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Epigenetic integrity of paternal imprints enhances the developmental potential of androgenetic haploid embryonic stem cells

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Protein & Cell 2022年第2期13卷 102-119页

作者： Hongling Zhang Yuanyuan Li Yongjian Ma Chongping Lai Qian Yu guangyong shi Jinsong Li State Key Laboratory of Cell Biology Shanghai Key Laboratory of Molecular AndrologyCAS Center for Excellence in Molecular Cell ScienceShanghai Institute of Biochemistry and Cell BiologyUniversity of Chinese Academy of SciencesChinese Academy of SciencesShanghai 200031China School of Life Science and Technology ShanghaiTech UniversityShanghai 201210China Animal Core Facility Shanghai Institute of Biochemistry and Cell BiologyCenter for Excellence in Molecular Cell ScienceChinese Academy of SciencesUniversity of Chinese Academy of SciencesShanghai 200031China School of Life Science Hangzhou Institute for Advanced StudyUniversity of Chinese Academy of SciencesHangzhou 310024China

The use of two inhibitors of Mek1/2 and Gsk3β(2i)promotes the generation of mouse diploid and haploid embryonic stem cells(ESCs)from the inner cell mass of biparental and uniparental blastocysts,***,a system enabling long-term maintenance of imprints in ESCs has proven ***,we report that the use of a two-step a2i(alternative two inhibitors of Src and Gsk3β,TSa2i)derivation/culture protocol results in the establishment of androgenetic haploid ESCs(AG-haESCs)with stable DNA methylation at paternal DMRs(differentially DNA methylated regions)up to passage 60 that can efficiently support generating mice upon oocyte *** also show coexistence of H3K9me3 marks and ZFP57 bindings with intact DMR ***,we demonstrate that TSa2itreated AG-haESCs are a heterogeneous cell population regarding paternal DMR ***,AGhaESCs with late passages display increased paternal-DMR methylations and improved developmental potential compared to early-passage cells,in part through the enhanced proliferation of H19-DMR hypermethylated ***,we establish AG-haESCs that can longterm maintain paternal imprints.

关键词： paternal imprints androgenetic haploid ESCs DMRs semi-cloned mice alternative 2i

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干扰素-α通过PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞SMCC-7721的影响及相关性

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中华医学杂志 2015年第36期95卷 2960-2963页

作者：闫琳师广勇郑州大学第五附属医院肿瘤治疗中心 450052

目的探讨干扰素-α（IFN-α）通过PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞SMCC-7721的影响及相关分子机制.方法通过MTT法检测IFN-α对SMCC-7721细胞活力的影响;利用流式细胞术检测IFN-α对SMCC-7721细胞周期的影响;Western印迹分析脂酰肌醇3激酶... 详细信息

目的探讨干扰素-α（IFN-α）通过PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞SMCC-7721的影响及相关分子机制.方法通过MTT法检测IFN-α对SMCC-7721细胞活力的影响;利用流式细胞术检测IFN-α对SMCC-7721细胞周期的影响;Western印迹分析脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路的激活状况及其下游靶基因糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）、细胞周期蛋白D1（Cyclin Dl）、p21的表达变化,以及C-myc和Survivin的表达变化情况.结果 MTT结果显示IFN-α（5、10、15 U/L）均可显著抑制细胞的活力（P＜0.05）,并且在48 h抑制程度最高,抑制率分别为（10.5±3.1）％、（24.3±4.6）％、（39.4±5.5）％（P＜0.01）.流式细胞仪结果显示：与对照组比较,（5、10、15 U/L） IFN-α可使细胞周期阻滞在G1期,Western印迹结果显示：（10、15 U/L） IFN-α显著下调PI3K表达并抑制GSK-3β磷酸化（P＜0.05）,（5、10、15 U/L） IFN-α均可抑制Akt磷酸化,并下调Cyclin D1量及上调p21的表达（P＜0.05）,（10、15 U/L） IFN-α均可下调C-myc和Survivin的表达（P＜0.05）.结论 IFN-α可抑制肝癌细胞SMCC-7721生长和增殖,阻断PI3 K/Akt信号通路传导,影响Cyclin D1、p21、C-myc、Survivin等分子表达.

关键词：干扰素-α 肝癌细胞SMCC-7721 PI3K/Akt信号通路

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无溶剂热处理固相转化法简易制备沸石咪唑酯骨架材料

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高等学校化学学报 2020年第8期41卷 1753-1759页

作者：徐伟王积超施广用 CHAEMCHUEN Somboon 武汉理工大学材料科学与工程学院材料复合新技术国家重点实验室武汉430070

设计开发了一种无需溶剂,通过热处理固相转化制备沸石咪唑酯骨架材料(ZIFs)的简易方法.该方法无需溶剂及其它预处理,只需将金属源与有机配体固相混合后于低温(200℃)热处理即可实现多孔晶体材料的制备.所合成材料H-ZIF-67为具有方纳石... 详细信息

设计开发了一种无需溶剂,通过热处理固相转化制备沸石咪唑酯骨架材料(ZIFs)的简易方法.该方法无需溶剂及其它预处理,只需将金属源与有机配体固相混合后于低温(200℃)热处理即可实现多孔晶体材料的制备.所合成材料H-ZIF-67为具有方纳石拓扑结构的纳米晶体,与传统方式合成的ZIFs材料一致.粉末X射线衍射(PXRD)分析结果表明产物的晶体结构与标准ZIFs谱图一致.通过扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)、N2吸附-脱附分析、热重分析(TGA)和傅里叶变换红外光谱(FTIR)等手段对合成的材料进行了表征,发现H-ZIF-67材料具有与ZIFs材料类似的特性.该方法经济、高效,摒弃了传统方法合成ZIFs材料周期长、处理过程复杂的弊端,为ZIFs材料的量产提供了新思路.

关键词：沸石咪唑酯骨架材料固相转化无溶剂合成热处理

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卡培他滨加用奥沙利铂联合治疗晚期结肠癌的临床疗效和毒副作用分析

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实用癌症杂志 2018年第2期33卷 305-307页

作者：师广勇郑州大学第五附属医院 450052

目的观察卡培他滨加用奥沙利铂联合治疗晚期结肠癌的临床疗效和毒副作用。方法选取68例晚期结肠癌患者,将患者随机分为对照组和实验组,每组34例。对照组给予奥沙利铂单药治疗,实验组给予奥沙利铂加卡培他滨联合治疗,治疗周期结束后比较... 详细信息

目的观察卡培他滨加用奥沙利铂联合治疗晚期结肠癌的临床疗效和毒副作用。方法选取68例晚期结肠癌患者,将患者随机分为对照组和实验组,每组34例。对照组给予奥沙利铂单药治疗,实验组给予奥沙利铂加卡培他滨联合治疗,治疗周期结束后比较两组临床疗效和毒副作用。结果实验组的临床疗效和毒副作用均优于对照组(P<0.05)。结论卡培他滨加用奥沙利铂联合治疗晚期结肠癌的疗效肯定,且毒副作用较低,患者可耐受。

关键词：卡培他滨奥沙利铂晚期结肠癌临床疗效

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CT引导下^(125)I粒子植入联合药物化疗治疗晚期局部胰腺癌临床评价

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中国药业 2017年第14期26卷 50-53页

作者：师光永北京市密云区医院放射科北京101500

目的观察CT引导下^(125)I粒子植入联合药物化学治疗(简称化疗)治疗晚期局部胰腺癌的疗效和安全性。方法选择医院2015年晚期局部胰腺癌无法手术切除的患者82例,采用随机数字表法分为两组,各41例。对照组患者行吉西他滨全身化疗;观察组患... 详细信息

目的观察CT引导下^(125)I粒子植入联合药物化学治疗(简称化疗)治疗晚期局部胰腺癌的疗效和安全性。方法选择医院2015年晚期局部胰腺癌无法手术切除的患者82例,采用随机数字表法分为两组,各41例。对照组患者行吉西他滨全身化疗;观察组患者在CT引导下行^(125)I粒子植入联合吉西他滨全身化疗治疗。结果观察组总有效率为90.24%,明显优于对照组的26.82%(P<0.05);观察组患者疼痛阳性改善率为56.10%,镇痛药物用量阳性改善率为31.71%,体力阳性改善率为14.63%,分别明显高于对照组的24.39%,4.88%,0(P<0.05);观察组6个月、12个月无进展生存率分别为56.10%和26.83%,明显高于对照组的17.07%和7.32%(P<0.05)。治疗后,观察组躯体、情绪、角色和社会功能4个功能因子评分较本组治疗前及对照组治疗后明显提高(P<0.05);疼痛、疲倦和恶心呕吐3个症状因子评分较本组治疗前及对照组治疗后明显降低(P<0.05)。观察组^(125)I粒子植入患者发生1例上消化道出血,经保守治疗出血停止,1例粒子肝脏移位,随访期间肝功能正常,未出现胰瘘、消化道穿孔、急性胰腺炎等并发症。结论 CT引导下^(125)I粒子植入联合药物化疗治疗局部晚期胰腺癌具有近期疗效好、患者受益多、并发症少的优点,可明显改善患者的生活质量。

关键词： CT ^(125)I粒子植入化学治疗晚期胰腺癌临床疗效安全性

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CT引导精准微波消融联合肝动脉灌注化疗栓塞术对原发性肝癌患者生存率及免疫功能的影响

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中国药业 2017年第12期26卷 68-71页

作者：师光永北京市密云区医院放射科北京101500

目的探讨CT引导精准微波消融联合奥沙利铂肝动脉灌注化学治疗(简称化疗)栓塞术(TACE)对原发性肝癌(PHC)患者生存率及免疫功能的影响。方法选择医院2013年1月至12月收治的原发性肝癌患者102例,采用随机数字表法分为对照组和观察组,各51... 详细信息

目的探讨CT引导精准微波消融联合奥沙利铂肝动脉灌注化学治疗(简称化疗)栓塞术(TACE)对原发性肝癌(PHC)患者生存率及免疫功能的影响。方法选择医院2013年1月至12月收治的原发性肝癌患者102例,采用随机数字表法分为对照组和观察组,各51例。对照组患者给予奥沙利铂TACE治疗,观察组患者采用奥沙利铂TACE联合CT引导精准微波消融治疗。治疗3个月后检测免疫功能相关指标;两组患者均获得随访,以2016年12月31日或死亡为随访终点,比较两组患者1,2,3年生存情况。结果治疗3个月后,两组患者补体C_3及C_4,免疫球蛋白IgA,IgG,IgM水平均较治疗前明显升高(P0.05)。结论 CT引导精准微波消融联合奥沙利铂TACE治疗原发性肝癌可增强患者免疫功能,提高生存率,且不增加并发症发生率,值得临床推广。

关键词： CT 精准微波消融奥沙利铂肝动脉灌注化疗栓塞术原发性肝癌生存率免疫功能

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转染反义微小RNA-155对人皮肤鳞状细胞癌细胞株A431生长的影响

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中华皮肤科杂志 2018年第3期51卷 194-198页

作者：时磊魏明师广勇刘佳龚艳杰陈河涛梁颖红涂玲郑州大学第五附属医院药学部 450052 郑州大学第五附属医院检验科 450052

目的观察转染反义微小RNA？155（miRNA-155）对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株增殖、凋亡以及细胞迁移和侵袭的影响。方法 A431细胞分为3组，采用脂质体介导法转染无义序列miRNA-155（无义序列组）、反义序列 miRNA-155（反义序列组）或... 详细信息

目的观察转染反义微小RNA？155（miRNA-155）对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株增殖、凋亡以及细胞迁移和侵袭的影响。方法 A431细胞分为3组，采用脂质体介导法转染无义序列miRNA-155（无义序列组）、反义序列 miRNA-155（反义序列组）或仅用含Lipofectamine 2000的DMEM（空白对照组）处理。实时定量聚合酶链反应检测转染后各组A431细胞miRNA-155的表达水平，噻唑蓝法检测转染后24、36、72、96、120 h细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞周期变化和凋亡情况，Transwell法检测细胞迁移与侵袭力。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果转染后，无义序列组、反义序列组与空白对照组中A431细胞miRNA-155相对表达量分别为0.98 ± 0.02、0.28 ± 0.18、1.00 ± 0.01，3组差异有统计学意义（F = 634.57，P 〈 0.001），反义序列组低于空白对照组和无义序列组，均P 〈 0.05。孵育72、96、120 h时，3组细胞存活率差异均有统计学意义（均P 〈 0.05），反义序列组细胞存活率在3个时间点均低于空白对照组和无义序列组（均P 〈 0.05）；3组细胞G0/G1期细胞比例、S期细胞比例、细胞增殖指数差异均有统计学意义（F = 23.46、36.81、19.35，P 〈 0.01）。反义序列组G0/G1期细胞比例（74.63% ± 2.13%）高于空白对照组（62.92% ± 2.56%）和无义序列组（63.75% ± 3.06%），均P 〈 0.05；S期细胞比例及细胞增殖指数（9.88% ± 1.83%、25.36 ± 2.13）低于空白对照组（18.86% ± 2.78%、37.08 ± 2.56）和无义序列组（18.33% ± 3.72%、36.25 ± 3.06），均P 〈 0.05；反义序列组迁移细胞数和侵袭细胞数低于空白对照组和无义序列组（均P 〈 0.05）。结论皮肤鳞状细胞癌A431细胞转染反义miRNA-155可减少miRNA-155的表达，有效抑制A431细胞增殖、迁移、侵袭，促进其凋亡。

关键词：癌,鳞状细胞微RNAs RNA,反义细胞增殖细胞凋亡

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生存素小分子干扰RNA对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生存素基因表达及生物学功能的影响

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中华皮肤科杂志 2018年第4期51卷 305-309页

作者：魏明师广勇刘佳龚艳杰陈河涛梁颖红涂玲郑州大学第五附属医院检验科 450052

目的探讨生存素小分子干扰RNA（siRNA）对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生存素基因表达及细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭力的影响。方法培养的A431细胞分为3组：生存素siRNA组、阴性对照组和空白对照组，分别用50.0 nmol/L脂质体包裹的生存素... 详细信息

目的探讨生存素小分子干扰RNA（siRNA）对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生存素基因表达及细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭力的影响。方法培养的A431细胞分为3组：生存素siRNA组、阴性对照组和空白对照组，分别用50.0 nmol/L脂质体包裹的生存素基因序列特异性siRNA、无关序列siRNA阴性脂质体及预制囊泡转染。实时定量反转录-聚合酶链反应（RT？PCR）、Western印迹法分别检测A431细胞生存素mRNA及蛋白的表达。采用MTT比色法检测细胞增殖，流式细胞仪膜联蛋白Ⅴ/碘化丙锭双染法检测细胞凋亡，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭力，流式细胞仪检测细胞周期变化。结果转染后48 h，生存素siRNA组、阴性对照组、空白对照组A431细胞中生存素mRNA水平分别为0.56 ± 0.15、0.88 ± 0.37、0.90 ± 0.43，蛋白表达水平分别为0.59 ± 0.04、0.86 ± 0.05、0.91 ± 0.07，差异均有统计学意义（F = 276.67、243.61，均P 〈 0.001），且生存素siRNA组生存素mRNA和蛋白表达水平均显著低于阴性对照组和空白对照组，差异均有统计学意义（P 〈 0.05），而阴性对照组与空白对照组间差异无统计学意义（均P 〉 0.05）。重复测量方差分析显示，转染生存素siRNA能抑制A431细胞增殖（F = 13.19，P = 0.004），且生存素siRNA组A431细胞增殖抑制率明显高于阴性对照组和空白对照组（均P 〈 0.05），而阴性对照组与空白对照组比较，差异无统计学意义（P 〉 0.05）。转染后24 h， 3组间A431细胞凋亡率差异有统计学意义（F = 83.97，P = 0.002），且生存素siRNA组A431细胞凋亡率显著高于阴性对照组（P 〈 0.05）和空白对照组（P 〈 0.05），而阴性对照组与空白对照组间差异无统计学意义（P 〉 0.05）。转染后48 h，生存素siRNA组G2/M期细胞比例显著高于阴性对照组（P 〈 0.05）和空白对照组（P 〈 0.05），而生存素siRNA组A431细胞迁移数及侵袭数均显著低于空白对照组（均P 〈 0.05）和阴性对照组（均P 〈 0.05）。结论生存素序列特异性siRNA能抑制A431细胞生存素基因表达和细胞增殖，促进细胞凋亡，抑制细胞迁移和侵袭，提示生存素可成为皮肤鳞状细胞癌基因治疗的靶点。

关键词：肿瘤鳞状细胞 RNA 小分子干扰细胞增殖细胞凋亡细胞周期细胞运动生存素 A431细胞

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单中心全胸腔镜微创手术治疗先天性心脏病2543例临床分析

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中华外科杂志 2016年第8期54卷 591-595页

作者：徐学增易蔚李华石广勇陈亚武乔娜陈敏金振晓赵荣金艳俞世强第四军医大学西京医院心血管外科西安710032 空军工程大学

目的探讨全胸腔镜微创手术治疗先天性心脏病的疗效。方法回顾性分析2000年4月至2016年3月连续2 543例在第四军医大学西京医院心血管外科接受全胸腔镜微创心脏手术治疗的先天性心脏病患者资料。男性957例，女性1 586例，年龄0.5-66.0岁... 详细信息

目的探讨全胸腔镜微创手术治疗先天性心脏病的疗效。方法回顾性分析2000年4月至2016年3月连续2 543例在第四军医大学西京医院心血管外科接受全胸腔镜微创心脏手术治疗的先天性心脏病患者资料。男性957例，女性1 586例，年龄0.5-66.0岁，平均年龄（21±18）岁，体重6-118 kg，平均（49±30）kg。术前均经超声心动图或经食管超声心动图确诊为无法行经皮介入治疗的复合或复杂型先天性心脏畸形。采用胸壁3孔入路，建立外周心肺转流，阻断升主动脉，冷血心脏停搏液顺行灌注保护心肌，完成心脏手术。选择技术成熟阶段（2013年1月至2015年12月）的787例全胸腔镜手术患者（腔镜组）与同期710例在同一医院接受开胸手术的患者进行比较（开放组），分别采用t检验、t＇检验、秩和检验、χ^2检验和Fisher确切概率法对两组数据进行比较。结果总体手术病死率为0.35%（9/2 543），术后并发症发生率为2.28%（58/2 543）。存活患者中2 521例获得随访，随访时间1-190个月，平均（75±34）个月，无残余分流和明显瓣膜关闭不全，心功能明显好转。腔镜组与开放组的升主动脉阻断时间、术后呼吸机使用时间、ICU停留时间、手术病死率相似（P〉0.05），而心肺转流时间[（31±20）min比（40±17）min，t＇＝9.407，P＝0.001]、手术时间[（91±27）min比（102±64）min，t＇＝4.251，P＝0.000]和住院天数[（5.3±2.2）d比（13.0±4.0）d，t＇＝45.463，P＝0.000]明显缩短，术后胸腔引流量[M（QR）：33（17）ml比121（53）ml，T＝2.632，P＝0.000]和主要并发症发生率明显减少（7/787比23/710，χ^2＝10.49，P＝0.001），术后无胸骨畸形发生（0比192/710，χ^2＝244.10，P＝0.000），但住院费用略高[（2.4±0.4）万元比（2.0±0.4）万元，t＝19.320，P＝0.000]。结论全胸腔镜微创心脏手术治疗先天性心脏病安全可靠，较常规开胸手术创伤小，并发症少，恢复快，具有较好的中远期效果。

关键词：胸外科手术,电视辅助心脏缺损,先天性治疗结果

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结肠癌组织中SLP-2蛋白的表达及SLP-2基因对HCT-116细胞侵袭、迁移力的影响

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郑州大学学报（医学版） 2014年第4期49卷 513-516页

作者：张剑吴敏张自森王利娟张红巧师广勇巴楠闫琳郑晓珂邢鑫郑州大学第五附属医院肿瘤科郑州450052

目的:探讨结肠癌组织中SLP-2蛋白的表达情况及SLP-2基因对结肠癌细胞HCT-116侵袭、迁移力的影响。方法:采用免疫组化法检测50对结肠癌及正常结肠黏膜组织中SLP-2蛋白的表达,分析患者临床病理特征与SLP-2蛋白表达的关系。设计合成SLP-2 s... 详细信息

目的:探讨结肠癌组织中SLP-2蛋白的表达情况及SLP-2基因对结肠癌细胞HCT-116侵袭、迁移力的影响。方法:采用免疫组化法检测50对结肠癌及正常结肠黏膜组织中SLP-2蛋白的表达,分析患者临床病理特征与SLP-2蛋白表达的关系。设计合成SLP-2 siRNA,转染结肠癌HCT-116细胞,Transwell法及Matrigel基质实验检测转染SLP-2 siRNA对HCT-116细胞侵袭、迁移力的影响,RT-PCR及Western blot检测转染48 h后HCT-116细胞中SLP-2 mRNA及蛋白的表达情况。结果:正常结肠及结肠癌组织中SLP-2蛋白的高表达率比较,差异有统计学意义(χ2配对=23.188,P<0.001)。SLP-2蛋白表达与结肠癌TNM分期(χ2=10.474,P=0.001)及淋巴结转移(χ2=19.647,P<0.001)有关。SLP-2 siRNA转染组细胞迁移力、侵袭力、SLP-2 mRNA及蛋白表达水平均低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05)。结论:结肠癌组织中SLP-2高表达;SLP-2可能通过促进结肠癌细胞的侵袭、迁移能力,参与结肠癌的转移。

关键词：结肠癌 SLP-2 siRNA HCT-116细胞

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