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大豆异黄酮协同索拉非尼对宫颈癌Hela细胞增殖、迁移的影响及机制

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新乡医学院学报 2022年第10期39卷 912-918页

作者：姬国杰丰慧根新乡医学院河南新乡453003 新乡医学院三全学院生物与基础医学实验教学中心河南新乡453000

目的探讨大豆异黄酮协同索拉非尼对宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移的影响及机制。方法取对数生长期Hela细胞随机分为对照组、大豆异黄酮组、1 mmol·L^(-1)索拉非尼组、2 mmol·L^(-1)索拉非尼组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼组、6 mmol·L^(-1... 详细信息

目的探讨大豆异黄酮协同索拉非尼对宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移的影响及机制。方法取对数生长期Hela细胞随机分为对照组、大豆异黄酮组、1 mmol·L^(-1)索拉非尼组、2 mmol·L^(-1)索拉非尼组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼组、6 mmol·L^(-1)索拉非尼组、1 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组、2 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组、6 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组,应用噻唑蓝法检测各组细胞增殖情况,划痕实验检测对照组、大豆异黄酮组、2 mmol·L^(-1)索拉非尼组、2 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组细胞迁移情况,实时荧光定量-聚合酶链反应法检测对照组、大豆异黄酮组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组细胞中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)mRNA相对表达量,Western blot法检测对照组、大豆异黄酮组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼组和4 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组细胞中VEGF-C蛋白相对表达量。结果1 mmol·L^(-1)索拉非尼组、2 mmol·L^(-1)索拉非尼组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼组、6 mmol·L^(-1)索拉非尼组、1 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组、2 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组、6 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组细胞增殖抑制率均高于对照组和大豆异黄酮组(P0.05);不同浓度索拉非尼组和不同浓度索拉非尼+大豆异黄酮组细胞增殖抑制率随索拉非尼浓度的增加呈增高趋势(P0.05);4 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组细胞中VEGF-C mRNA和蛋白相对表达量低于4 mmol·L^(-1)索拉非尼组(P<0.05)。结论大豆异黄酮协同索拉非尼可通过降低VEGF-C基因和蛋白质表达抑制宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移能力,且随索拉菲尼浓度升高抑制效果增强。

关键词： Hela细胞血管内皮生长因子-C 索拉非尼大豆异黄酮宫颈癌

高温联合辐射对胚胎神经发育及脑热应激蛋白的影响

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临床心身疾病杂志 2005年第4期11卷 289-291页

作者：赵玫丰慧根新乡市第二人民医院河南新乡在读博士453002 新乡医学院细胞生物教研室

目的探讨高温联合辐射致胚胎神经发育与早期胚胎脑蛋白质和HSPs表达的关系。方法将130只孕鼠按随机抽签分为13组,每组10只。在鼠妊娠第8d,第9d分别接受60Co及γ-射线全身照射各1次,照射剂量1.0Gy;第10d各置温箱中,分别使其肛温保持在37... 详细信息

目的探讨高温联合辐射致胚胎神经发育与早期胚胎脑蛋白质和HSPs表达的关系。方法将130只孕鼠按随机抽签分为13组,每组10只。在鼠妊娠第8d,第9d分别接受60Co及γ-射线全身照射各1次,照射剂量1.0Gy;第10d各置温箱中,分别使其肛温保持在37±0.5℃,41±0.5℃,42±0.5℃,并持续3,4,5min。移出温箱2h后,每组每时段随机取5只脱颈法处死,采用Westerndotblot和lowry方法定量分析胚胎脑HSP70和蛋白质含量与胚胎神经系统畸形。结果高温联合辐射对胚胎神经毒性明显增加,并与高温强度及作用时间呈正相关;高温联合辐射作用于胚胎早期对胚胎脑蛋白质降低有复合作用(P<0.01),并可诱导脑HSP70合成。结论高温与辐射联合致神经发育与胚胎脑蛋白质合成及热应激蛋白的诱导有一定的相关性。

关键词：高温辐射孕鼠胚胎神经发育脑热应激蛋白质

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高温联合辐射对仔鼠神经系统与行为的影响

临床心身疾病杂志 2006年第1期12卷 1-3页

作者：赵玫丰慧根新乡市第二人民医院河南新乡453002 新乡医学院细胞生物教研室

目的探讨高温联合辐射对仔鼠神经系统与行为的影响。方法将130只孕鼠按随机抽签法分为13组,每组10只。在孕鼠妊娠第8、9d分别接受60Co及γ-射线全身照射各1次,照射剂量1．0Gy;第10d各置温箱中,分别使其肛温保持在37、±0．5℃,41±0．5... 详细信息

目的探讨高温联合辐射对仔鼠神经系统与行为的影响。方法将130只孕鼠按随机抽签法分为13组,每组10只。在孕鼠妊娠第8、9d分别接受60Co及γ-射线全身照射各1次,照射剂量1．0Gy;第10d各置温箱中,分别使其肛温保持在37、±0．5℃,41±0．5℃,42±0．5℃,并持续3、4、5min。移出温箱2h后,每组随机取5只,单笼饲养,待其自然分娩,观察仔鼠体格发育、生理发育、神经反射、活动能力等神经行为指标。结果孕鼠经高温联合辐射后,其仔鼠的生理发育、早期反射、感觉功能、活动能力均显著滞后于对照组(P<0．01)。结论高温联合辐射具有复合作用,可增强对仔鼠神经系统的不良影响。

关键词：高温辐射仔鼠神经系统行为

调节性T细胞对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2019年第10期39卷 752-757页

作者：高海瑶李萌丰慧根林俊堂李永海新乡医学院生命科学技术学院河南省干细胞与生物治疗工程技术研究中心453003 新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室453003

目的通过剔除和移植调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)正反两个方面来研究Treg细胞在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)疾病发展中的作用,探讨Treg细胞在EAE病程发展中扮演的角色.方法首先... 详细信息

目的通过剔除和移植调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)正反两个方面来研究Treg细胞在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)疾病发展中的作用,探讨Treg细胞在EAE病程发展中扮演的角色.方法首先通过注射抗小鼠CD25的单克隆抗体来剔除小鼠体内天然产生的Treg细胞,再利用人工合成的MOG35-55短肽对小鼠进行EAE诱导,观察和比较Treg细胞剔除和未剔除的小鼠在EAE病程中EAE评分上的差异.利用流式细胞术分析小鼠体内CD4^+Foxp3^+的Treg细胞数量和比例在EAE病程中的动态变化.用磁性激活细胞分选术(MACS)和荧光激活细胞分选术(FACS)相结合的方法,从Foxp3GFP+转基因小鼠中分离出GFP标记的Treg细胞,然后将分离出的GFP标记Treg细胞通过尾静脉注射到免疫后6 d的EAE小鼠体内,观察Treg细胞移植对EAE小鼠的治疗效果.结果在给小鼠注射抗CD25的单克隆抗体后,流式细胞术检测表明小鼠血液中天然产生的Treg细胞剔除率大于95%.经EAE诱导后,与对照组(注射PBS)小鼠相比,Treg细胞剔除小鼠的疾病程度更为严重,差异显著.通过流式细胞术分析Treg细胞在整个EAE病程中的动态变化,发现在EAE诱导后的第6天,小鼠血液中CD4^+Foxp3^+的Treg细胞比例最低(约11%),因而我们把EAE诱导后6 d作为Treg细胞移植的时间点.从经EAE诱导后6 d的Foxp3GFP+转基因小鼠的脾脏和淋巴结中分离出CD4^+GFP+的Treg细胞,将之通过尾静脉注射给同样经EAE诱导后6 d的野生型小鼠.与对照组相比,接受了Treg细胞移植的小鼠EAE评分明显降低,且差异具有统计学意义.结论Treg细胞剔除小鼠的EAE评分明显比未剔除的对照组小鼠高;而Treg细胞移植可使小鼠的EAE评分明显降低,说明移植的Treg细胞在EAE病程中对小鼠起到一定的保护作用,Treg细胞移植可能作为一种有效的治疗多发性硬化症(multiple sclerosis,MS)的细胞疗法.

关键词：多发性硬化症实验性自身免疫性脑脊髓炎调节性T细胞

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多重连接探针扩增技术检测胎儿非整倍体异常

郑州大学学报（医学版） 2012年第5期47卷 632-635页

作者：王凤羽马林先李聪敏张华丰慧根河南省人口和计划生育科学技术研究院河南省人口缺陷干预技术研究重点实验室郑州450002 新乡医学院生命科学技术系新乡453000

目的:探讨多重连接探针扩增技术(MLPA)在常见染色体非整倍体异常及其在产前诊断中的应用价值。方法:选择200份羊水标本,提取标本DNA,采用MLPA技术对样本染色体进行分析,并与传统染色体核型分析结果进行比较。结果:在200例样本中,除1例... 详细信息

目的:探讨多重连接探针扩增技术(MLPA)在常见染色体非整倍体异常及其在产前诊断中的应用价值。方法:选择200份羊水标本,提取标本DNA,采用MLPA技术对样本染色体进行分析,并与传统染色体核型分析结果进行比较。结果:在200例样本中,除1例因羊水污染应用传统染色体核型分析失败外,其余检测结果与传统染色体核型分析方法的结果一致(21三体4例,18三体3例,13三体1例,X单体1例,X三体1例,其余190例正常)。结论:MLPA技术分析胎儿染色体非整倍体异常是一种简单、快速且有效的方法。

关键词：多重连接探针扩增技术非整倍体核型分析产前诊断

细胞毒性T细胞抗原4胞外结构域的高效表达与纯化

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河南师范大学学报（自然科学版） 2017年第5期45卷 115-120页

作者：郭鑫鑫刘青丰慧根原志庆林俊堂樊晋宇河南省干细胞与生物治疗工程研究中心河南新乡453003 新乡医学院生命科学技术学院河南新乡453003

目的:获得细胞毒性T淋巴细胞相关分子4胞外结构域(exCTLA4)在大肠杆菌中高效表达的条件,并纯化获得高纯度的重组蛋白.方法:构建原核表达质粒pET28a-exCTLA4并转入大肠杆菌Transetta(DE3)中,通过改变诱导物IPTG浓度、细菌培养温度和时间... 详细信息

目的:获得细胞毒性T淋巴细胞相关分子4胞外结构域(exCTLA4)在大肠杆菌中高效表达的条件,并纯化获得高纯度的重组蛋白.方法:构建原核表达质粒pET28a-exCTLA4并转入大肠杆菌Transetta(DE3)中,通过改变诱导物IPTG浓度、细菌培养温度和时间,获得了exCTLA4的最佳表达条件.收集最佳诱导条件下表达exCTLA4的菌体,将菌体超声破碎后,离心分离exCTLA4包涵体,用低浓度尿素(2mol·L^(-1))洗去大部分背景蛋白后,再用高浓度尿素(8mol·L^(-1))溶解包涵体,进一步用镍离子亲和层析方法得到高纯度exCTLA4.结果:构建了表达载体pET28a-exCTLA4,获得了exCTLA4在Transetta(DE3)中的最佳诱导条件,即在1mmol·L^(-1) IPTG、25℃下,诱导6h能得到最佳表达,但重组蛋白以包涵体形式存在.通过纯化exCTLA4包涵体及进一步的镍离子亲和层析获得了高纯度的目的蛋白,Western blot鉴定为CTLA4.结论:获得了exCTLA4重组蛋白在大肠杆菌中的最佳表达条件和纯化方法及步骤,为该蛋白的应用奠定了基础.

关键词： CTLA4 原核表达蛋白纯化

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圆红冬孢酵母脂肪酸合酶的生物信息学分析

中州大学学报 2020年第1期37卷 117-120页

作者：康静刘玉青胡焕焕丰慧根新乡医学院生命科学技术学院河南新乡453003

对圆红冬孢酵母脂肪酸合酶进行生物信息学分析并构建系统进化树。利用MEGA7.0软件构建出系统进化树,应用ProtParam,ProtScal,TMHMM,SigalP,Kinasephos,PredictNLS,NPSA和SMART等生物信息学方法,分别对蛋白质的理化性质、跨膜区、信号肽... 详细信息

对圆红冬孢酵母脂肪酸合酶进行生物信息学分析并构建系统进化树。利用MEGA7.0软件构建出系统进化树,应用ProtParam,ProtScal,TMHMM,SigalP,Kinasephos,PredictNLS,NPSA和SMART等生物信息学方法,分别对蛋白质的理化性质、跨膜区、信号肽,以及核输出信号、二级结构和结构域进行预测。结果表明,该脂肪酸合酶在进化过程中相对比较保守,是亲水性蛋白;它存在跨膜结构;它没有信号肽但有核输出信号;它的二级结构有多个α-螺旋与延伸链;它有6个保守结构域。

关键词：圆红冬孢酵母脂肪酸合酶油脂合成代谢生物信息学分析

河南省杜氏肌营养不良患者dystrophin基因突变的MLPA检测

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郑州大学学报（医学版） 2011年第6期46卷 842-846页

作者：王凤羽孙伟伟李聪敏常明秀丰慧根马林先河南省人口和计划生育科学技术研究院河南省人口出生缺陷干预技术研究重点实验室郑州450002 新乡医学院生命科学技术系新乡453000

目的:探讨多重连接依赖式探针扩增技术(MLPA)在杜氏肌营养不良(DMD)患者基因诊断中的应用价值,了解河南省DMD患者dystrophin基因突变热点。方法:采用MLPA检测48例河南省DMD患者及13例缺失型患者母亲dystrophin基因突变。结果:48例DMD患... 详细信息

目的:探讨多重连接依赖式探针扩增技术(MLPA)在杜氏肌营养不良(DMD)患者基因诊断中的应用价值,了解河南省DMD患者dystrophin基因突变热点。方法:采用MLPA检测48例河南省DMD患者及13例缺失型患者母亲dystrophin基因突变。结果:48例DMD患者中,有31例(64.6%)检测出dystrophin基因外显子缺失,4例(8.3%)检测出外显子重复。河南省DMD患者dystrophin基因缺失/重复热点区域为第46～53外显子和第8～18外显子。13例患者母亲有11人检测出杂合突变,突变类型与患者相同,余2人未检测出突变。河南省DMD患者基因外显子缺失、重复分布与北京相似(χ2=0.256,P=0.880),但与香港和台湾地区有着较大差异(χ2分别为11.470和11.303,P分别为0.003和0.004)。结论:MLPA在DMD患者及携带者基因诊断中有很高的应用价值。河南省DMD患者dystrophin基因的突变热点与国内其他地区有差异。

关键词：河南省杜氏肌营养不良多重连接依赖式探针扩增技术 dystrophin基因突变热点

大鼠部分肝切后血清对体外培养肝细胞的刺激作用

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中国组织化学与细胞化学杂志 2008年第1期17卷 79-83页

作者：朱武凌张会勇程海霞井长勤林俊堂丰慧根新乡医学院生命科学技术系新乡453003

目的探讨大鼠部分肝切后血清对体外培养肝细胞生长状况的影响。方法对Sprague-Dawley大鼠进行肝部分切除,分别在术后第12、24、36h于心腔内穿刺取血,制备刺激血清。采用酶消化法分离获取Sprague-Dawley乳鼠的肝细胞,在加有10%上述刺激... 详细信息

目的探讨大鼠部分肝切后血清对体外培养肝细胞生长状况的影响。方法对Sprague-Dawley大鼠进行肝部分切除,分别在术后第12、24、36h于心腔内穿刺取血,制备刺激血清。采用酶消化法分离获取Sprague-Dawley乳鼠的肝细胞,在加有10%上述刺激血清的DMEM培养基中进行肝细胞体外培养。倒置显微镜下观察培养细胞的生长状态,采用免疫细胞化学方法检测肝细胞中白蛋白和纤维蛋白原的表达情况。结果发现在肝切后血清刺激作用下,原代培养的肝细胞生长加快,存活时间增长。细胞传代培养后仍用制备血清加以刺激,可产生胶原样细胞外基质,并且在基质上粘附的肝细胞呈现克隆样生长状态,其胞浆内白蛋白和纤维蛋白原均呈阳性表达。结论研究初步表明,体外培养乳鼠肝细胞时加入大鼠部分肝切后血清,可以有效刺激细胞的生长,促进细胞外基质的产生,从而利于肝细胞在体外较长时间存活、增殖和功能保持,同时此种肝细胞体外培养方式还为肝脏细胞生物学研究增添了新的实验途径。

关键词：肝脏细胞培养血清白蛋白纤维蛋白原