隆了亚硝酸盐还原酶基因。结果显示,从养殖池塘、污水处理厂等5处混合水体中分离、筛选出一株具有亚硝酸盐降解能力的菌株,命名为JY-1。菌株生理生化和16S rDNA序列分析显示, JY-1是大山芽孢杆菌(Bacillus gaemokensis);发酵培养基优化显示, JY-1的最适氮源和碳源分别是蛋白胨和葡萄糖。JY-1降亚硝酸盐效果分析显示, 3 h JY-1可将水体中0.6 mg/L的亚硝酸盐降到0.0 mg/L。安全性评价检测显示,菌株JY-1菌落周围无溶血环出现,且高浓度JY-1 (10~9 CFU/mL)灌服尼罗罗非鱼对其无明显影响。克隆获得了JY-1亚硝酸盐还原酶基因,结合JY-1对水体中氨氮、亚硝酸盐、总氮等的影响实验,初步推测JY-1是通过酶降解途径把亚硝酸氮还原后将其移出水体的。本研究为制备高效降解亚硝酸盐的微生态制剂产品提供了重要原料。

关键词：大山芽孢杆菌亚硝酸盐养殖水体分离鉴定

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日本沼虾多态性标记筛选及群体遗传结构分析

水产科学 2020年第5期39卷 639-648页

作者：赵燕陈红菊孔维祎季相山王慧山东农业大学山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室山东泰安271018 中国农业大学(烟台)海洋学院山东烟台264000

从转录组测序数据中筛选重复次数较多、两翼序列较长的简单重复序列用于多态性EST-SSR标记的筛选,利用荧光标记SSR技术分析太湖、长江下游(崇明岛附近)、微山湖和东平湖4个地理群体日本沼虾的遗传多样性。从日本沼虾转录组测序数据中选... 详细信息

从转录组测序数据中筛选重复次数较多、两翼序列较长的简单重复序列用于多态性EST-SSR标记的筛选,利用荧光标记SSR技术分析太湖、长江下游(崇明岛附近)、微山湖和东平湖4个地理群体日本沼虾的遗传多样性。从日本沼虾转录组测序数据中选择546个cDNA序列,设计了60对引物,有33对能扩增出稳定、清晰的条带,其中12对呈现出良好的多态性。这12个多态性微卫星标记的等位基因数为3~7,观测杂合度为0.1724~0.9630,期望杂合度为0.1942~0.8462。群体遗传多样性分析结果显示,微山湖群体的平均期望杂合度和观测杂合度最高,分别为0.8403、0.8350;东平湖的次之,为0.8350、0.7854;长江下游群体的最低,为0.7145、0.7909。由此可见,北方2个群体的遗传多样性要高于南方2个群体。4个日本沼虾群体的分子方差分析显示,东平湖群体与长江下游群体、微山湖群体与长江下游群体的遗传分化指数介于0.05~0.15,达到中等分化程度。聚类分析显示,微山湖和东平湖群体聚类为一支,再先后与太湖群体、长江下游群体(崇明岛附近)聚类,这与各日本沼虾群体实际的地理距离吻合,反映出日本沼虾的生物地理进化关系。

关键词：日本沼虾 EST-SSR 荧光SSR 地理群体遗传结构

尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)cyp19a1a原核表达与蛋白纯化

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渔业科学进展 2014年第4期35卷 45-50页

作者：王金文春根赵燕王慧王艺雅季相山南昌大学生命科学学院南昌330031 山东农业大学动物科技学院泰安271018

为表达和纯化尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)cyp19a1a蛋白,本研究从尼罗罗非鱼卵巢提取总RNA,反转录获得cDNA模板后,利用设计的引物PCR扩增cyp19a1a ORF区1200 bp片段,双酶切后连接到pET-28a(+)表达载体上,经酶切验证和DNA测序鉴定... 详细信息

为表达和纯化尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)cyp19a1a蛋白,本研究从尼罗罗非鱼卵巢提取总RNA,反转录获得cDNA模板后,利用设计的引物PCR扩增cyp19a1a ORF区1200 bp片段,双酶切后连接到pET-28a(+)表达载体上,经酶切验证和DNA测序鉴定,证明成功构建了pET-28a-cyp19a1a原核表达载体。将表达载体转化到大肠杆菌(***)BL21中,优化IPTG诱导浓度和诱导时间。结果显示,在0.5 mmol/L IPTG诱导8 h后,cyp19a1a重组蛋白大量表达,并以包涵体形式存在。通过Ni2+-NTA层析柱和切胶纯化,获得与预期片段大小一致的表达蛋白,并用Western blotting验证了纯化的蛋白为目的蛋白。本研究为制备cyp19a1a抗体和研究高温对cyp19a1a蛋白表达的影响提供了重要的基础。

关键词：尼罗罗非鱼 cyp19a1a 原核表达蛋白纯化

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半滑舌鳎四倍体鱼苗的诱导与鉴定

中国水产科学 2012年第2期19卷 196-201页

作者：李文龙陈松林季相山谢明树徐营邓寒中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业可持续发展重点开放实验室上海海洋大学水产与生命学院

采用静水压法处理半滑舌鳎(Cynoglossus semiliaevis)受精卵以抑制其卵裂并进行染色体加倍,筛选出有效的静水压处理起始时间、处理强度及其持续时间。结果表明,孵化水温(23±0.2)℃时,授精后21.5 min,采用40 MPa的静水压压力,休克处理4.... 详细信息

采用静水压法处理半滑舌鳎(Cynoglossus semiliaevis)受精卵以抑制其卵裂并进行染色体加倍,筛选出有效的静水压处理起始时间、处理强度及其持续时间。结果表明,孵化水温(23±0.2)℃时,授精后21.5 min,采用40 MPa的静水压压力,休克处理4.5 min,四倍体诱导效果最好,鱼苗四倍体率达到68.3%。采用流式细胞仪分析了四倍体鱼苗细胞DNA含量,表明四倍体鱼苗细胞DNA含量为二倍体对照鱼苗的2倍。通过染色体制作分析表明四倍体鱼苗的染色体数为84条,而二倍体对照鱼苗的染色体数为42条。本研究采用静水压方法,在国内外首次建立了半滑舌鳎四倍体诱导方法。本项技术的建立旨在为大量生产半滑舌鳎三倍体不育群体奠定基础。

关键词：半滑舌鳎四倍体人工诱导静水压

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铜锈环棱螺形态性状对体质量的影响分析

水产科学 2024年第1期43卷 136-143页

作者：于明滕建张冲赵燕李娴季相山陈红菊山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 山东省淡水渔业研究院山东济南250117

为探究铜锈环棱螺不同群体主要形态性状间的相关性及影响其体质量的主要因素,随机选取微山湖、东平湖、骆马湖、洪泽湖、长江江都区段和滇池的野生铜锈环棱螺,测量其壳高、壳宽、壳厚、壳口长、壳口宽及体质量,采用相关分析与通径分析方... 详细信息

为探究铜锈环棱螺不同群体主要形态性状间的相关性及影响其体质量的主要因素,随机选取微山湖、东平湖、骆马湖、洪泽湖、长江江都区段和滇池的野生铜锈环棱螺,测量其壳高、壳宽、壳厚、壳口长、壳口宽及体质量,采用相关分析与通径分析方法,并建立体质量的最优多元回归方程。试验结果显示,壳厚与体质量相关性不显著,壳高、壳宽、壳口宽和壳口长均与体质量相关性极显著。6个群体的决定系数总和分别为0.916、0.927、0.794、0.886、0.810和0.783,表明已分析出影响体质量的大部分形态性状。铜锈环棱螺体质量性状的主要影响因素在6个群体中并不相同,其中壳高或壳宽对体质量的影响作用比较大,是铜锈环棱螺体质量的主要影响因素。经多元回归方差分析和偏回归系数显著性检验,偏回归系数极显著(P<0.01)。本试验结果可为铜锈环棱螺的品种选育提供参考依据。

关键词：铜锈环棱螺形态性状体质量相关性分析通径分析

草鱼天然抗性相关巨噬蛋白基因的表达特征与蛋白表达

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中国水产科学 2015年第5期22卷 908-915页

作者：杨康王艺雅刘铁柱李同明季相山王慧山东农业大学动物科技学院

为探讨Nramp基因在草鱼(Ctenopharyngodon idellus)免疫应答中的作用,采用实时荧光定量PCR技术,对比研究了Nramp基因在草鱼不同发育阶段、不同组织及嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)攻毒感染后4个组织不同时间的差异表达,并利用原... 详细信息

为探讨Nramp基因在草鱼(Ctenopharyngodon idellus)免疫应答中的作用,采用实时荧光定量PCR技术,对比研究了Nramp基因在草鱼不同发育阶段、不同组织及嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)攻毒感染后4个组织不同时间的差异表达,并利用原核表达技术对草鱼Nramp基因ORF区642 bp的目的片段进行蛋白表达,获得40 k D的融合蛋白。实时荧光定量PCR分析结果表明,Nramp在草鱼胚胎发育过程中的表达量随着发育时间的增加而逐渐增强,在幼鱼期的表达量达到最大。成年健康草鱼不同组织中的表达量差异显著(P<0.05),在肝中的表达量最高,其次是在脾、头肾、肠中的表达量较高,而在眼和鳔中的表达量最低。草鱼感染嗜水气单胞菌后,在头肾、肝、脾、肠中Nramp的表达量都显著上升(P<0.05),在头肾中感染12 h后显著上升,48 h达到最大,在72 h和96 h时又显著下调,在7 d时表达量继续下调而逐渐回归到初始水平;在肝中Nramp基因的表达量在4 h时出现下调,在12 h又显著上调,随后在24 h出现下调,在48 h又上调,72 h达到最大并保持较高水平到7 d;在肠中m RNA表达量在12 h显著上调,48 h达到最大,在72 h和96 h显著下调,在7 d时表达量基本回归到初始水平;在脾中m RNA表达量在4 h开始上升,12 h达到最大,在24 h和48 h表达水平显著下调,在7 d时表达量回归到初始水平。草鱼感染致病菌可引起免疫相关组织中Nramp的表达量上升,说明Nramp在硬骨鱼类的天然免疫反应过程中发挥着重要作用。

关键词：草鱼 Nramp基因表达分析原核表达蛋白纯化