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银杏叶提取物对鲤生长性能、抗氧化功能和免疫相关基因表达的影响

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中国水产科学 2021年第3期28卷 326-336页

作者：何勤贾睿曹丽萍杜金梁顾郑琰 galina jeney 徐跑殷国俊南京农业大学无锡渔业学院中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业农村部淡水渔业与种质资源利用重点实验室中国水产科学研究院淡水渔业研究中心鱼类免疫药理国际联合实验室匈牙利水产与渔业研究所国家农业研究中心

为探讨日粮中添加不同水平的银杏叶提取物(Ginkgo bioba extract, GBE)对鲤(Cyprinus carpio)生长性能、血清生化指标、抗氧化功能、细胞色素酶以及免疫相关基因表达的影响,在基础饲料中分别添加不同含量的银杏叶提取物[0 (对照组)、0.5... 详细信息

为探讨日粮中添加不同水平的银杏叶提取物(Ginkgo bioba extract, GBE)对鲤(Cyprinus carpio)生长性能、血清生化指标、抗氧化功能、细胞色素酶以及免疫相关基因表达的影响,在基础饲料中分别添加不同含量的银杏叶提取物[0 (对照组)、0.5 g/kg、1.0 g/kg、5.0 g/kg]投喂鲤60 d。饲喂实验结束后,称重并采集血液、肝脏、肠道、鳃和肌肉组织,检测相关生化指标以及基因表达的变化。结果表明:与对照组相比,饲料中添加不同水平GBE对鲤生长性能和饵料系数均未产生显著影响(P>0.05)。血清生化数据显示:饲料中添加GBE显著提高了总蛋白(TP)含量,而降低了葡萄糖(Glu)和皮质醇(cortisol)水平(P0.05)。抗氧化参数表明:与对照组相比,日粮中添加GBE对血清、肝脏、肠道、鳃和肌肉中丙二醛(MDA)含量无显著影响(P>0.05),但肝脏中总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性、以及还原型谷胱甘肽(GSH)含量均显著升高。同时,1.0g/kgGBE显著提高了肠道和鳃T-AOC含量(P<0.05);5.0g/kgGBE显著提高了鳃GSH含量(P<0.05)。基因表达结果显示:与对照组相比,饲料中添加GBE能显著诱导肝脏和肠道中cyp3a基因表达,而下调cyp1a和cyp1b基因表达;同时,肝脏和肠道中免疫相关基因(c3和c-lyz)表达量在1.0 g/kg GBE添加组中显著上调(P<0.05)。综上所述, GBE作为饲料添加剂不能改善鲤的生长性能和饵料系数,但可以增强鲤的抗应激、抗氧化能力和免疫相关基因的表达,并且未对鲤产生肝毒性,鲤饲料中GBE建议添加量为1.0 g/kg。

关键词：鲤银杏叶提取物生长性能血清生化指标抗氧化能力基因表达

香菇多糖和黄芪多糖对鲤免疫细胞的活性和IL-1β体外诱生表达的影响

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水产学报 2008年第4期32卷 628-635页

作者：曹丽萍丁炜东张柳 galina jeney 徐跑殷国俊中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部水生动物遗传育种和养殖生物学重点开放实验室华中农业大学水产学院 Research Institute for Fisheries Aquaculture and Irrigation

为了探讨香菇和黄芪多糖对鲤免疫细胞的免疫活性作用,采用Percoll密度离心等技术,对鲤的头肾巨噬细胞和外周血白细胞进行分离纯化,并离体培养,从细胞和分子水平上研究了香菇和黄芪多糖的免疫调节作用。巨噬细胞和外周血白细胞分别体外... 详细信息

为了探讨香菇和黄芪多糖对鲤免疫细胞的免疫活性作用,采用Percoll密度离心等技术,对鲤的头肾巨噬细胞和外周血白细胞进行分离纯化,并离体培养,从细胞和分子水平上研究了香菇和黄芪多糖的免疫调节作用。巨噬细胞和外周血白细胞分别体外暴露不同浓度的黄芪多糖和香菇多糖后,采用MTT法测定它们对鲤外周血白细胞增殖的影响;NBT还原法和Griess试剂显色法测定对头肾巨噬细胞的呼吸爆发的影响;实时定量PCR法测定头肾巨噬细胞细胞因子IL-1β诱导表达的影响。结果显示,黄芪和香菇多糖作用头肾巨噬细胞24h后,香菇多糖浓度为1,10,100μg·mL-1时能显著诱导巨噬细胞的氧爆发活性,黄芪多糖则没有显著的诱导作用;黄芪和香菇多糖作用头肾巨噬细胞96h后,香菇多糖低浓度时对细胞的氮呼吸爆发活性无显著影响,黄芪多糖浓度10μg·mL-1能显著诱导氮呼吸爆发活性,而在浓度为1000μg·mL-1两者均表现为高浓度抑制作用;两者作用外周血白细胞24h后,香菇多糖浓度为100,1000μg·mL-1和黄芪多糖浓度为10,100μg·mL-1时都能显著促进鲤外周血淋巴细胞的增殖;两种多糖作用头肾巨噬细胞24h后能显著增强IL-1β的体外诱导表达。结果表明黄芪多糖和香菇多糖对离体培养鲤免疫细胞有明显活性作用,对鲤非特异性免疫和特异性免疫具有促进作用。

关键词：鲤多糖巨噬细胞 IL-1β

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银鲫IgM的纯化及其单克隆抗体的制备

水产学报 2006年第3期30卷 421-424页

作者：沈锦玉 Thompson K D Adams A galina jeney 钱冬沈智华浙江省淡水水产研究所 Institue of Aquaculture University of StirlingStirlingFK9 4LAUK Research Institute for Fisheries Aquaculture and IrrigationSzarvasP.O.Box 47H-5540Hungary

Aeromonas hydrophila septicemia was a serious infectious disease occurred in *** majority harmed fish was crucian carp（Carassius auratus gibelio）.It was reported that immune prevention was the effect measure to prevent this disease using *** *** it is necessary to develop monoclonal antibody（McAb） against the IgM from Crucian *** this study,the purification of serum immunoglobulin from Crucian carp was carried out by using Goat IgG *** concentration of purified IgM was 2.5 mg·*** using hybridoma-monoclonal antibody technology,hybridoma cell line secreted McAb against the IgM from crucian carp had been established and the characteristics of mab8 had been *** isotyping analysis,the results showed that it belong to IgG1,it was able to recognize the heavy chain of the IgM on western blot,and did not has any cross reaction with the Ig from 19 different fish species including common carp（Cyprinus carpio）,bighead carp（Aristichthys nobilis）,grass carp（Ctenopharhyngodon idella） and bream（Abramis brama） *** results demonstrated that McAb was highly specific and sensitive to the Ig of Crucian carp,and had the great potential to be used for analyzing the structure of crucian carp IgM,monitoring the immunity level of cultured Crucian carp and pathogen diagnosis.

关键词：银鲫免疫球蛋白单克隆抗体

姜黄素、甘草次酸和香菇多糖联合对CCl 4诱导的建鲤肝损伤的保护作用

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江苏农业学报 2018年第5期34卷 1100-1106页

作者：曹丽萍杜金梁贾睿殷国俊 galina jeney 丁炜东高崧扬州大学兽医学院江苏扬州225009 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部鱼类免疫药理学国际联合实验室江苏无锡214081 Research Institute for Fisheries Aquaculture and IrrigationAnn light 8Szarvas H-4440Hungary

以四氯化碳(CCl4)构建建鲤体内急性肝损伤模型,对姜黄素、甘草次酸和香菇多糖联合护肝作用进行研究。分别采用含有姜黄素、甘草次酸、香菇多糖和低、中、高剂量姜黄素+甘草次酸+香菇多糖联合中草药的饲料投喂60 d后,各组建鲤腹腔注射30%... 详细信息

以四氯化碳(CCl4)构建建鲤体内急性肝损伤模型,对姜黄素、甘草次酸和香菇多糖联合护肝作用进行研究。分别采用含有姜黄素、甘草次酸、香菇多糖和低、中、高剂量姜黄素+甘草次酸+香菇多糖联合中草药的饲料投喂60 d后,各组建鲤腹腔注射30%CCl4,注射剂量为每1 g鱼体注射0. 005 ml,禁食72 h,以诱导建鲤急性肝损伤。通过测定各组建鲤生长指标、血清和肝脏生化指标及肝组织炎性细胞因子m RNA的表达情况,观察姜黄素、甘草次酸和香菇多糖联合用药的保肝效果。结果显示:甘草次酸单味用药及中、高剂量姜黄素+甘草次酸+香菇多糖联合用药能显著提高建鲤的相对增重率和特定生长率,显著降低饵料系数;与模型组相比,各用药组能显著抑制CCl4导致的血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)和乳酸脱氢酶(LDH)活性的升高,显著恢复肝组织中谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,抑制丙二醛(MDA)生成,能显著抑制C-Rel、i NOS、IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-8表达量的升高;与姜黄素、甘草次酸或香菇多糖单味用药相比较,姜黄素+甘草次酸+香菇多糖联合用药的保肝效果更明显,随着联合用药剂量的升高,作用愈加显著。说明姜黄素、甘草次酸和香菇多糖联合用药,对CCl4诱导的建鲤肝损伤具有协同保护作用。

关键词：建鲤四氯化碳肝损伤中草药

大黄素对建鲤生长性能、抗氧化指标及肝脏CYP450酶的影响

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大连海洋大学学报 2020年第5期35卷 686-692页

作者：曹丽萍杜金梁贾睿丁炜东 jeney galina 徐跑殷国俊农业农村部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业农村部鱼类免疫药理学国际联合实验室江苏无锡214081 Research Institute for Fisheries Aquaculture and IrrigationAnn light 8Szarvas H-4440Hungary

为全面评价大黄素(emodin,EMD)对水产动物的保肝作用,在基础饲料中添加含1、3、5 g/kg的大黄素,将100尾初体质量约150 g的建鲤Cyprinus carpio Jian随机分为5组,分别为空白对照组(control)、模型组(CCl4)、低剂量药物组(1 g/kg EMD)、... 详细信息

为全面评价大黄素(emodin,EMD)对水产动物的保肝作用,在基础饲料中添加含1、3、5 g/kg的大黄素,将100尾初体质量约150 g的建鲤Cyprinus carpio Jian随机分为5组,分别为空白对照组(control)、模型组(CCl4)、低剂量药物组(1 g/kg EMD)、中剂量药物组(3 g/kg EMD)和高剂量药物组(5 g/kg EMD),每组设2个平行,每个平行10尾鱼,投喂60 d后,一次性腹腔注射30%的CCl4以诱导肝损伤,72 h后测定各组建鲤的生长指标、肝指数、生化指标、抗氧化指标、肝组织CYP450酶总活性及CYP1A和CYP3A的mRNA表达。结果表明:大黄素具有较强的清除DPPH自由基的能力,当大黄素浓度为6μg/mL时,其清除自由基的能力达81%;含3、5 g/kg大黄素的饲料能显著提高建鲤的相对增重率和特定生长率并显著降低饵料系数(P<0.05);含3、5 g/kg大黄素饲料能稳定肝细胞膜,显著抑制谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)及乳酸脱氢酶(LDH)的溶出且显著恢复血清中白蛋白和总蛋白含量(P<0.05);大黄素可有效缓解建鲤氧化应激程度,能显著促进肝组织匀浆中总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平的恢复(P<0.05),同时显著抑制丙二醛(MDA)生成(P<0.05);大黄素能显著降低肝组织CYP450酶含量(P<0.05),抑制CCl4诱导的CYP1A、CYP3A基因表达上调。研究表明,饲料中添加3~5 g/kg大黄素具有显著的保肝作用,该作用与其抗击氧化、清除自由基、提高生长性能、抑制CCl4对CYP450酶的诱导作用有关。

关键词：建鲤四氯化碳模型 CYP450

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2种多糖对鲤鱼离体培养免疫细胞活性的影响

安徽农业大学学报 2008年第2期35卷 219-223页

作者：曹丽萍丁炜东张柳 galina jeney 殷国俊中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部水生动物遗传育种和养殖生物学重点开放实验室无锡214081 华中农业大学水产学院武汉430070 Research Institute for Fisheries Aquaculture and IrrigationAnna Light 8Szarvas H-4440Hungary

采用Percoll密度离心等技术,对鲤鱼的头肾巨噬细胞和外周血白细胞进行分离纯化,并离体培养。体外暴露不同浓度的黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)和香菇多糖(Lentinan,LNT)后,分别采用MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)法测定它们对鲤鱼外周血白细胞增殖的影响;NBT(nitroblue tetrazolium)还原法和Griess试剂显色法测定对头肾巨噬细胞的呼吸暴发的影响。结果显示,香菇多糖能显著诱导巨噬细胞的氧暴发活性,黄芪多糖则没有显著的诱导作用;香菇多糖低浓度时对细胞的氮呼吸暴发活性无显著影响,黄芪多糖能显著诱导氮呼吸暴发活性,随着两者作用浓度的增加均表现为高浓度抑制作用;香菇多糖和黄芪多糖都能显著促进鲤鱼外周血淋巴细胞的增殖。结果表明黄芪多糖和香菇多糖对离体培养鲤鱼免疫细胞有明显活性作用,对鲤鱼非特异性免疫和特异性免疫具有促进作用,是有潜力的鱼用免疫增强剂。

关键词：多糖鲤鱼巨噬细胞免疫增强剂

Nrf2介导姜黄素对四氯化碳诱导鲫鱼肝损伤的保护作用

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江苏农业学报 2018年第1期34卷 114-121页

作者：张春云曹丽萍杜金梁贾睿顾郑琰殷国俊 galina jeney 南京农业大学无锡渔业学院江苏无锡214081 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部鱼类免疫药理学国际联合实验室江苏无锡214081 Research Institute for Fisheries Aquaculture and IrrigationAnna light 8Szarvas H-4440Hungary

为了评价姜黄素对四氯化碳(CCl_4)诱导鲫鱼肝损伤的保护作用以及核因子NF-E2相关因子(Nrf2)的调控作用,采用精密肝切片技术(Precision-cut liver slices,PCLS)分离肝组织并进行体外培养,以四氯化碳诱导建立急性肝损伤模型,同时用不同浓... 详细信息

为了评价姜黄素对四氯化碳(CCl_4)诱导鲫鱼肝损伤的保护作用以及核因子NF-E2相关因子(Nrf2)的调控作用,采用精密肝切片技术(Precision-cut liver slices,PCLS)分离肝组织并进行体外培养,以四氯化碳诱导建立急性肝损伤模型,同时用不同浓度(1μg/ml、5μg/ml和10μg/ml)的姜黄素处理肝组织切片,收集上清液及肝组织。检测谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、碱性磷酸酶(AKP)活性,以及丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)含量和总抗氧化能力(T-AOC)等生化指标,同时检测Nrf2和Keap1基因表达。结果表明:姜黄素可以改善CCl_4诱导的肝损伤,其浓度为1μg/ml和5μg/ml时能有效抑制GPT、GOT、LDH和AKP活性的升高,提高SOD、GSH-Px活性及T-AOC和GSH含量,降低MDA的生成,上调Nrf2基因表达。可见,姜黄素对CCl_4诱导的鲫鱼肝损伤有保护的作用,其作用机制可能是姜黄素能激活Nrf2基因在肝细胞中的表达,调节氧化应激,从而减轻CCl_4对肝损伤。

关键词：核因子E2相关因子2(Nrf2) 姜黄素四氯化碳肝损伤鲫鱼

香菇多糖对鲤鱼(Cyprinus carpio)离体培养免疫细胞的活性调节作用

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农业生物技术学报 2008年第4期16卷 616-621页

作者：曹丽萍丁炜东张柳 galina jeney 徐跑殷国俊中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部水生动物遗传育种和养殖生物学重点开放实验室华中农业大学 Research Institute for Fisheries Aquaculture and Irrigation Anna light 8Szarvas H-4440Hungary

采用Percoll密度离心等技术,对鲤鱼(Cyprinus carpip)的头肾巨噬细胞和外周血白细胞进行分离纯化,并离体培养。体外暴露不同浓度的香菇多糖后,分别采用MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)法测定它们对鲤鱼外周血白细胞增殖的影响;NBT(nitroblue tetrazolium)还原法和Griess试剂显色法测定对头肾巨噬细胞的呼吸爆发的影响;实时定量PCR法测定头肾巨噬细胞细胞因子IL-1β诱导表达的影响。结果显示,香菇多糖1、10和100μg/mL作用头肾巨噬细胞24 h后能显著地诱导巨噬细胞的氧爆发活性;作用头肾巨噬细胞96 h后,其低浓度对巨噬细胞生成NO无显著影响,当作用浓度为1 000μg/mL表现出显著的抑制作用;浓度为100和1000μg/mL的香菇多糖作用外周血白细胞24 h后显著地促进鲤鱼外周血白细胞的增殖,且在作用巨噬细胞24 h后100μg/mL能显著增强IL-1β的体外诱导表达。香菇多糖对离体培养鲤鱼免疫细胞有明显活性作用,对鲤鱼非特异性免疫和特异性免疫具有促进作用,是一种有潜力的鱼用免疫增强剂。

关键词：香菇多糖鲤鱼巨噬细胞 IL-1β

甘草总黄酮对高脂条件下罗非鱼肝损伤的保护作用

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浙江农业学报 2021年第10期33卷 1826-1835页

作者：杜金梁曹丽萍贾睿顾郑琰何勤徐跑 jeney galina 马玉忠殷国俊中国水产科学研究院淡水渔业研究中心/农业农村部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心/鱼类免疫药理学国际联合实验室江苏无锡214081 河北农业大学动物医学院河北保定071001 南京农业大学无锡渔业学院江苏无锡214081 匈牙利水产与渔业研究所国家农业研究中心匈牙利索尔沃什5440

为了研究甘草总黄酮对高脂饲料造成的罗非鱼(Oreochromis niloticus)脂肪肝损伤是否具有保护作用,随机将180尾健康无伤罗非鱼分成6组,即对照组、高脂饲料模型组和4个不同浓度甘草总黄酮组(0.05、0.10、0.50、1.00 g·kg^(-1)甘草总黄酮)... 详细信息

为了研究甘草总黄酮对高脂饲料造成的罗非鱼(Oreochromis niloticus)脂肪肝损伤是否具有保护作用,随机将180尾健康无伤罗非鱼分成6组,即对照组、高脂饲料模型组和4个不同浓度甘草总黄酮组(0.05、0.10、0.50、1.00 g·kg^(-1)甘草总黄酮),每组30尾。饲喂90 d后,采集罗非鱼各实验组肝,测定肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)活性、丙二醛(MDA)含量、甘油三酯(TG)含量、总胆固醇(TC)含量、总抗氧化能力(T-AOC)水平,Western blotting法检测肝中核转录因子-κB P65(NF-κB P65)和核转录因子-κB C-Rel(NF-κB C-Rel)蛋白表达水平,RT-PCR法测定肝中微粒体甘油三酸酯转移蛋白(MTTP)和载脂蛋白B100(ApoB100)基因表达情况。结果表明:与对照组相比,高脂饲料模型组罗非鱼肝匀浆中TG、TC、MDA含量极显著(P<0.01)升高,GSH活性、SOD活性、T-AOC水平均极显著(P<0.01)降低;MTTP和ApoB100 mRNA表达水平降低(P<0.01或P<0.05);Western blotting结果显示,NF-κB P 65和C-Rel蛋白表达水平升高。饲料中加入甘草总黄酮后,与高脂饲料模型组相比,罗非鱼肝中GSH活性、SOD活性、T-AOC水平不同程度提高,TC、TG、MDA含量和NF-κB P65、C-Rel蛋白表达水平不同程度降低,MTTP和ApoB100的mRNA表达水平升高,以0.50 g·kg^(-1)甘草总黄酮组效果较好。说明甘草总黄酮对于罗非鱼脂肪肝损伤具有一定的保护作用,可以缓解高脂饲料造成的脂肪肝损伤。

关键词：甘草总黄酮罗非鱼脂肪肝基因表达 Western blotting