检索结果-南通市图书馆

SMART技术构建恒河猴睾丸组织全长cDNA文库

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中国男科学杂志 2009年第9期23卷 13-16页

作者：陈厚仰汤育新文甲明尹光明刘志中肖小旺中南大学湘雅三医院中美男性病研究中心中南大学湘雅三医院泌尿外科长沙410013

目的运用SMART技术构建恒河猴睾丸组织全长cDNA文库。方法提取恒河猴睾丸组织总RNA并分离出mRNA,用clontech公司SMART^(TM)cDNA文库构建试剂盒反转录合成第一链cDNA,LD-PCR扩增获得全长cDNA双链;经SfiI酶切、层析柱分离后,500bp以上的... 详细信息

目的运用SMART技术构建恒河猴睾丸组织全长cDNA文库。方法提取恒河猴睾丸组织总RNA并分离出mRNA,用clontech公司SMART^(TM)cDNA文库构建试剂盒反转录合成第一链cDNA,LD-PCR扩增获得全长cDNA双链;经SfiI酶切、层析柱分离后,500bp以上的片段与pDNR-LIB连接后电转化及铺板,建成原始文库。结果经鉴定,原始文库为2.5×10~6个重组子,扩增后文库滴度为4.5×10~9CFU/mL。重组率为100%,平均插入片段为1.6kb。结论已构建文库质量较高,为进一步筛选、克隆睾丸特异表达基因奠定了基础。

关键词：恒河猴睾丸基因文库 SMART技术

人睾丸特异表达基因TDRG1 shRNA表达载体的构建及其表达

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中南大学学报（医学版） 2012年第10期37卷 979-982页

作者：彭圣林阳建福陈厚仰郭小亮李东杰周华波甘宇蒋先镇汤育新中南大学湘雅三医院泌尿外科长沙410013

目的:构建人睾丸基因TDRG1的shRNA表达质粒,并研究其在NTERA-2细胞中的表达。方法:设计合成有短发夹结构靶位TDRG1基因的寡核苷酸,经退火成双链,克隆至载体pGPU6/GFP/Neo中,构建TDRG1shRNA表达载体,得到重组质粒TDRG1-shRNA486,TDRG1-sh... 详细信息

目的:构建人睾丸基因TDRG1的shRNA表达质粒,并研究其在NTERA-2细胞中的表达。方法:设计合成有短发夹结构靶位TDRG1基因的寡核苷酸,经退火成双链,克隆至载体pGPU6/GFP/Neo中,构建TDRG1shRNA表达载体,得到重组质粒TDRG1-shRNA486,TDRG1-shRNA738,TDRG1-shRNA921和一个阴性对照,使用Lipofectamine 2000转染shRNA至NTERA-2细胞,应用RT-PCR法检测转染后NTERA-2细胞TDRG1 mRNA的表达水平。结果:经测序证实,插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致。同时筛选到转染TDRG1-shRNA486的NTERA-2细胞TDRG1基因的mRNA表达水平明显抑制。结论:成功构建了人类睾丸基因TDRG1的shRNA表达载体,TDRG1-shRNA在NTERA-2细胞内成功表达。

关键词：睾丸基因 TDRG1 RNAi shRNA NTERA-2细胞

人类睾丸基因TDRG1在不同物种间同源序列的克隆及分析

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中国男科学杂志 2009年第9期23卷 5-9页

作者：蒋先镇文甲明汤育新陈厚仰阳建福尹光明汤进刘志中中南大学湘雅三医院中美男性病研究中心中南大学湘雅三医院泌尿外科长沙410013

目的克隆人类睾丸特异基因TDRG1在不同物种间的同源序列,为研究该基因功能寻找动物模型。方法以人TDRG1基因全长序列作为查询序列,利用BLASTN软件检索小鼠、大鼠、黑猩猩和猕猴基因组数据库,查询到的同源序列运用RT-PCR实验验证。免疫... 详细信息

目的克隆人类睾丸特异基因TDRG1在不同物种间的同源序列,为研究该基因功能寻找动物模型。方法以人TDRG1基因全长序列作为查询序列,利用BLASTN软件检索小鼠、大鼠、黑猩猩和猕猴基因组数据库,查询到的同源序列运用RT-PCR实验验证。免疫组化染色初探TDRG1同源蛋白在不同物种间的表达。结果生物信息学分析表明小鼠和大鼠基因组中未检索到与TDRG1同源的序列,黑猩猩和猕猴基因组中分别有相似性为98%和90%的同源序列存在。RT-PCR验证了猕猴睾丸中的同源序列,免疫组化结果显示抗人TDRG1单克隆抗体能特异结合猕猴睾丸中的同源蛋白。RT-PCR和免疫组化染色也表明小鼠和大鼠睾丸中无同源序列和同源蛋白表达。结论 TDRG1基因在小鼠和大鼠睾丸中无同源基因表达,而在猕猴和黑猩猩睾丸中有同源基因表达,为今后建立动物模型提供了理论依据。

关键词：睾丸 TDRG1 序列同源性克隆分子

江西瑞昌市南阳地区物化探异常特征及找矿前景

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现代矿业 2017年第12期33卷 20-25页

作者：胡朗明廖为福刘启智袁婷陈后扬江西省地质矿产勘查开发局物化探大队

瑞昌南阳地区位于江西九江—瑞昌成矿带内,区内已发现武山铜矿、城门山铜矿,具有"多位一体"的成矿特征。结合南阳地区土壤地球化学测量、EH4电磁测深、激电中梯测量、高精度磁测成果,对该区主要成矿空间与区域成矿特征进行了对比,认为... 详细信息

瑞昌南阳地区位于江西九江—瑞昌成矿带内,区内已发现武山铜矿、城门山铜矿,具有"多位一体"的成矿特征。结合南阳地区土壤地球化学测量、EH4电磁测深、激电中梯测量、高精度磁测成果,对该区主要成矿空间与区域成矿特征进行了对比,认为区内深部具有较好的成矿条件。对区内物化探异常特征进行了详细分析,并布置了钻探工程进行物化探异常验证,在预期部位见到了硫化铜矿化体。结合该区物化探异常特征、地质特征与区域典型矿山地质特征、矿化特征的对比分析,指出了南阳地区找矿突破的主攻方向。

关键词：深部找矿物化探找矿地球物理特征地球化学特征钻探验证找矿前景

基于微小RNA-信使RNA互作在畸形精子症中的潜在发生机制研究

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当代医学 2023年第29期29卷 1-6页

作者：艾丹钟丽珍蒋庄亮陈厚仰汪利群江西省妇幼保健院生殖健康科江西南昌330000

目的探讨微小RNA(miRNA)-信使RNA(mRNA)互作在畸形精子症中的潜在作用及机制。方法选取2018年1—12月于江西省妇幼保健院就诊的30例畸精症患者作为观察组,另选取同期于江西省妇幼保健院工作的30名正常男性作为对照组。构建mRNA和miRNA... 详细信息

目的探讨微小RNA(miRNA)-信使RNA(mRNA)互作在畸形精子症中的潜在作用及机制。方法选取2018年1—12月于江西省妇幼保健院就诊的30例畸精症患者作为观察组,另选取同期于江西省妇幼保健院工作的30名正常男性作为对照组。构建mRNA和miRNA基因表达谱,并通过京都基因和基因组百科全书(KEGG)和基因本体论(GO)富集分析后进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)进一步验证。结果通过miRNA测序研究畸精症中miRNA的影响,共发现23个差异表达miRNA,同时满足log2FC|>0.585和P<0.05。23个差异表达miRNA的表达,有17个上调miRNA来自9个miRNA家族和6个下调的miRNA来自5个miRNA家族。使用KEGG和GO分析差异表达miRNA的2022个差异表达靶mRNA,共获得10条通路和9个注释簇。10条通路包括果糖和甘露糖代谢、磷酸戊糖通路、酵解/糖异生、碳代谢、氨基酸生物合成、核因子κB(NF-κB)信号通路、信号转导子和转录激活子(STATs)、丝裂原激活蛋白激酶(MAP)信号通路、Th1和Th2细胞分化、Toll样受体信号通路。注释簇1总结了3个GO术语;注释簇2总结了41个GO术语;注释簇3总结了3个GO术语;注释簇4总结了3个GO术语;注释簇5总结了3个GO术语;注释簇6总结了3个GO术语;注释集群7总结了38个GO术语;注释簇8总结了4个GO术语;注释簇9总结了10个GO术语。使用RT-PCR检测注释簇9中的3个miRNA和8个mRNA。miR-375-4-3p是上调的miRNA,而miR-31-12-5p和miR-9-6-5p是下调的miRNA。在4个GO术语中检测NF-κB、环氧合酶-2(COX-2)、前列腺素E合酶(PTGES)和基质金属蛋白酶9(MMP9)表达。在3个GO术语中检测白细胞介素(IL)-11、Spi-B转录因子(SPI1)、T细胞中表达的T-box转录因子(T-Bet)和IL-4/13A表达。RT-PCR的结果与miRNA和mRNA测序的结果一致,观察组miR-375-4-3p、NF-κB、COX-2、PTGES和IL-4/13A mRNA表达高于对照组,而miR-31-12-5p、miR-9-6-5p、MMP9、IL-11、SPI1和T-Bet mRNA表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论畸精症中有23个差异表达的miRNA和2022个目标mRNAs,可使用KEGG和GO富集分析获得5条通路和7个目标mRNA炎症免疫抑制损伤相关的GO术语,miRNAs可通过miRNA-mRNA网络分析介导炎症免疫抑制损伤相关机制参与畸精症进展,但具体机制需进一步研究。

关键词：微小RNA 信使RNA 畸形精子症炎症免疫

穿膜肽EGFP的构建及其对人成熟精子的穿膜活性鉴定

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中国男科学杂志 2014年第11期28卷 8-13页

作者：陈厚仰仇克清孙捷黄志辉应志伟吴丽萍曾韩伍琼芳江西省妇幼保健院辅助生殖中心南昌 330006 南昌大学第三附属医院

目的：构建穿膜肽TAT与EGFP融合蛋白的原核表达系统，研究该融合蛋白对人成熟精子的穿膜作用和对精子运动参数的影响。方法以pEGFP-N1载体为模板，设计N端和C端含有TAT序列的引物，用PCR技术扩增TAT-EGFP和EGFP-TAT基因，扩增产物插入载... 详细信息

目的：构建穿膜肽TAT与EGFP融合蛋白的原核表达系统，研究该融合蛋白对人成熟精子的穿膜作用和对精子运动参数的影响。方法以pEGFP-N1载体为模板，设计N端和C端含有TAT序列的引物，用PCR技术扩增TAT-EGFP和EGFP-TAT基因，扩增产物插入载体 pET28a，构建成重组质粒pET28a-TAT-EGFP和pET28a-EGFP-TAT。将重组质粒转入大肠杆菌DE3中，IPTG诱导TAT-EGFP和EGFP-TAT融合蛋白表达。表达产物经Ni-NTA亲和层析柱纯化后SDS-PAGE电泳鉴定。将融合蛋白TAT-EGFP和EGFP-TAT分别加入正常人精子中孵育，荧光显微镜观察融合蛋白TAT-EGFP和EGFP-TAT穿膜情况。结果成功构建了高表达重组质粒pET28a-TAT-EGFP和pET28a-EGFP-TAT，纯化了分子质量约为32 kD的融合蛋白 TAT-EGFP和EGFP-TAT。融合蛋白TAT-EGFP和EGFP-TAT在正常人成熟精子中有穿膜作用。不同浓度的融合蛋白TAT-EGFP和EGFP-TAT对正常人成熟精子存活率及运动参数无明显影响。结论通过对融合蛋白TAT-EGFP和EGFP-TAT表达纯化及活性分析，证实穿膜肽TAT在精子中的跨膜转运作用，为将来精子研究提供了实验基础。

关键词：细胞穿膜肽绿色荧光蛋白精子

人睾丸基因TDRG1重组真核载体的构建及其表达

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中国男科学杂志 2010年第8期24卷 6-9页

作者：汤育新蒋先镇文甲明陈厚仰阳建福肖小旺戴英波中南大学湘雅三医院中美男性病研究中心中南大学湘雅三医院泌尿外科长沙410013

目的构建人睾丸基因TDRGl的真核表达质粒,并研究其表达。方法取人新鲜正常睾丸组织,提取总RNA,采用逆转录-聚合酶联链反应(RT-PCR)扩增TDRG1基因编码序列;将该基因克隆到真核表达载体pYD5中,构建真核细胞表达载体pYD5-TDRG1,用限制性内... 详细信息

目的构建人睾丸基因TDRGl的真核表达质粒,并研究其表达。方法取人新鲜正常睾丸组织,提取总RNA,采用逆转录-聚合酶联链反应(RT-PCR)扩增TDRG1基因编码序列;将该基因克隆到真核表达载体pYD5中,构建真核细胞表达载体pYD5-TDRG1,用限制性内切酶酶切分析,DNA序列分析鉴定重组质粒;将测序正确的重组质粒pYD5-TDRG1在脂质体介导下转染293细胞,间接免疫荧光法和Western Blot法鉴定目的蛋白质的表达。结果 RT-PCR扩增出TDRG1基因编码序列,目的插入片段长约303bp;产物行限制性内切酶酶切后连接到真核表达载体pYD5,重组质粒pYD5-TDRG1经酶切及DNA测序鉴定构建成功;该质粒转染293细胞48h后在荧光显微镜下可观察到绿色荧光,阳性细胞率96.42%;行Western blot分析检测到约39.8kD的目的蛋白表达。结论成功构建了人类睾丸基因TDRG1的真核表达载体pYD5-TDRG1,TDRG1基因在293细胞内成功表达。

关键词： TDRG1基因克隆真核载体基因转染

Mapping a stable adult-plant stripe rust resistance QTL on chromosome 6AL in Chinese wheat landrace Yibinzhuermai

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The Crop Journal 2022年第4期10卷 1111-1119页

作者： Mei Deng Li Long Yukun cheng Fangjie Yao Fangnian Guan Yuqi Wang Hao Li Zhien Pu Wei Li Qiantao Jiang Yuming Wei Jian Ma houyang Kang Pengfei Qi Jirui Wang Youliang Zheng Yunfeng Jiang Guoyue chen State Key Laboratory of Crop Gene Exploitation and Utilization in Southwest China WenjiangChengdu 611130SichuanChina Triticeae Research Institute Sichuan Agricultural UniversityWenjiangChengdu 611130SichuanChina College of Agronomy Sichuan Agricultural UniversityWenjiangChengdu 611130SichuanChina

Stripe rust,caused by Puccinia striiformis ***(Pst),is one of the most important diseases threatening the yield and stability of wheat production in China and many other *** and utilization of new genes for durable stripe rust resistance are important for ongoing control of this *** objectives of this study were to identify quantitative trait loci(QTL)associated with adult-plant stripe rust resistance in the Chinese wheat landrace Yibinzhuermai(YBZR)and to provide wheat breeders with new sources of potentially durable resistance.A total of 117 recombinant inbred lines(RILs)(F5:8)derived from a cross between YBZR and highly susceptible cultivar Taichung 29(TC29)were assessed for stripe rust severity in field experiments at Wenjiang in 2016 and 2017 and Chongzhou in 2016,2017,2018,and 2019 in Sichuan following inoculation with a mixture of current Pst *** RILs were genotyped using the Wheat55K single nucleotide polymorphism(SNP)*** QTL were identified on chromosome arms 6AL,5BL and ***-6AL and ***-7DS conferred major effects in all field environments,explaining 10.6%to 14.7%and 11.5%to 21.2%of phenotypic variation,*** QTL on 5BL and 7DS likely correspond to previously known QTL,whereas ***-6AL is probably *** analysis revealed that the resistance allele at ***-6AL was present in 2.8%of 324 Chinese wheat *** markers closely linked with ***-6AL were converted to kompetitive allele-specific PCR markers and validated in the RIL population and a subset of 92 wheat ***-6AL and its markers should be useful in breeding programs to improve the level and durability of stripe rust resistance.

关键词： Puccinia striiformis QTL mapping Single nucleotide polymorphism Yellow rust

A major vernalization-independent QTL for tiller angle on chromosome arm 2BL in bread wheat

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The Crop Journal 2022年第1期10卷 185-193页

作者： Jiajun Liu Jieguang Zhou Huaping Tang Yang Tu Yang Mu Lulu Gou Qiantao Jiang Yaxi Liu Guoyue chen Jirui Wang Pengfei Qi Wei Li Yunfeng Jiang Zehong Yan houyang Kang Yuming Wei Xiujin Lan Youliang Zheng Jian Ma State Key Laboratory of Crop Gene Exploration and Utilization in Southwest China Triticeae Research InstituteSichuan Agricultural UniversityChengdu 611130SichuanChina College of Agronomy Sichuan Agricultural UniversityChengdu 611130SichuanChina

Tiller angle(TA)strongly influences plant architecture and grain yield in ***,the genetic basis of TA in wheat is largely *** identified three TA-related quantitative trait loci(QTL).One of them was ***-2 B-769,a major QTL localized on chromosome arm 2 ***-2 B-769 was detected in seven environments,explaining 18.1%–51.1%of phenotypic *** developed a linked Kompetitive Allele-Specific Polymerase chain reaction(KASP)marker,KASP-AX-108792274,to further validate this locus in three additional populations in multiple ***-2 B-769 increased TA by up to 24.9%in these *** were significant and positive correlations between TA and flag leaf angle(FLANG).However,TA was not correlated with plant height or anthesis date,suggesting that expression of ***-2 B-769 is independent of *** CS2 B01 G583800,a gene known to be involved in leaf angle regulation,was identified as the most likely candidate gene for ***-2 *** results enrich our understanding of the mechanisms regulating wheat TA at maturity and may support precise mapping and cloning of gene(s)underlying ***-2 B-769.

关键词： Tiller angle QTL detection and validation Candidate genes Expression patterns