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Retrovirus-mediated gene transfer of human endostatin inhibits growth of human liver carcinoma cells SMMC7721 in nude mice

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World Journal of Gastroenterology 2002年第6期8卷 1045-1049页

作者： XuanWang Fu-KunLiu XiLi Jie-ShouLi gen-xinxu DepartmentofMolecularBiology NanjingMilitaryMedicalSchoolNanjing210002JiangsuProvinceChina ResearchInstituteofgeneralSurgery ClinicalSchoolofMedicineNanjingUniversityNanjing210002JiangsuProvince

AIM: To study the effect of human endostatin mediated by retroviral gene transfer on the growth of human hepatocarcinoma cell line SMMC7721 in nude mice. METHODS: Human endostatin gene together with rat serum albumin signal peptide was transferred into human liver carcinoma SMMC7721 cells by retroviral vector pLncx to build a stable transfectant (SMMC-endo). PCR and Western blot analysis were used to verify the transfection and secretion of human endostatin gene in SMMC7721 cells. The endothelial cell proliferation assay in vitro was conducted to test the biological activity of the expressed human *** inhibitory effect of endostatin expressed by transfected 5MMC7721 on the growth rates of tumor cells in vivo was observed. The mean microvessel density in the specimen was also ***: PCR amplification proved that the genome of SMMC-endo cells contained a 550bp specific fragment of endostatin gene. Western blot analysis confirmed the secretion of human endostatin gene in the conditioned medium of transfected SMMC-endo cells. The endothelial proliferation assay showed that the conditioned medium of SMMC-endo cells significantly inhibited the proliferation of human umbilical vein endothelial cells by 48 %, significantly higher than that of SMMC-pLncx (10.2 %, P＜0.01). In vivo experiments revealed that only in 3 out of 5 mice tumors were formed and the mean size of flank tumors from SMMC-endo cells was 94.5 % smaller than that from the control SMMC-pLncx cells 22 days after tumor inoculation (P＜0.001).The mean microvessel density in tumor samples from SMMC-endo cells was only 8.6±1.1, much fewer than that of 22.6±4.5 from SMMC-pLncx cells (P＜0.01).CONCLUSION: Human endostatin mediated by retroviral gene transfer can inhibit human liver carcinoma cell SMMC7721 growth in nude mice.

关键词：逆转录病毒介导基因转染抗血管生成蛋白 Endostatin 裸鼠肝癌细胞生长 SMMC7721细胞系抑制作用

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枯草芽孢杆菌BJ3-2 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因speD的克隆与序列分析

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中国酿造 2015年第1期34卷 33-37页

作者：王亚娟韩忠安罗信旭吴拥军贵州大学生命科学学院贵州贵阳550025

S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)是多胺合成过程中的限速酶。根据gen Bank中枯草芽孢杆菌168菌株的S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因(spe D)序列设计同源引物,PCR扩增Bacillus subtilis BJ3-2g DNA,并克隆至p GEM-T载体后测序。序列分析结果表明:*... 详细信息

S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)是多胺合成过程中的限速酶。根据gen Bank中枯草芽孢杆菌168菌株的S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因(spe D)序列设计同源引物,PCR扩增Bacillus subtilis BJ3-2g DNA,并克隆至p GEM-T载体后测序。序列分析结果表明:*** BJ3-2 spe D基因ORF为381 bp,可编码126个氨基酸,分子质量为13.87 ku,基因登录号为KJ561347,Blast比对,SAMDC基因和蛋白序列的同源性都达到90%以上。*** BJ3-2的SAMDC具有丙酮酸依赖型脱羧酶的酶原剪切结构域[GVSGVVIISESHLTIH]和保守结构域[TCG],属于典型的I类B型SAMDC家族。SAMDC在多胺生物合成过程中扮演重要的角色,是多胺合成途径中的关键酶。研究为控制发酵豆豉中生物胺含量奠定了基础。

关键词：枯草芽孢杆菌 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因克隆序列分析

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枯草芽孢杆菌BJ3-2赖氨酸脱羧酶基因yaaO的克隆与序列分析

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中国酿造 2014年第12期33卷 116-120页

作者：唐雪蔡传斌罗信旭周景瑞吴拥军贵州大学生命科学学院贵州贵阳550025

根据gen Bank中的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168菌株假定的赖氨酸脱羧酶基因(LDC)序列设计同源引物,提取枯草芽孢杆菌BJ3-2基因组DNA进行PCR扩增,并克隆至p GEM-T载体后测序。序列分析结果表明:Bacillus subtilis BJ3-2 yaa O基... 详细信息

根据gen Bank中的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168菌株假定的赖氨酸脱羧酶基因(LDC)序列设计同源引物,提取枯草芽孢杆菌BJ3-2基因组DNA进行PCR扩增,并克隆至p GEM-T载体后测序。序列分析结果表明:Bacillus subtilis BJ3-2 yaa O基因开放阅读框(ORF)长为1 443 bp,获得基因登录号为KJ561349,BLAST比对与已报道枯草芽孢杆菌的yaa O基因核苷酸序列及氨基酸序列同源性均高达90%以上,对赖氨酸脱羧酶氨基酸序列构建系统进化树分析,发现Bacillus subtilis BJ3-2的LDC与*** JS亲缘关系最近,SWISS-MODEL预测该蛋白的3D结构与鸟氨酸/赖氨酸/精氨酸脱羧酶蛋白相似性为39.22%,属于典型的III型磷酸吡哆醛(PLP)依赖型鸟氨酸/赖氨酸/精氨酸脱羧酶家族成员。yaa O基因序列分析及氨基酸保守结构域的分析,为有效控制水豆豉产品中尸胺含量过高的研究提供了理论基础。

关键词：枯草芽孢杆菌赖氨酸脱羧酶基因克隆序列分析

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