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高效液相色谱法测定大豆维生素E方法的优化

山西农业科学 2020年第4期48卷 520-526页

作者：赵霞曹改萍王敏岳爱琴张永坡高春艳牛景萍赵晋忠杜维俊山西农业大学农学院山西太谷030801 山西省农业种子总站山西太原030000 山西农业大学文理学院山西太谷030801

为探究一种简单、高效、准确测定大豆维生素E的方法,试验采用高效液相色谱法测定大豆中维生素E组分含量,对其提取条件和测定方法进行优化,建立了维生素E组分含量提取和检测方法。结果表明,大豆维生素E提取的最优条件为:大豆粉0.1000 g,... 详细信息

为探究一种简单、高效、准确测定大豆维生素E的方法,试验采用高效液相色谱法测定大豆中维生素E组分含量,对其提取条件和测定方法进行优化,建立了维生素E组分含量提取和检测方法。结果表明,大豆维生素E提取的最优条件为:大豆粉0.1000 g,加入抗坏血酸0.125 g、70%乙醇提取液3 mL,超声提取20 min;色谱条件为:流动相为甲醇,柱温35℃,检测波长295 nm,流速1.0 mL/min;α-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚的线性范围均良好,R2均大于0.9997,回收率范围为96.9%~101.2%。研究改进的检测方法线性关系、精密度、准确度、稳定性、灵敏度均较好,可为改进大豆中维生素E的检测方法提供参考。

关键词：大豆维生素E 高效液相色谱

PRRSV HeN-3弱毒株不同途径感染仔猪诱导天然免疫因子差异性比较

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中国兽医学报 2021年第8期41卷 1476-1481,1489页

作者：孙杨杨李闻赵士杰苗信永孔令昊崔志莹徐朋丽陈雨张改平陈静张宜娜夏平安河南农业大学动物医学院河南郑州450002 河南农业大学生命科学学院河南郑州450002

为了比较猪繁殖与呼吸综合症病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)HeN-3弱毒株经滴鼻和注射两种途径感染仔猪后诱导天然免疫因子产生的差异,经滴鼻和注射两种途径感染仔猪后,前腔静脉采集凝血与抗凝血,通过... 详细信息

为了比较猪繁殖与呼吸综合症病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)HeN-3弱毒株经滴鼻和注射两种途径感染仔猪后诱导天然免疫因子产生的差异,经滴鼻和注射两种途径感染仔猪后,前腔静脉采集凝血与抗凝血,通过ELISA Kit检测血清中IFN-α蛋白水平;通过荧光定量PCR方法检测血清中病毒拷贝数及外周血淋巴细胞的细胞因子IFN-α、TNF-α、IL-1β的相对表达量并分析其差异;43 d后剖检仔猪,收集仔猪的肝脏、脾脏、肾脏制作病理切片,观察组织损伤情况。结果显示,两种途径感染仔猪的健康状况与对照组基本一致;注射组在3 d,滴鼻组在7 d出现病毒血症,注射组比滴鼻组的病毒血症持续时间长且血清中病毒拷贝数更高;两种途径感染仔猪外周血淋巴细胞中IFN-α的相对表达量先抑制后显著上调,血液中IFN-α蛋白水平在3,11,15 d显著高于对照组;两种途径感染仔猪的天然免疫因子IL-1β、TNF-α相对表达显著上调,但持续时间较短;两种途径感染仔猪的肝脏、脾脏、肾脏等组织器官未有明显病理变化。结果表明,PRRSV HeN-3弱毒株以滴鼻和注射两种方式感染仔猪,都未出现临床症状和病理变化,均能诱导产生一定水平的IFN-α,引起的天然免疫因子变化趋势相似。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒感染途径天然免疫因子病理损伤

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高密度光伏系统接入配电网对继电保护的影响

上海电力学院学报 2014年第1期30卷 6-9页

作者：凌红星赵晶晶孙改平黄丽莎张页沈秀兰高金兰长兴县供电局总工室浙江湖州313100 上海电力学院电气工程学院上海200090 上海市南供电设计有限公司总工室上海200233

高密度光伏系统接入配电网后,改变了配电网络的结构及配电网中短路电流的分布,对配电网继电保护产生了影响.以长兴县配电网线路为例,利用DIgGSILENT PowerFactory软件进行仿真,研究了光伏电源接入配电网对自动重合闸、保护范围和灵敏度... 详细信息

高密度光伏系统接入配电网后,改变了配电网络的结构及配电网中短路电流的分布,对配电网继电保护产生了影响.以长兴县配电网线路为例,利用DIgGSILENT PowerFactory软件进行仿真,研究了光伏电源接入配电网对自动重合闸、保护范围和灵敏度3个方面的影响,并提出了相应的解决方案.

关键词：光伏电源配电网继电保护重合闸保护灵敏度

Ⅰ型与Ⅱ型IBDV前体多聚蛋白B细胞抗原表位的预测与比较

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中国家禽 2009年第21期31卷 22-24,28页

作者：肖治军张改平乔松林赵东李学伍邓瑞广杨艳艳邢广旭郅玉宝杨继飞柴书军河南省农业科学院河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002

用生物信息学方法比较了GenBank中9株Ⅰ型IBDV与2株Ⅱ型IBDV基因片段A前体多聚蛋白的推导氨基酸(aa)序列,预测并分析了上述两型IBDV毒株前体多聚蛋白的线性B细胞抗原表位。结果表明,两型IBDV毒株的前体多聚蛋白有75个aa残基的差异,其上... 详细信息

用生物信息学方法比较了GenBank中9株Ⅰ型IBDV与2株Ⅱ型IBDV基因片段A前体多聚蛋白的推导氨基酸(aa)序列,预测并分析了上述两型IBDV毒株前体多聚蛋白的线性B细胞抗原表位。结果表明,两型IBDV毒株的前体多聚蛋白有75个aa残基的差异,其上大多数预测B细胞抗原表位的位置及其指数值均无明显差异;但两型IBDV在第3～10位中的aa残基差异影响了该序列肽的预测指数和结构,以及与Ⅰ型IBDV多抗的反应性。

关键词： IBDV 氨基酸序列 B细胞抗原表位比较分析

猪瘟病毒E^(rns)/E2融合蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及评价

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河南农业科学 2021年第4期50卷 154-161页

作者：王丽冯丽丽张雨杭孙亚宁杨继飞赵东王瑞宁李学伍郭军庆张改平河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002 河南省农业科学院农业经济与信息研究所河南郑州450002 河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 河南百奥生物工程有限公司河南郑州450002 河南牧业经济学院动物医药学院河南郑州450046

为了建立猪瘟病毒(CSFV)血清抗体检测方法,将CSFV E^(rns)和E2蛋白主要抗原区串联表达的编码核酸序列克隆至原核表达载体pET-32a中,转化大肠杆菌Rosetta TM2(DE3)构建重组表达菌。SDS-PAGE、Western blot鉴定及蛋白质可溶性分析结果显示... 详细信息

为了建立猪瘟病毒(CSFV)血清抗体检测方法,将CSFV E^(rns)和E2蛋白主要抗原区串联表达的编码核酸序列克隆至原核表达载体pET-32a中,转化大肠杆菌Rosetta TM2(DE3)构建重组表达菌。SDS-PAGE、Western blot鉴定及蛋白质可溶性分析结果显示,表达的E^(rns)/E2蛋白分子质量约为43 ku,能够被CSFV阳性血清识别,主要以包涵体形式存在。通过快速稀释法复性了纯化的包涵体蛋白,复性效率大于40%。以纯化复性的E^(rns)/E2蛋白为包被抗原,经优化各反应条件,建立了间接ELISA检测CSFV抗体方法(E^(rns)/E2-ELISA)。特异性、敏感性和重复性试验结果表明,建立的检测方法特异性强、敏感性高、重复性好。利用建立的E^(rns)/E2-ELISA检测方法对121份随机采取的临床血清样本进行检测,与IDEXX CSFV抗体检测试剂盒相比,E^(rns)/E2-ELISA检测方法符合率为86.78%,敏感性为92.11%,特异性为77.78%。利用建立的E^(rns)/E2-ELISA检测方法和IDEXX CSFV抗体检测试剂盒同时评价CSFV C株疫苗免疫的4只30日龄健康仔猪抗体消长规律,可分别于免疫后7 d和14 d开始检出阳性,35~42 d抗体水平达到高峰,49~56 d抗体趋于稳定。

关键词：猪瘟病毒 E^(rns)/E2 融合蛋白串联表达包涵体复性间接ELISA

二氟沙星单克隆抗体的研制及其免疫学特性的鉴定

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中国农学通报 2008年第10期24卷 51-56页

作者：李彬彬邓瑞广侯玉泽张改平王自良赵东刘庆堂柴书军河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002 河南科技大学食品与工程学院河南洛阳471000

采用改进的碳二亚胺法,将半抗原二氟沙星(DIF)与载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(O-VA)偶联,制备得到二氟沙星全抗原DIF-BSA和DIF-OVA。采用紫外(UV),凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定;用BSA-DIF免疫BALB/C小鼠,间接ELISA和阻断ELISA选择... 详细信息

采用改进的碳二亚胺法,将半抗原二氟沙星(DIF)与载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(O-VA)偶联,制备得到二氟沙星全抗原DIF-BSA和DIF-OVA。采用紫外(UV),凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定;用BSA-DIF免疫BALB/C小鼠,间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术制备二氟沙星单克隆抗体(DIF mAb),并对其效价、亲和力和特异性等进行鉴定。结果表明,BSA与DIF偶联成功,分子结合比为1:4.7,筛选出1H10、2F12、4D8共3株敏感特异的杂交瘤细胞,间接ELISA效价细胞培养上清分别为1:5.12×102、1:3.2×101、1:2.56×102,腹水效价分别为1:2.56×105、1:1.28×105、1:6.4×104。同种亚型分别为IgG1、IgG1、IgG2a,亲和常数(Ka)分别为2.94×1010L/mol、1.72×1010L/mol和1.35×1010L/mol。亲和力最高的1H10对DIF的IC50为2.2ng/ml,单抗与其他氟喹诺酮类药物和磺胺类药物无交叉反应。通过试验获得高效价、敏感、特异的mAb,适用于动物性食品中DIF的残留检测的免疫学试验。

关键词：二氟沙星人工免疫原单克隆抗体免疫学特性

高密度多接入点屋顶光伏系统对配电网电压的影响

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上海电力学院学报 2014年第2期30卷 106-110页

作者：凌红星赵晶晶孙改平黄丽莎张页沈秀兰高金兰长兴县供电局浙江湖州313100 上海电力学院上海200090 上海市南供电设计有限公司上海200233

以浙江省长兴县配电网为例,分析了分布式光伏发电接入位置和接入容量对配电网节点电压分布的影响,并研究了长兴县配电网所能接收的分布式光伏发电接入最大注入功率,提出了分布式光伏发电在长兴县配电网中的安装位置和注入容量.

关键词：光伏发电分布式发电配电网

禽流感病毒H9N2亚型HA蛋白在水稻胚乳中的稳定、高效表达及活性鉴定

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华北农学报 2020年第4期35卷 230-238页

作者：赵翔玥张二芹许倩茹马凡舒王雅楠牛香香李雪洋张申立张同旭邓瑞广张以芳张改平云南农业大学云南昆明650201 河南农业大学河南郑州450046 河南省农业科学院河南省动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点开放实验室河南郑州450002 西北农林科技大学陕西杨凌712100 吉林大学吉林长春130012 河南南阳市第四职业中等专业学校河南南阳473000

为了在体外获得表达量高、储存容易、成本低且免疫活性高的H9N2亚型HA蛋白,利用水稻胚乳表达系统表达HA蛋白。首先,将HA基因根据水稻偏好密码子进行优化,合成到pUC57载体上,通过双酶切、连接将HA基因先后构建到中间载体pMP3和植物表达载... 详细信息

为了在体外获得表达量高、储存容易、成本低且免疫活性高的H9N2亚型HA蛋白,利用水稻胚乳表达系统表达HA蛋白。首先,将HA基因根据水稻偏好密码子进行优化,合成到pUC57载体上,通过双酶切、连接将HA基因先后构建到中间载体pMP3和植物表达载体pCAMBIA1300上;再通过电极法将pCAMBIA1300-HA导入到根癌农杆菌EHA105中;然后用农杆菌侵染TP309水稻愈伤组织;最后经潮霉素筛选、分化、生根、移栽至田间种植。利用CTAB法提取叶片基因组DNA,PCR鉴定T0阳性植株;利用Dot Blot和Western Blot检测HA蛋白在水稻胚乳中的表达;提取阳性的T1叶片DNA,通过荧光定量PCR方法筛选纯合植株;利用温汤杀雄剪颖授粉法,将含有HA蛋白的TP309与低谷蛋白水稻杂交;利用Western Blot检测杂交后的T3植株蛋白表达量;利用双抗夹心ELISA方法比较水稻源和昆虫表达HA蛋白的活性。结果显示,成功构建了中间载体pMP3-HA和植物表达载体pCAMBIA1300-HA,且pCAMBIA1300-HA成功导入到根癌农杆菌EHA105中;PCR检测到有66株植株的HA基因成功整合到水稻基因组;Dot Blot和Western Blot检测结果表明,HA蛋白在水稻胚乳中成功表达;利用荧光定量PCR方法,107株T1中筛选到31株纯合植株;Western Blot检测结果表明,杂交后的HA蛋白表达量大幅度提高;双抗夹心ELISA结果证实,水稻胚乳表达的HA蛋白的活性高于杆状病毒-昆虫细胞。

关键词：禽流感病毒 H9N2 HA蛋白纯合子水稻胚乳活性鉴定