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基于生物信息学探讨血竭散对克罗恩病大鼠结肠组织Notch1、Nrf2、GPX4和PTGS2表达影响

辽宁中医药大学学报 2022年第7期24卷 38-42,F0003页

作者：洪寅雯吴本升徐治中杜骏高莹文科孙薛亮苏州市中西医结合医院江苏苏州215000 南京中医药大学附属苏州市中医医院江苏苏州215000

目的基于生物信息学探析血竭散缓解克罗恩病(Crohn's disease,CD)的作用靶点和机制。方法运用BATMAN-TCM数据库挖掘血竭散治疗CD的潜在靶点和分子机制,并采用2,4,6-三硝基苯磺酸诱导建立CD大鼠模型行体内实验验证。造模后,将30只大鼠随... 详细信息

目的基于生物信息学探析血竭散缓解克罗恩病(Crohn's disease,CD)的作用靶点和机制。方法运用BATMAN-TCM数据库挖掘血竭散治疗CD的潜在靶点和分子机制,并采用2,4,6-三硝基苯磺酸诱导建立CD大鼠模型行体内实验验证。造模后,将30只大鼠随机分为空白组,模型组,血竭散低、高剂量组和N-[N-(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酸基]-S-苯甘氨酸叔丁酯(N-[N-(3,5-difluorophenacetyl)-L-alanyl]-S-phenylglycine t-butyl ester,DAPT)组,每组各6只。苏木精-伊红染色法观察大鼠结肠组织病理学改变,酶联免疫吸附法检测结肠组织中炎症细胞因子表达,免疫组化法检测4-羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)表达,实时荧光定量PCR法检测Notch1和核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测Notch1细胞内结构域(Notch1 intracellular domain,NICD1)、Nrf2、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)和前列腺素内过氧化物合酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)蛋白表达。结果生物信息学分析结果显示,Notch1和PTGS2是血竭散潜在靶点;调控氧化还原酶活性和脂代谢是血竭散潜在作用机制。血竭散组和DAPT组干预后大鼠结肠组织病理学评分显著低于模型组(P<0.05)。与模型组相比,血竭散组和DAPT组能显著降低大鼠结肠组织中白介素6(interleukin-6,IL-6)、IL-17、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、4-HNE表达(P<0.05);抑制Notch1 mRNA表达,上调Nrf2 mRNA表达(P<0.05);减少NICD1和PTGS2蛋白表达,增加Nrf2和GPX4蛋白表达(P<0.05)。结论血竭散可能通过抑制Notch1信号,增强Nrf2/GPX4活性,抑制肠黏膜细胞脂质过氧化,减少促炎细胞因子分泌,缓解CD肠炎。

关键词：血竭散克罗恩病脂质过氧化 Notch1 核因子E2相关因子2

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基于mTOR/Beclin1通路探讨血竭散对克罗恩病大鼠结肠组织自噬和炎症小体的影响

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安徽中医药大学学报 2022年第1期41卷 65-72页

作者：洪寅雯文科吴本升徐治中杜骏高莹孙薛亮苏州市中西医结合医院江苏苏州215000 南京中医药大学附属苏州市中医医院江苏苏州215000

目的研究血竭散对克罗恩病大鼠结肠组织自噬和炎症小体的影响,探讨其治疗克罗恩病的作用机制。方法采用2,4,6-三硝基苯磺酸诱导复制克罗恩病大鼠模型。模型复制后,将36只大鼠随机分为空白组,模型组,血竭散低、中、高剂量组和柳氮磺砒啶(... 详细信息

目的研究血竭散对克罗恩病大鼠结肠组织自噬和炎症小体的影响,探讨其治疗克罗恩病的作用机制。方法采用2,4,6-三硝基苯磺酸诱导复制克罗恩病大鼠模型。模型复制后,将36只大鼠随机分为空白组,模型组,血竭散低、中、高剂量组和柳氮磺砒啶(sulfasalazine,SASP)组,每组6只。苏木精-伊红染色法观察大鼠结肠组织病理学改变,酶联免疫吸附法检测结肠组织中炎症细胞因子表达水平,实时荧光定量PCR法检测Beclin1、NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NOD-like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3)和黑素瘤缺乏因子2(absent in melanoma 2,AIM2)mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、p-mTOR、Beclin1、NLRP3、AIM2、含Caspase募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a Caspase recruitment domain,ASC)和Caspase-1蛋白表达水平,免疫荧光法检测微管相关蛋白轻链3β(microtubule-associated protein light chain 3 beta,LC3B)表达水平。结果与模型组比较,血竭散和SASP干预后大鼠结肠组织病理学评分,白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)表达水平显著降低(P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠结肠组织中p-mTOR表达水平显著降低,Beclin1、LC3B、NLRP3、AIM2、ASC和Caspase-1表达水平显著增加(P<0.05)。血竭散和SASP干预能上调p-mTOR表达水平,下调Beclin1、LC3B、NLRP3、AIM2、ASC和Caspase-1表达水平(P<0.05)。结论血竭散可能通过调控mTOR/Beclin1信号通路抑制肠细胞自噬,减少炎症小体活化,改善克罗恩病大鼠结肠炎。

关键词：血竭散克罗恩病自噬炎症小体

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