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双重PCR法同步检测菜豆晕疫病菌和萎蔫病菌

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浙江农业学报 2015年第9期27卷 1612-1618页

作者：杨万风刘艳刘翔邵沛泽谌运清赵文军连云港出入境检验检疫局江苏连云港222042 连云港市农业科学院水稻研究室江苏连云港222001 中国检验检疫科学研究院植物检疫研究所北京100029

为建立同步检测菜豆晕疫病菌和细菌性萎蔫病菌的双重PCR方法,根据Gen Bank上公布的菜豆晕疫病菌arg k基因特异性序列设计1对特异性引物PSPF1/PSPR2,将设计的引物与已发表的检测菜豆细菌性萎蔫病菌特异性引物Cff F1/CffR2结合,经过条件优... 详细信息

为建立同步检测菜豆晕疫病菌和细菌性萎蔫病菌的双重PCR方法,根据Gen Bank上公布的菜豆晕疫病菌arg k基因特异性序列设计1对特异性引物PSPF1/PSPR2,将设计的引物与已发表的检测菜豆细菌性萎蔫病菌特异性引物Cff F1/CffR2结合,经过条件优化,建立了双重PCR反应体系,并进行特异性和灵敏度验证。结果显示,采用双重PCR体系,能从菜豆晕疫病菌和细菌性萎蔫病菌基因组DNA以及人工模拟带菌大豆种子样品中扩增到特异性条带,表明本研究所建立的双重PCR检测方法能同时检测出菜豆晕疫病菌和细菌性萎蔫病菌,可用于口岸进口大豆中2种检疫性细菌的检测。

关键词：菜豆晕疫病菌菜豆细菌性萎蔫病菌双重PCR 检测方法

鲤春病毒血症病毒糖蛋白基因的克隆及其在毕赤酵母中的初步表达

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海洋水产研究 2007年第4期28卷 72-76页

作者：付峰刘荭范万红江育林黄倢农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所深圳出入境检验检疫局动植食中心水生动物病重点实验室 518001

根据SVCV糖蛋白基因序列设计引物,在5’引物和3’引物中分别引入酶切位点。以病毒核酸为模板用RT-PCR方法扩增该段糖蛋白基因,将所得的基因片段(517和521)克隆至穿梭载体pGAPZαA/B之GAP启动子下游位点,构建含α信号肽的重组表达载体。... 详细信息

根据SVCV糖蛋白基因序列设计引物,在5’引物和3’引物中分别引入酶切位点。以病毒核酸为模板用RT-PCR方法扩增该段糖蛋白基因,将所得的基因片段(517和521)克隆至穿梭载体pGAPZαA/B之GAP启动子下游位点,构建含α信号肽的重组表达载体。获得的重组质粒pGAPZαA-517和pGAPZαB-521经线性化后,电击法转化毕赤酵母SMD1168菌株,构建分泌型表达SVCV糖蛋白的重组酵母菌株。酵母菌落PCR法检测表明,已成功构建分泌表达SVCV糖蛋白的酵母基因工程菌株,斑点印迹法进一步分析表明有目的蛋白的成功表达。

关键词：鲤春病毒血症病毒糖蛋白克隆毕赤酵母分泌表达

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巢式PCR检测菜豆细菌性萎蔫病菌

浙江农业学报 2015年第7期27卷 1202-1207页

为了实现对进口大豆样品中菜豆细菌性萎蔫病菌的快速检测,试验根据菜豆细菌性萎蔫病菌的REP-PCR扩增测序结果,设计了1条特异性引物Cff F11,与引物Cff FOR组合,建立了巢式PCR检测方法,并进行特异性和灵敏度验证。结果表明,利用此检测方... 详细信息

为了实现对进口大豆样品中菜豆细菌性萎蔫病菌的快速检测,试验根据菜豆细菌性萎蔫病菌的REP-PCR扩增测序结果,设计了1条特异性引物Cff F11,与引物Cff FOR组合,建立了巢式PCR检测方法,并进行特异性和灵敏度验证。结果表明,利用此检测方法对多种参试菌株进行检测时,只有菜豆细菌性萎蔫病菌呈阳性反应,而其他病菌不产生扩增反应;巢式PCR方法检测菜豆细菌性萎蔫病菌菌悬液时,其灵敏度达到3.1×103cfu·m L-1,比常规PCR灵敏度高1 000倍。制备带菌率为0.5%的大豆样品,用巢式PCR方法 1h内就可进行检测,检测时间大大缩短;在对实验室留存的100份进口大豆样品检测时,1份样品扩增到了特异性条带,测序分析结果证明此份大豆样品中携带的病菌为菜豆细菌性萎蔫病菌。本试验所建立的巢式PCR检测方法具有特异性强、灵敏度高、检测时间短并且检测准确率高等特点,可用于口岸菜豆细菌性萎蔫病菌的检测。

关键词：菜豆细菌性萎蔫病菌巢式PCR 检测方法

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革兰氏阴性菌耐药基因检测芯片的研制及应用

国际检验医学杂志 2010年第11期31卷 1207-1209,1211页

作者：孙菲万向阳季芳湖南出入境检验检疫局长沙410004 中南大学湘雅三医院长沙410078

目的探讨应用基因芯片对革兰氏阴性菌耐药基因进行快速检测的方法,并进行鉴定。方法根据GenBank上已发表的革兰氏阴性菌耐药基因盒不同亚型的基因序列,参考各亚型cDNAs区域的保守序列设计了针对16种耐药基因的特异探针,制备了革兰氏阴... 详细信息

目的探讨应用基因芯片对革兰氏阴性菌耐药基因进行快速检测的方法,并进行鉴定。方法根据GenBank上已发表的革兰氏阴性菌耐药基因盒不同亚型的基因序列,参考各亚型cDNAs区域的保守序列设计了针对16种耐药基因的特异探针,制备了革兰氏阴性菌耐药基因分型鉴定基因芯片。从16株临床分离的菌株中提取细菌基因组DNA,随机引物标记后与芯片进行杂交,同时与DNA测序法比较。结果用于评价革兰氏阴性菌耐药基因芯片的阳性菌株均出现良好的特异性杂交信号。结论该基因芯片可实现对革兰氏阴性菌耐药基因的快速检测。

关键词：革兰氏阴性菌耐药基因基因芯片检测

检测产超广谱β-内酰胺酶耐药基因寡核苷酸芯片的研制及应用

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检验医学与临床 2010年第22期7卷 2433-2435,2438页

作者：万向阳孙菲季芳湖南省出入境检验检疫局长沙410014 中南大学湘雅三医院湖南长沙410078

目的探讨用寡核苷酸芯片检测革兰阴性杆菌耐产超广谱β-内酰胺酶抗生素耐药基因的可行性。方法制备了检测产超广谱β-内酰胺酶革兰阴性杆菌寡核苷酸芯片。应用该寡核苷酸芯片检测16例临床革兰阴性杆菌耐药株,并与测序结果比较。结果提取... 详细信息

目的探讨用寡核苷酸芯片检测革兰阴性杆菌耐产超广谱β-内酰胺酶抗生素耐药基因的可行性。方法制备了检测产超广谱β-内酰胺酶革兰阴性杆菌寡核苷酸芯片。应用该寡核苷酸芯片检测16例临床革兰阴性杆菌耐药株,并与测序结果比较。结果提取的DNA产物随机引物标记后杂交,杂交结果差异无统计学意义。其结果与测序结果相符。结论寡核苷酸芯片可以推广应用到临床作为耐产超广谱β-内酰胺酶抗生素快速诊断的一种有效方法。

关键词：寡核苷酸芯片革兰阴性杆菌耐药基因产超广谱β-内酰胺酶

中电导钙激活性钾通道在人多发性骨髓瘤细胞增殖中的作用

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哈尔滨医科大学学报 2013年第1期47卷 6-9页

作者：王连杰王树叶何婉婷王巍哈尔滨医科大学附属第一医院血液内科黑龙江哈尔滨150001

目的探讨中电导钙激活性钾通道(intermediate-conductance Ca2+-activated k+channels,ikCa1)在人多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞增殖中的作用。方法通过台盼蓝拒染法检测ikCa1阻滞剂CLO对MM细胞株RPMI 8226和U266生存活力的影响,应用流式细胞仪检测CLO作用于RPMI 8226和U266细胞后细胞周期分布及细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)变化。结果 CLO以浓度依赖方式显著抑制RPMI 8226和U266细胞生长,10μmol/L CLO作用48 h后,RPMI 8226细胞和U266细胞周期明显被阻滞于G0/G1期,S期显著减少。10μmol/L CLO作用1min后,RPMI 8226和U266细胞内Fluo-3/AM荧光强分别为(448.3±32.8)和(675.9±45.8),分别与对照组(56.5±7.2)和(31.8±4.5)相比具有显著差异(P<0.05)。结论钙激活性钾通道阻断剂克霉唑抑制MM细胞增殖,其机制可能与CLO通过调节细胞内钙水平引起细胞周期阻滞于G0/G1期有关。

关键词：钙激活性钾通道多发性骨髓瘤克霉唑增殖钙离子

固相萃取-气相色谱-质谱法测定皮革制品中短链氯化石蜡

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色谱 2014年第10期32卷 1152-1156页

作者：张伟亚万昕李丽霞王成云金淑培邢钧深圳出入境检验检疫局工业品检测技术中心广东深圳518067 生物医学分析化学教育部重点实验室武汉大学化学与分子科学学院湖北武汉430072

短链氯化石蜡（ SCCPs）是我国皮革加脂过程中常用的添加剂，但近年已被欧盟等列为禁止使用的持久性有机污染物。由于 SCCPs结构复杂，且皮革基质干扰严重，目前尚没有完善的皮革制品中 SCCPs 的标准检测方法。本文采用硅胶为固相萃取... 详细信息

短链氯化石蜡（ SCCPs）是我国皮革加脂过程中常用的添加剂，但近年已被欧盟等列为禁止使用的持久性有机污染物。由于 SCCPs结构复杂，且皮革基质干扰严重，目前尚没有完善的皮革制品中 SCCPs 的标准检测方法。本文采用硅胶为固相萃取柱萃取，以正己烷-二氯甲烷（2∶1，v/v）为洗脱剂，使 SCCPs与皮革基质中的干扰组分完全分离，建立了用于测定皮革制品中 SCCPs 的固相萃取-气相色谱-质谱方法。该方法的回收率为90.47％-99.00％，检出限为0.069-0.110 mg/kg，相对标准偏差（ RSD）为4.20％-6.69％。该方法适用于皮革中 SCCPs 的定性、定量分析。

关键词：固相萃取气相色谱-质谱法(GC-MS) 短链氯化石蜡( SCCPs) 皮革制品

基于J2EE的危险化学品分类鉴定评估系统的构建与应用

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包装学报 2016年第1期8卷 90-93页

作者：万旺军陈文王琛浙江出入境检验检疫局包装检测实验室浙江杭州311208

在对危险化学品GHS分类鉴定方法及判定步骤研究的基础上,结合当前危险化学品检验检疫工作实践,利用GHS分类数据库和自建数据库,采用J2EE技术架构,构建了B/S结构的进出口危险化学品分类鉴定评估系统。系统总体技术逻辑架构由接入层、应... 详细信息

在对危险化学品GHS分类鉴定方法及判定步骤研究的基础上,结合当前危险化学品检验检疫工作实践,利用GHS分类数据库和自建数据库,采用J2EE技术架构,构建了B/S结构的进出口危险化学品分类鉴定评估系统。系统总体技术逻辑架构由接入层、应用层、支撑层和资源层构成,系统主要包括基础数据管理模块、分类查询及鉴定模块、判定结果输出模块、自建试验数据库管理模块。应用实践表明,该系统可实现对危险化学品分类鉴定的自动化和智能化,同时可减少检验鉴定的工作量,降低重复试验和评价的不必要损耗,并可提升执法把关的有效性。

关键词：危险化学品分类鉴定 GHS

革兰阴性菌中整合子携带氨基糖苷类耐药基因的分布

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临床检验杂志 2009年第4期27卷 248-251页

作者：陈辉李翔伍勇万向阳漆涌徐令清中南大学湘雅三医院检验科长沙410013 湖南国际旅行卫生保健中心长沙410001

目的研究湖南地区革兰阴性菌中整合子的流行现状及其携带的耐药基因的特点。方法收集183株革兰阴性菌,MIC法检测其药敏活性,利用不同的引物PCR筛查整合子的种类及整合子可变区,RFLP分析可变区,并测序确定其所携带的耐药基因盒内容。结... 详细信息

目的研究湖南地区革兰阴性菌中整合子的流行现状及其携带的耐药基因的特点。方法收集183株革兰阴性菌,MIC法检测其药敏活性,利用不同的引物PCR筛查整合子的种类及整合子可变区,RFLP分析可变区,并测序确定其所携带的耐药基因盒内容。结果细菌均为多重耐药菌;整合子检出率为54.6%,均为Ⅰ类整合子;携带5种整合子可变区,分别是0.75 kb,1.0 kb,1.8 kb,2.0 kb,3.0 kb;可变区内容为intI1-dfr15-aadA2-qacE△1-ampR,dhfrⅫ-orfF-aadA2,aacA4-catB8-aadA1,dhrfⅫ-aadA2,intI1-dfrA12-aadA2-qacE△1-sul1-ISCR1-blaCTX-M-14-IS903。结论Ⅰ类整合子广泛分布于我院分离的革兰阴性菌中,广泛携带氨基糖苷类和磺胺类耐药基因。氨基糖苷类耐药基因盒的高频出现与抗生素选择性压力无关。

关键词：整合子氨基糖苷类耐药