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Calcium overload and reactive oxygen species accumulation induced by selenium deficiency promote autophagy in swine small intestine

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Animal Nutrition 2021年第4期7卷 997-1008页

作者： Yingying Zheng haoyue guan Jie Yang Jingzeng Cai Qi Liu Ziwei Zhang College of Veterinary Medicine Northeast Agricultural UniversityHarbinChina College of Animal Science and Veterinary Medicine Southwest Minzu UniversityChengduSichuanChina Key Laboratory of the Provincial Education Department of Heilongjiang for Common Animal Disease Prevention and TreatmentCollege of Veterinary MedicineNortheast Agricultural UniversityHarbinChina

Selenium(Se)deficiency can seriously affect the small intestine of swine,and cause diarrhea in swine.However,the specific mechanism of Se deficiency-induced swine diarrhea has rarely been reported.Here,to explore the damage of Se deficiency on the calcium homeostasis and autophagy mechanism of swine,in vivo and in vitro models of swine intestinal Se deficiency were established.Twenty-four pure line castrated male Yorkshire pigs(45 d old,12.50±1.32 kg,12 full-sibling pairs)were divided into 2 equal groups and fed Se-deficient diet(0.007 mg Se/kg)as the Se-deficiency group,or fed Se-adequate diet(0.3 mg Se/kg)as the control group for 16 weeks.The intestinal porcine enterocyte cell line(IPEC-J2)was divided into 2 groups,and cultured by Se-deficient medium as the Se-deficient group,or cultured by normal medium as the control group.Morphological observations showed that compared with the control group,intestinal cells in the Se-deficiency group were significantly damaged,and autophagosomes increased.Autophagy staining and cytoplasmic calcium staining results showed that in the Sedeficiency group,autophagy increased and calcium homeostasis was destroyed.According to the reactive oxygen species(ROS)staining results,the percentage of ROS in the Se-deficiency group was higher than that in the control group in the in vitro model.Compared with the control group,the protein and mRNA expressions of autophagy-calcium-related genes including Beclin 1,microtubule-associated proteins 1 A(LC3-1),microtubule-associated proteins 1 B(LC3-2),autophagy-related protein 5(ATG5),autophagy-related protein 12(ATG12),autophagy-related protein 16(ATG16),mammalian target of rapamycin(mTOR),calmodulin-dependent protein kinase kinaseβ(CAMKK-β),adenosine 5’-monophosphate-activated protein kinase(AMPK),sarco(endo)plasmic reticulum Ca2+-ATPase(SERCA),and calpain in the Se-deficiency group were significantly increased which was consistent in vivo and in vitro(P<0.05).Altogether,our results indicated that Se deficiency could destroy the calcium homeo

关键词： Se deficiency swine Small intestine Intestinal porcine enterocyte cell line Autophagy Ca overload

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枸橼酸坦度螺酮中遗传毒性杂质的探索性研究

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中国药学杂志 2023年第20期58卷 1869-1875页

作者：孙百浩关皓月牛剑钊中国食品药品检定研究院北京100050

探索枸橼酸坦度螺酮中可能存在的遗传毒性杂质,保障用药安全。方法基于枸橼酸坦度螺酮合成工艺,结合遗传毒性杂质警示结构、计算机毒理学预测及Ames试验判断其杂质遗传毒性分类。结果1,4⁃二溴丁烷具有致突变性,为枸橼酸坦度螺酮中存在的... 详细信息

探索枸橼酸坦度螺酮中可能存在的遗传毒性杂质,保障用药安全。方法基于枸橼酸坦度螺酮合成工艺,结合遗传毒性杂质警示结构、计算机毒理学预测及Ames试验判断其杂质遗传毒性分类。结果1,4⁃二溴丁烷具有致突变性,为枸橼酸坦度螺酮中存在的2类遗传毒性杂质。结论1,4⁃二溴丁烷为枸橼酸坦度螺酮的2类遗传毒性杂质,应在药物中严格控制其残留量,以保障用药安全。

关键词：枸橼酸坦度螺酮计算机毒理学预测细菌回复突变试验遗传毒性杂质

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NNK遗传毒性杂质及其异构体检测方法的探索性研究

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中国医药工业杂志 2023年第12期54卷 1753-1760页

作者：关皓月刘年许凯牛剑钊杨锐中国食品药品检定研究院北京100050

亚硝胺类化合物由于其结构上存在N-N=O键,容易发生异构化现象。本研究在采用HPLC法对4-(甲基亚硝胺基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)进行分析时,观察到双色谱峰现象。并采用PFP色谱柱对NNK及其异构体进行有效分离,采用LC/MS二级质谱扫描确... 详细信息

亚硝胺类化合物由于其结构上存在N-N=O键,容易发生异构化现象。本研究在采用HPLC法对4-(甲基亚硝胺基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)进行分析时,观察到双色谱峰现象。并采用PFP色谱柱对NNK及其异构体进行有效分离,采用LC/MS二级质谱扫描确认了色谱图中2个色谱峰的分子、离子以及碎片离子均相同。同时采用NMR法对一级和二级核磁信号进行结构归属,进一步确证NNK中的杂质峰均属于同分异构体。此外,通过变温试验,采用NMR法测定了NNK的异构化比例范围;通过HPLC的变温试验,确证了NMR的结果。本研究通过多角度试验方法验证NNK存在互变异构体的现象,有利于NNK含量的准确分析,同时为该类异构化遗传毒性杂质的检测提供了理论依据。

关键词： 4-(甲基亚硝胺基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK) 异构体核磁定量 LC-MS 变温试验

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1-甲基-4-亚硝基哌嗪国家标准物质的研制及其核磁定量考察

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中国现代应用药学 2023年第24期40卷 3399-3403页

作者：关皓月冯玉飞孙百浩牛剑钊中国食品药品检定研究院北京100050

目的以1-甲基-4-亚硝基哌嗪为例,介绍亚硝胺类化合物标准物质研制过程,并讨论采用核磁定量方法分析时需注意的问题。方法采用气质联用、红外光谱和核磁共振法对该原料进行结构确证,定量考察方面进行HPLC纯度分析及水分测定;采用质量... 详细信息

目的以1-甲基-4-亚硝基哌嗪为例,介绍亚硝胺类化合物标准物质研制过程,并讨论采用核磁定量方法分析时需注意的问题。方法采用气质联用、红外光谱和核磁共振法对该原料进行结构确证,定量考察方面进行HPLC纯度分析及水分测定;采用质量平衡法计算1-甲基-4-亚硝基哌嗪的含量,同时辅以定量核磁共振法验证本批原料的含量。结果本批1-甲基-4-亚硝基哌嗪原料结构准确,在定量核磁考察中发现采用不同内标物对核磁定值结果影响较大。结论由于1-甲基-4-亚硝基哌嗪本身具有碱性,使得其在核磁定量分析中采用酸性内标物测定易降低含量数值,因此提示对于该类样品在核磁定量过程中应选择适宜的内标物。

关键词：国家标准物质 1-甲基-4-亚硝基哌嗪质量平衡法

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药品中亚硝胺类杂质介绍

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Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences 2023年第3期32卷 223-230页

作者：牛剑钊杨东升冯玉飞孙百浩关皓月马玲云中国食品药品检定研究院北京100050

药品中被报道可能出现亚硝胺类杂质是近年来医药领域的新热点问题。目前,因可能存在亚硝胺杂质而被报道的药品共有5类:沙坦类、含二甲双胍类、雷尼替丁类、利福平类和酒石酸伐尼克兰片。本文介绍了“亚硝胺类杂质形成的来源和潜在的根... 详细信息

药品中被报道可能出现亚硝胺类杂质是近年来医药领域的新热点问题。目前,因可能存在亚硝胺杂质而被报道的药品共有5类:沙坦类、含二甲双胍类、雷尼替丁类、利福平类和酒石酸伐尼克兰片。本文介绍了“亚硝胺类杂质形成的来源和潜在的根本原因”,“原料药和药品中潜在或已发现的亚硝胺杂质”,以及“对这些杂质建议的可接受摄入限度”,并总结了目前药品中涉及亚硝胺杂质的情况,以及FDA和EMA采取的相应控制策略,以期为中外医药企业以及监管部门提供参考,对药品中亚硝胺类杂质进行全面的了解。

关键词：亚硝胺类杂质药品食品药品监督管理局欧洲药品管理局原料药

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用^(1)H定量核磁共振法同时确定成盐化合物的质量分数和各组分的比例

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北京师范大学学报（自然科学版） 2023年第3期59卷 396-400页

作者：冯玉飞马玲云刘睿关皓月刘倩杨东升牛剑钊中国食品药品检定研究院北京100050 北京师范大学化学学院北京100875

^(1)H定量核磁共振(^(1)H quantitative nuclear magnetic resonance,^(1)H qNMR)方法具有操作简便、实验快速等优点.本文通过该方法可准确测定富马酸丙酚替诺福韦在样品中的含量,并给出丙酚替诺福韦和富马酸的比例,结果与其他分析测试... 详细信息

^(1)H定量核磁共振(^(1)H quantitative nuclear magnetic resonance,^(1)H qNMR)方法具有操作简便、实验快速等优点.本文通过该方法可准确测定富马酸丙酚替诺福韦在样品中的含量,并给出丙酚替诺福韦和富马酸的比例,结果与其他分析测试所得结果相符.该方法以氘代二甲基亚砜(DMSO-d^(6))为溶剂,采集待测样品的核磁共振氢谱,对比丙酚替诺福韦定量峰、富马酸定量峰与内标物响应峰面积,分别计算丙酚替诺福韦和富马酸的质量分数.富马酸丙酚替诺福韦和富马酸与内标物的质量比值在0.91~1.24范围内线性关系良好,^(1)H qNMR法测得二者质量分数分别为100.06%和10.90%,与质量平衡法测得的结果基本一致.本研究建立的核磁共振定量方法不仅可准确、快速地测定丙酚替诺福韦和富马酸这2种成分的质量分数和比例,还为多组分、成盐的化学原料药的比例确定、绝对含量测定提供参考.

关键词： ^(1)H定量核磁共振波谱法富马酸丙酚替诺福韦质量平衡法原料药

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盐酸多奈哌齐片质量评价

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中国药物警戒 2023年第12期20卷 1375-1381页

作者：关皓月刘年藄梦洁孙百浩刘雪婧胡钖牛剑钊中国食品药品检定研究院化学药品检定所北京100050

目的评价盐酸多奈哌齐片的质量现状,为其生产质控和有效监管提供参考。方法按照国家药品抽检计划要求,采用各执行标准检验结合探索性研究的方式,对包括原研企业在内的7家生产企业的140批次样品进行质量考察。结果按执行标准检验全部合格... 详细信息

目的评价盐酸多奈哌齐片的质量现状,为其生产质控和有效监管提供参考。方法按照国家药品抽检计划要求,采用各执行标准检验结合探索性研究的方式,对包括原研企业在内的7家生产企业的140批次样品进行质量考察。结果按执行标准检验全部合格,普通国产制剂与参比制剂及通过仿制药一致性评价的产品,在有关物质和含量等方面仍存在一定的质量差异。现行片剂各执行标准中,检验项目不同,检验方法和标准限度不统一。结论国内盐酸多奈哌齐片的总体质量趋好,仿制制剂质量水平与参比制剂仍存在差距。现行标准基本可行,但仍需完善和提高,以控制生产过程,提升药品质量。

关键词：盐酸多奈哌齐药品抽检质量分析参比制剂仿制药一致性评价

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耕作方式对豫西旱地麦-豆轮作田土壤理化特性和酶活性的影响

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干旱地区农业研究 2023年第6期41卷 168-178页

作者：李爽李文娜关皓月李梦瑶吴金芝赵凯男张军黄明李友军河南科技大学农学院河南洛阳471023

为探明耕作方式对豫西旱地麦-豆轮作田不同土层土壤理化特性和土壤酶活性的影响,设置免耕(NT)、旋耕(RT)和翻耕(PT)3种耕作方式,分析了定位试验9 a(2009-2019年)后小麦收获期的土壤容重、孔隙度和有机质、全氮、有效磷和速效钾含量,以... 详细信息

为探明耕作方式对豫西旱地麦-豆轮作田不同土层土壤理化特性和土壤酶活性的影响,设置免耕(NT)、旋耕(RT)和翻耕(PT)3种耕作方式,分析了定位试验9 a(2009-2019年)后小麦收获期的土壤容重、孔隙度和有机质、全氮、有效磷和速效钾含量,以及土壤脲酶、蛋白酶、转化酶和碱性磷酸酶活性,并运用相关分析和通径分析研究了土壤理化性质与土壤酶活性的关系。结果表明:不同耕作方式对土壤理化特性和酶活性具有显著的调控作用,其调控效应与其作业深度相关。RT较PT有利于降低0~15 cm土层但增加15~35 cm土层容重,NT较RT和PT显著降低了0~5、15~35、35~60 cm土层的土壤容重,土壤孔隙度变化规律与容重相反。各处理间土壤有机质、全氮、有效磷含量以及土壤脲酶、蛋白酶、转化酶和碱性磷酸酶活性在0~5 cm土层和15~35 cm土层规律一致,0~5 cm土层均以NT最优,分别较最低值处理(PT)显著提高16.7%、53.2%、15.9%、23.6%、18.0%、34.7%和29.0%;15~35 cm土层均以PT最优,分别较最低值处理(NT)显著提高18.3%、23.4%、53.4%、5.8%、16.6%、29.0%和21.6%。在5~15 cm土层,土壤有机质、全氮、有效磷含量和土壤蛋白酶活性的规律一致且均以RT最优,分别较最低值处理(NT)显著提高13.8%、23.0%、16.0%和10.7%,土壤速效钾含量及土壤脲酶、转化酶和碱性磷酸酶的活性的规律一致且均以RT最优,分别较最低值处理(PT)显著提高6.8%、14.8%、14.8%和12.8%。相关性分析和通径分析结果表明:土壤容重与土壤酶活性极显著负相关,土壤孔隙度、土壤养分含量与土壤酶活性极显著正相关;土壤有机质对土壤脲酶和转化酶有较大的直接正效应,是土壤蛋白酶和碱性磷酸酶的主要限制因子;土壤全氮是土壤蛋白酶的主要决定因子;土壤有效磷是土壤脲酶和转化酶的主要限制因子;土壤速效钾是土壤脲酶和碱性磷酸酶的主要决定因子。综上可知,NT、RT、PT分别有利于优化0~5、5~15、15~35 cm土层的容重、孔隙度和养分含量,进而调控相应土层的酶活性,且不同养分对土壤酶的调控效应不同。旱作区麦-豆轮作田应因地制宜选用不同耕作方式以实现土壤理化性状和土壤酶的均衡分布。

关键词：旱地轮作田耕作方式土壤理化性质土壤酶

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