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Sensitive detection of DNA methyltransferase activity based on supercharged fluorescent protein and template-free DNA polymerization

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Science China Chemistry 2016年第7期59卷 809-815页

作者： Daiqi Li guoyan lu Chunyang Lei Zhen Wang Lijun Li Zhou Nie Yan Huang Shouzhuo Yao State Key Laboratory of Chemo/Biosensing and Chemometrics College of Chemistry and Chemical Engineering Hunan University

DNA methylation, catalyzed by DNA methyltransferases(MTases), is a key component of genetic regulation, and DNA MTases have been regarded as potential targets in anticancer therapy. Herein, based on our previously developed DNA-mediated supercharged green fluorescent protein(Sc GFP)/graphene oxide(GO) interaction, coupled with methylation-initiated template-free DNA polymerization, we propose a novel fluorescence assay strategy for sensitive detection of DNA MTase activity. A hairpin DNA with a methylation-sensitive site and an amino-modified 3′-terminal(DNA-1) was designed and worked as a starting molecule. In the presence of DNA MTase, methylation-sensitive restriction endonuclease, and terminal deoxynucleotidyl transferase(Td T), DNA-1 can be sequentially methylated, cleaved, and further elongated. The resulting long DNA fragments quickly bind with Sc GFP and form the Sc GFP/DNA nanocomplex. Such nanocomplex can effectively protect Sc GFP from being adsorbed and quenched by GO. Without the methylation-initiated DNA polymerization, the fluorescence of Sc GFP will be quenched by GO. Thus, the DNA MTase activity, which is proportional to the amount of DNA polymerization products, can be measured by reading the fluorescence of Sc GFP/GO. The method was successfully used to detect the activity of DNA adenine methylation(Dam) MTase with a wide linear range(0.1–100 U/m L) and a low detection limit of 0.1 U/m L. In addition, the method showed high selectivity and the potential to be applied in a complex sample. Furthermore, this study was successfully extended to evaluate the inhibition effect of 5-fluorouracil on Dam MTase activity and detect Td T activity.

关键词： DNA methyltransferase supercharged fluorescent protein graphene oxide DNA polymerization

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Impact of age and tumor size on the development of the Kasabach-Merritt phenomenon in patients with kaposiform hemangioendothelioma:a retrospective cohort study

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Precision Clinical Medicine 2023年第2期6卷 81-88页

作者： Jiangyuan Zhou Yuru Lan Tong Qiu Xue Gong Zixin Zhang Chunshui He Qiang Peng Fan Hu Xuepeng Zhang guoyan lu Liqing Qiu Feiteng Kong Yongbo Zhang Siyuan Chen Yi Ji Division of Oncology Department of Pediatric SurgeryWest China Hospital of Sichuan UniversityChengdu 610041China Department of Vascular Surgery University Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese MedicineChengdu 610032China Department of Pediatric Surgery Chengdu Women and Children’s Central HospitalChengdu 610073China Department of Vascular&Interventional Radiology West China Second University HospitalSichuan UniversityChengdu 610044China Department of Pediatrics West China Second University HospitalSichuan UniversityChengdu 610044China Department of Pediatric Surgery Chengdu Shangjin Nanfu HospitalChengdu 611730China Department of Pediatric Surgery Sichuan Women and Children’s HospitalChengdu 610036China Pediatric Intensive Care Unit Department of Critical Care MedicineWest China Hospital of Sichuan UniversityChengdu 610041China

Introduction The Kasabach–Merritt phenomenon(KMP)is a severe complication of kaposiform hemangioendothelioma(KHE).The risk factors for KMP need further *** The medical records of patients with KHE were *** and multivariate logistic regression models were used for the risk factors for KMP,and the area under the receiver operator characteristic(ROC)curve was used to assess the predictive power of risk *** A total of 338 patients with KHE were *** incidence of KMP was 45.9%.Age of onset(P5.35 cm,clinicians should be wary of the occurrence of *** management is recommended to improve the prognosis.

关键词： kaposiform hemangioendothelioma Kasabach-Merritt phenomenon age of onset tumor size cutoff values

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腹部超声联合阴道超声在妇科急腹症患者中的诊断效果及鉴别价值研究

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中国伤残医学 2024年第14期32卷 116-118页

作者：鲁国艳四川省都江堰市第二人民医院功能科都江堰611830

目的:研究腹部超声联合阴道超声在妇科急腹症患者中的诊断效果及鉴别价值。方法:回顾性分析2022年1月—2024年1月都江堰市第二人民医院的120例高度疑似妇科急腹症患者资料,所有患者均接受腹部超声检查、阴道超声检查及联合检查(腹部超... 详细信息

目的:研究腹部超声联合阴道超声在妇科急腹症患者中的诊断效果及鉴别价值。方法:回顾性分析2022年1月—2024年1月都江堰市第二人民医院的120例高度疑似妇科急腹症患者资料,所有患者均接受腹部超声检查、阴道超声检查及联合检查(腹部超声联合阴道超声检查)。以病理检查结果作为金标准,分析3种不同检查方式的临床诊断效果。结果:120例高度疑似妇科急腹症患者的病理检查结果显示阳性88例,其中包括异位妊娠30例、急性盆腔炎16例、卵巢囊肿蒂扭转22例、黄体破裂20例;阴性32例,其中包括急性腹痛22例、急性阑尾炎10例。腹部超声检查结果显示阳性70例、阴性50例,灵敏度、特异性、准确性、误诊率、漏诊率、阳性预测值、阴性预测值分别为68.18%、68.75%、68.33%、31.25%、31.82%、85.71%、44.00%。阴道超声检查结果显示阳性76例、阴性44例,灵敏度、特异性、准确性、误诊率、漏诊率、阳性预测值、阴性预测值分别为78.41%、78.13%、78.33%、21.88%、21.59%、90.79%、56.82%。联合检查结果显示阳性87例、33例阴性,灵敏度、特异性、准确性、误诊率、漏诊率、阳性预测值、阴性预测值分别为97.73%、96.88%、97.50%、3.13%、2.27%、98.85%、93.94%。联合检查的灵敏度、特异性、准确性、阳性预测值、阴性预测值均高于单一腹部超声检查、单一阴道超声检查,联合检查的误诊率、漏诊率均低于单一腹部超声检查、单一阴道超声检查,差异均有统计学意义(P<0.05)。联合检查阳性患者的鉴别诊断中,检出异位妊娠30例、急性盆腔炎16例、卵巢囊肿蒂扭转22例、黄体破裂20例,其与金标准阳性鉴别诊断相比,准确性分别为100.00%(30/30)、93.75%(15/16)、100.00%(22/22)、100.00%(20/20)。结论:腹部超声联合阴道超声在诊断和鉴别妇科急腹症患者中的临床价值高于单一腹部超声检查和单一阴道超声检查,具有重要的临床应用意义。

关键词：妇科急腹症腹部超声阴道超声诊断效果鉴别价值

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返青期断根对秸秆覆盖冬小麦产量及叶片光合特性的影响

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麦类作物学报 2021年第6期41卷 738-744页

作者：封涌涛路国艳胡昌录孙玉梅宝鸡市农业技术推广服务中心陕西宝鸡721001 西北农林科技大学资源环境学院农业部西北植物营养与农业环境重点实验室陕西杨凌712100 榆林市榆阳区农业科技培训中心陕西榆林719000

为了解返青期断根对黄土高原旱地保护性耕作下小麦产量形成及水分利用的调控作用,在陕西长武县开展旱地秸秆覆盖条件下冬小麦返青期断根试验,分析了返青期断根对冬小麦籽粒产量、地上部生物量、收获指数、产量构成三要素、拔节期群体数... 详细信息

为了解返青期断根对黄土高原旱地保护性耕作下小麦产量形成及水分利用的调控作用,在陕西长武县开展旱地秸秆覆盖条件下冬小麦返青期断根试验,分析了返青期断根对冬小麦籽粒产量、地上部生物量、收获指数、产量构成三要素、拔节期群体数量、生育期耗水量、水分利用效率、花后旗叶光合特性及衰老特性的影响。结果表明,返青期断根对冬小麦地上部生物量、穗数、粒重和生育期耗水量没有显著影响。与CK(不断根)相比,返青期断根后冬小麦拔节期总茎数减少了11.9%,开花期叶面积指数、花后旗叶叶绿素含量、光合速率和蒸腾速率提高,分蘖成穗率、穗粒数、籽粒产量、收获指数和水分利用效率分别增加了14.1%、10.5%、8.2%、10.4%、17.5%和20.4%。这说明返青期断根可促进秸秆覆盖条件下冬小麦分蘖成穗,增加花后旗叶光合作用,改善穗部结实特性,提高籽粒产量和水分高效利用。

关键词：返青期断根秸秆覆盖冬小麦产量光合特性叶片衰老

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横坑切梢小蠹幼虫触角与口器化学感器的超微结构

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生物安全学报（中英文） 2024年第3期33卷 291-299页

作者：鲁国艳朱海迪杨培杨斌李宗波西南林业大学生物多样性保护学院/云南省森林灾害预警与控制重点实验室云南昆明650224 云南中医药大学云南昆明650500

【目的】了解横坑切梢小蠹幼虫触角和口器上化学感器的类型、数量和分布。【方法】应用扫描电子显微镜观察了横坑切梢小蠹末龄幼虫头部形态及触角和口器上的化学感器。【结果】横坑切梢小蠹幼虫触角仅有1节,着生有2类6种感器,分别为锥... 详细信息

【目的】了解横坑切梢小蠹幼虫触角和口器上化学感器的类型、数量和分布。【方法】应用扫描电子显微镜观察了横坑切梢小蠹末龄幼虫头部形态及触角和口器上的化学感器。【结果】横坑切梢小蠹幼虫触角仅有1节,着生有2类6种感器,分别为锥形感器1~2和末梢锥形感器1~4;下颚须和下唇须均为2节,共发现有3类5种感器,包括锥形感器3、指形感器、末梢锥形感器2、4和5。锥形感器1~3表面具多孔,为典型的嗅觉器官;末梢锥形感器顶端具孔,应为味觉感器;指形感器为下颚须特有,每侧仅有1个,光滑、无孔表面可能意味其具有声音感知功能。【结论】横坑切梢小蠹末龄幼虫头部化学感器数量少,分布模式简单,且集中分布在触角、下颚须和下唇须的端部,研究将为深入理解横坑切梢小蠹幼虫取食及其相关行为提供科学依据。

关键词：横坑切梢小蠹幼虫触角口器化学感器超微结构

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一种多功智能雨刷器的设计研究

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汽车实用技术 2019年第7期45卷 181-182页

作者：路国廷张亚萍不详

雨刷器是汽车上的重要组成部分,为汽车驾驶者提供了方便以及有力的安全保障。但是传统的雨刷器还要许多小改进的地方,文章介绍了一种多功智能雨刷器,以解决现在雨刷器存在的问题。

关键词：雨刷器汽车多功能

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补骨脂水提药渣大鼠三个月长期毒性试验研究

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药物评价研究 2019年第6期42卷 1128-1134页

作者：杨莉王昭昕卢国彦王跃飞张玥周昆天津中医药大学中医药研究院天津300193 天津中医药大学方剂学教育部重点实验室天津300193

目的研究补骨脂水提药渣大鼠ig给药的长期毒性。方法 SD大鼠70只,按体质量、性别随机分为5组:对照组、补骨脂生药粉高、低剂量组,补骨脂水提药渣高、低剂量组(各组高、低剂量均相当于生药6、3 g/kg,分别为临床等效剂量的11.11、5.56倍)... 详细信息

目的研究补骨脂水提药渣大鼠ig给药的长期毒性。方法 SD大鼠70只,按体质量、性别随机分为5组:对照组、补骨脂生药粉高、低剂量组,补骨脂水提药渣高、低剂量组(各组高、低剂量均相当于生药6、3 g/kg,分别为临床等效剂量的11.11、5.56倍),每组14只,雌雄各半,每日ig给药1次,连续给药12周。每周称大鼠体质量,药结束后,取心脏、肝脏、脾脏、肾脏、胸腺,称质量并计算脏器系数;血细胞分析仪检测血液学指标;全自动生化仪血清生化学指标;试剂盒法检测大鼠肝脏中氧化应激指标;做肝脏和肾脏组织病理学检查。结果与对照组比较,生药粉和药渣高剂量组雄性大鼠体质量均显著下降(P<0.05),而药渣组雌性大鼠体质量随给药时间延长无显著性变化;补骨脂生药粉和水提药渣雌性、雄性大鼠的肝系数均显著升高(P<0.01);雄性大鼠生药粉和药渣高剂量组、雌性大鼠生药粉组和药渣高剂量组肾系数显著升高(P<0.05、0.01、0.001);雄性大鼠生药粉高剂量组血小板(PLT)水平,药渣低剂量组红细胞(RBC)水平显著升高,生药粉低剂量组和药渣低剂量组白细胞(WBC)水平,药渣高剂量组PLT水平显著下降,雌性大鼠各给药组PLT均显著下降(P<0.05);雄性大鼠生药粉组碱性磷酸酶(ALP)和三酰甘油(TG)水平均显著下降,总蛋白(TP)水平显著升高,生药粉低剂量组尿素氨(BUN)水平显著下降(P<0.05、0.01、0.001);药渣高剂量组TP和白蛋白(ALB)、药渣低剂量组天冬氨酸转氨酶(AST)显著升高,丙氨酸转氨酶(ALT)和ALP显著下降(P<0.05、0.01、0.001);雄性大鼠生药粉高剂量组和药渣组丙二醛(MDA)显著升高(P<0.05),雌性大鼠生药粉组MDA和总抗氧化能力(T-AOC)、药渣组MDA均显著下降(P<0.05、0.01)。结论长时间给予大剂量补骨脂水提药渣,对大鼠肝脏和肾脏功能均造成一定损害。

关键词：补骨脂水提药渣长期毒性试验

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补骨脂不同提取部位大鼠给药3个月的毒性比较研究

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药物评价研究 2019年第8期42卷 1531-1536页

作者：杨莉王昭昕卢国彦王跃飞张玥周昆天津中医药大学中医药研究院天津300193 天津中医药大学方剂学教育部重点实验室天津300193

目的研究补骨脂不同提取部位大鼠长期ig给药的毒性反应。方法按照一定的方法制备得到补骨脂不同部位提取物,即渗漉药渣、上层渗漉液和混合物。将SD大鼠98只,按体质量、性别随机分为7组,即对照组,补骨脂药渣高、低剂量组,补骨脂干膏高、... 详细信息

目的研究补骨脂不同提取部位大鼠长期ig给药的毒性反应。方法按照一定的方法制备得到补骨脂不同部位提取物,即渗漉药渣、上层渗漉液和混合物。将SD大鼠98只,按体质量、性别随机分为7组,即对照组,补骨脂药渣高、低剂量组,补骨脂干膏高、低剂量组,补骨脂混合物高、低剂量组(高、低剂量均相当于生药6、3 g/kg),每组14只。以1 mL/100 g剂量ig给药12周。每周称大鼠体质量,给药结束后,剖取脏器,计算脏器系数;取血,检测血清生化指标;取肝脏和肾脏组织进行组织病理学检查。结果连续给药12周后,与对照组相比,混合物高剂量组以及干膏高剂量组雄性大鼠体质量显著降低(P<0.05、0.01);与对照组相比,随给药时间的延长,干膏低剂量组雌性大鼠体质量显著降低(P<0.05),其余给药组无显著差异。除干膏高、低剂量组外,其余各组雄性、雌性大鼠肝脏系数均显著高于对照组(P<0.01、0.001)。与对照组比较,雄性大鼠混合物高剂量组以及药渣高、低剂量组的丙氨酸氨基转换酶(ALT)、三酰甘油(TG)显著下降(P<0.05、0.01),混合高剂量组和干膏高、低剂量组尿素氨(BUN)显著降低(P<0.05、0.01、0.001)。与对照组相比,雌性大鼠混合物高剂量组和干膏高剂量组总胆汁酸(TBA)显著升高(P<0.01),混合物高剂量组和药渣高、低剂量组总胆红素(TBIL)显著升高(P<0.05、0.01)。结论大鼠长期ig给予补骨脂不同提取物可造成一定的毒性反应,且具有一定的剂量相关性,主要表现为肝脏和肾脏功能损害,并且损伤程度存在雌雄差异。

关键词：补骨脂提取物毒性试验

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新生儿脓毒症免疫治疗的临床证据

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中华实用儿科临床杂志 2015年第6期30卷 429-432页

作者：刘忠强李熙鸿李德渊罗黎力卢国艳母得志四川大学华西第二医院PICU 成都610041

目的新生儿脓毒症（neonatMsepsis，NS）是新生儿死亡的主要原因之一，免疫治疗是Ns综合治疗的重要组成部分。本研究通过检索近年来关于NS免疫治疗的临床证据，探讨其临床应用价值。方法检索MEDLINE、EMBASE数据库和Cochrane图书馆关于N... 详细信息

目的新生儿脓毒症（neonatMsepsis，NS）是新生儿死亡的主要原因之一，免疫治疗是Ns综合治疗的重要组成部分。本研究通过检索近年来关于NS免疫治疗的临床证据，探讨其临床应用价值。方法检索MEDLINE、EMBASE数据库和Cochrane图书馆关于NS免疫治疗的系统评价及随机（或半随机）对照试验，并进行分析比较。结果6个系统评价（共计37个随机对照临床试验）纳入研究，药物包括免疫球蛋白（含高IgM免疫球蛋白）、抗葡萄球菌免疫球蛋白、中性粒细胞、粒细胞集落刺激因子、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、己酮可可碱、谷氨酸盐。目前研究提示，己酮可可碱的使用能降低NS死亡率（Z=2．71，P=0．0068）、缩短住院时间（Z=2．01，P=0．044）及减少NS患儿坏死性小肠结肠炎（NEC）的发生率（Z=1．67，P=0．095），其余药物的使用并未见明确疗效。结论关于NS免疫治疗的临床证据表明，到目前为止，仅己酮可可碱能降低NS患儿病死率、减少NS患儿NEC发生率和缩短住院时间，其余药物均表明无明确疗效。现有NS免疫治疗的临床研究存在样本数量小、缺乏多中心研究等问题，需大规模、多中心的临床试验进一步证实免疫治疗的有效性。

关键词：脓毒症免疫治疗系统评价婴儿新生

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疏风解毒胶囊治疗儿童甲型H1N1流感病毒肺炎的疗效观察

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中国中医急症 2024年第11期33卷 1977-1980页

作者：赵天兰钟长云任盛卢国艳四川省绵阳市人民医院四川绵阳621000 四川大学华西第二医院四川成都610041

目的观察疏风解毒胶囊治疗儿童甲型H1N1流感病毒肺炎的临床效果及对患儿IL-1β、IL-6、IFN-γ的影响。方法106例甲型H1N1流感病毒肺炎患儿随机分为对照组与观察组各53例。对照组给予奥司他韦治疗,观察组给予奥司他韦联合疏风解毒胶囊治... 详细信息

目的观察疏风解毒胶囊治疗儿童甲型H1N1流感病毒肺炎的临床效果及对患儿IL-1β、IL-6、IFN-γ的影响。方法106例甲型H1N1流感病毒肺炎患儿随机分为对照组与观察组各53例。对照组给予奥司他韦治疗,观察组给予奥司他韦联合疏风解毒胶囊治疗。比较两组临床疗效、预后相关指标、血气指标[动脉血氧分压(PaO_(2))、动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))、氧合指数(PaO_(2)/FiO_(2))]、炎性因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(iIFN-γ)]以及不良反应发生率。结果观察组治疗总有效率为96.23%,高于对照组的81.13%(P0.05)。结论疏风解毒胶囊治疗儿童甲型H1N1流感病毒肺炎的效果确切,有助于促进患儿病情快速康复,改善血气指标,降低炎性反应,且安全性良好。

关键词：甲型H1N1流感病毒肺炎儿童疏风解毒胶囊炎性因子奥司他韦不良反应

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