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阳离子脂质体介导粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子基因转染的黑色素瘤细胞作瘤苗的研究

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江西医学院学报 2007年第5期47卷 22-25,51页

作者：刘金辉 glenn larsen 南昌大学医学院微生物学教研室 Depart ment of Preclinical R&D Genetics Institute1 Burtt RoadAndover MA01810 USA

目的本研究拟探讨采用阳离子脂质体介导的鼠粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子基因转染的B16F1细胞作为瘤苗的抗肿瘤效果。方法阳离子脂质体复合mGMCSF DNA转染B16F1细胞,ELISA法检测mGMCSF在B16F1中的表达。[3HTdR]掺入法分析B16F1分泌的mGM... 详细信息

目的本研究拟探讨采用阳离子脂质体介导的鼠粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子基因转染的B16F1细胞作为瘤苗的抗肿瘤效果。方法阳离子脂质体复合mGMCSF DNA转染B16F1细胞,ELISA法检测mGMCSF在B16F1中的表达。[3HTdR]掺入法分析B16F1分泌的mGMCSF生物活性。γ射线照射灭活基因修饰的B16F1细胞皮下免疫小鼠,ELISA分析小鼠血清中的mGMCSF水平。7 d后免疫鼠皮下攻击未修饰的B16F1细胞以检测瘤苗在小鼠体内的抗肿瘤效果5。1Cr释放实验检测免疫鼠抗B16F1的特异CTL反应。结果阳离子脂质体介导mGMCSF基因转染B16F1细胞后,未经阳性克隆筛选,mGMCSF得到特异且具有生物学活性的表达。但表达逐步下降由第1天的(135.5±21.1)μg/L下降到第5d的(47.8±5.3)μg/L。随γ射线照射剂量的增加,mGMCSF的表达逐步降低,但仍具有生物学活性。γ射线照射的5×105基因修饰B16F1接种小鼠后,鼠血清中的mGMCSF水平在4 h时为(198.4±23.1)ng/L,攻击的B16F1细胞在接种瘤苗的小鼠体内的生长完全被抑制,51Cr释放实验结果显示该瘤苗在小鼠体内诱导了特异的CTL反应。结论本研究表明阳离子脂质体作为基因载体介导鼠粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子基因转染的黑色素瘤B16F1细胞,作为瘤苗在小鼠体内可有效地激发抗肿瘤免疫。

关键词：粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子阳离子脂质体肿瘤疫苗 B16F1细胞基因转移

鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因转染小鼠黑色素瘤B16F1细胞

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江西医学院学报 2002年第5期42卷 10-12页

作者：刘金辉 glenn larsen 江西医学院微生物学教研室江西南昌330006 DepartmentofResearch&Development GeneticsInstitute

目的 :探讨基因转移载体脂质体介导转染的鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (mGM CSF)基因在B16F1细胞的表达动态及表达产物的生物活性。方法 :脂质体和质粒DNA复合后 ,转染 10 6B16F1细胞 ,连续 5d换细胞培养液 ,并检测其中的mGM CSF含... 详细信息

目的 :探讨基因转移载体脂质体介导转染的鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (mGM CSF)基因在B16F1细胞的表达动态及表达产物的生物活性。方法 :脂质体和质粒DNA复合后 ,转染 10 6B16F1细胞 ,连续 5d换细胞培养液 ,并检测其中的mGM CSF含量。采用 [3 HTdR]渗入法 ,测定DA1G细胞和转染后第一天收获的以 1:10对倍稀释到 1:6 40的上清液及 [3 HTdR]混合培养后 ,渗入到DA1G细胞的 [3 HTdR]量 (cpm) ,以分析表达产物的生物活性。结果 :转染B16F1细胞的mGM CSF基因得到有效表达。但随着时间的推移 ,表达由第 1天的 135ng/ml下降到第 5天的 42 .2ng/ml。渗入到DA1G细胞的 [3 HTdR]量 (cpm)随上清液的稀释而逐步下降 ,由 1:10稀释度的9371下降到 1:6 40时的 32 5 1。和DMEM混合培养的DA1G细胞的 [3 HTdR]渗入量 (cpm)仅为 472。结论 :脂质体作为基因转移载体可有效地介导mGM CSF基因转染B16F1细胞。

关键词：黑色素瘤B16F1细胞脂质体粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因转移基因表达

基因转移载体脂质体和重组腺病毒介导碱性磷酸酶基因在B16F1细胞中的表达比较

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江西医学院学报 2002年第2期42卷 15-18页

作者：刘金辉 glenn larsen 江西医学院微生物学教研室江西南昌330006 Preclinical Researchand Develpment

目的 :探讨两种基因转移载体脂质体转染的和重组腺病毒收集并转导的SEAP基因在B16F1细胞中的表达动态。方法 :脂质体和质粒DNA复合后 ,转染 10 6 B16F1细胞 ,连续 5d收集并换细胞培养液 ,并检测其中的SEAP酶活性。将重组腺病毒以 10 0 0... 详细信息

目的 :探讨两种基因转移载体脂质体转染的和重组腺病毒收集并转导的SEAP基因在B16F1细胞中的表达动态。方法 :脂质体和质粒DNA复合后 ,转染 10 6 B16F1细胞 ,连续 5d收集并换细胞培养液 ,并检测其中的SEAP酶活性。将重组腺病毒以 10 0 0m .o .i、2 0 0 0m .o .i、3 0 0 0m .o .i、4 0 0 0m .o .i接种B16F1细胞 ,连续 5d收集并换细胞培养液 ,并检测其中SEAP的含量。结果 :随着时间的推移 ,脂质体转染的SEAP的表达逐渐下降 ,由第 1天的 82 1.6μUnit/ml下降到第 5天的 2 75 .2 μUnit/ml。腺病毒转导的SEAP的表达却是逐渐上升。并随接种毒量的增加而上升。且第三、四天表达达最高后 ,能保持较稳定的水平。接种 4 0 0 0m .o .i组 ,SEAP的表达由第 1天的93 .9μUnit/ml上升到第 3天 12 81.1μUnit/ml。到第 5天仍为 12 4 0 .4 μUnit/ml。结论 :脂质体和重组腺病毒作为不同的基因转移载体都能有效地介导外源基因的转移入靶细胞 ,并使外源基因在靶细胞内获得有效地表达。

关键词：脂质体重组腺病毒碱性磷酸酶基因转移基因表达 B16F1细胞载体

二种不同病毒基因表达调节元件对骨多形性蛋白12基因在COS细胞中的表达影响

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江西医学院学报 2005年第1期45卷 33-35页

作者：刘金辉 glenn larsen 江西医学院微生物学教研室 Department of Research & Development Genetics Institute1 Burtt RoadAndover MA 01810USA

目的　比较巨细胞病毒的早期启动子和腺病毒主要晚期启动子(MPL)、三联前导序列(TPL)和插入序列 (IVS)组合对BMP12在COS细胞中表达的影响。方法　BMP12cDNA分别克隆在pED载体中的腺病毒主要晚期启动子(MPL)、三联前导序列(TPL)和... 详细信息

目的　比较巨细胞病毒的早期启动子和腺病毒主要晚期启动子(MPL)、三联前导序列(TPL)和插入序列 (IVS)组合对BMP12在COS细胞中表达的影响。方法　BMP12cDNA分别克隆在pED载体中的腺病毒主要晚期启动子(MPL)、三联前导序列(TPL)和插入序列(IVS)组合下游,构建了表达质粒BMP12/pED。及克隆在AD1- 1载体中巨细胞病毒的早期启动子下游,构建了表达质粒BMP12/AD1 1。采用脂质体法将二个表达质粒分别转染入COS细胞。40h及60h后,分别取100μl培养上清进行Western印迹,检测所表达的BMP12蛋白。结果　 Western印迹结果显示:转染40hr后,只在BMP12/pED转染的COS细胞培养液检测出2个BMP12特异表达产物,大小约为50kD和44kD(较弱)。转染60h后,BMP12/Ad1 1转染的COS细胞培养液有3个BMP12特异表达产物,大小约为:50kD、40kD、15kD;BMP12/pED转染细胞培养液有4个BMP12特异表达产物,大小约为:50kD、 48kD、44kD、15kD。结论　腺病毒主要晚期启动子(MPL)、三联前导序列(TPL)和插入序列(IVS)组合的基因表达调节元件驱动的BMP12表达量高于巨细胞病毒的早期启动子;二种病毒基因表达调节元件驱动的BMP12表达产物的种类与大小均有差异。

关键词：骨多形性蛋白12 基因表达巨细胞病毒腺病毒启动子

脑心肌炎病毒内部核蛋白体进入位点介导白介素-12基因在B16F1细胞中的表达

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江西医学院学报 2003年第4期43卷 9-11页

作者：刘金辉 glenn larsen 江西医学院微生物学教研室江西南昌330006 Department of Research & Development

目的　研究脑心肌炎病毒的内部核蛋白体进入位点连接的鼠白介素 12 (mIL 12 )的 p4 0和p35双亚基基因在同一启动子的调控下能否得以有效地表达并形成异二聚体 p70。方法　采用脂质体法将表达经脑心肌炎病毒的内部核蛋白体进入位点连接... 详细信息

目的　研究脑心肌炎病毒的内部核蛋白体进入位点连接的鼠白介素 12 (mIL 12 )的 p4 0和p35双亚基基因在同一启动子的调控下能否得以有效地表达并形成异二聚体 p70。方法　采用脂质体法将表达经脑心肌炎病毒的内部核蛋白体进入位点连接的p4 0和 p35的质粒mIL - 12 /AD1 1转染B16F1细胞 ,连续 3d收集并换细胞培养液 ,并检测其中的mIL 12 (p70 )量。结果　ELISA结果显示 ,mIL12 (p70 )的表达量随着时间推移逐步下降 ,由第 1天的 15 .5ng/ml逐步下降到第 3天的 9.3ng/ml。表明mIL 12 p4 0和p35双亚基基因得到有效的表达并加工形成了异二聚体p70。结论　脑心肌炎病毒的内部核蛋白体进入位点连接的双基因p4 0和 p35在同一启动子的调控下得以同时表达。

关键词：脑心肌炎病毒白介素12 基因表达内部核蛋白体 B16F1细胞