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Mash1 efficiently reprograms rat astrocytes into neurons

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Neural Regeneration Research 2014年第1期9卷 25-32页

作者： daofang ding Leqin Xu Hao Xu Xiaofeng Li Qianqian Liang Yongjian Zhao Yongjun Wang Institute of Spine Shanghai University of Traditional Chinese Medicine Longhua Hospital Shanghai University of Traditional Chinese Medicine

To date, it remains poorly understood whether astrocytes can be easily reprogrammed into neurons. Mashl and Brn2 have been previously shown to cooperate to reprogram fibroblasts into neurons. In this study, we examined astrocytes from 2-month-old Sprague-Dawley rats, and found that Brn2 was expressed, but Mashl was not detectable. Thus, we hypothesized that Mashl alone could be used to reprogram astrocytes into neurons. We transfected a recombinant MSCV-MASH1 plasmid into astrocytes for 72 hours, and saw that all cells expressed Mashl. One week later, we observed the changes in morphology of astrocytes, which showed typical neuro- nal characteristics. Moreover, β-tubulin expression levels were significantly higher in astrocytes expressing Mashl than in control cells. These results indicate that Mashl alone can reprogram astrocytes into neurons.

关键词： nerve regeneration Mash-l Brn2 β-tubulin reprogram plasmid retrovirus astrocytes neurons the National Basic Research Program of China (973 Program) neural regeneration

Abnormal mechanical loading induces cartilage degeneration by accelerating meniscus hypertrophy and mineralization after ACL injury in vivo

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Abnormal mechanical loading induces cartilage degeneration b...

丹参酮ⅡA对软骨细胞Ⅱ型胶原及Wnt/β-catenin信号通路的影响

第十一届全国生物力学学术会议暨第十三届全国生物流变学学...

作者： Guoqing Du Xiaochun Wei Hongsheng Zhan daofang ding Shaowei Wang Anthony M.Reginato Braden C.Fleming Bahar Bilgen Lei Wei Department of Orthopaedics The Warren Alpert Medical School of Brown University/Rhode Island Hospital Department of Orthopaedics Shanghai University of Traditional Chinese Medicine Department of Orthopaedics The Second Hospital of Shanxi Medical University Division of Rheumatology the Warren Alpert Medical School of Brown University/Rhode Island Hospital

Objective:To determine if meniscus hypertrophy and mineralization correlate with cartilage degeneration after ACL ***:In vivo guinea pig study:Nine 3-month-old male Hartley guinea pigs received ACL transection(ACLT)on the right knee,while the contralateral ACL-intact knee in the same animal served as a sham *** animals were sacrificed 10 weeks after surgery(5.5 month-old).Calcein was injected at

关键词：

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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中国中医骨伤科杂志 2018年第9期26卷 1-4页

作者：宋奕朱寅丁道芳苏州市中西医结合医院江苏苏州215000 上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心上海市中医药研究院骨伤科研究所

目的:探讨不同浓度丹参酮ⅡA对软骨细胞Ⅱ型胶原及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:提取新生SD大鼠原代软骨细胞,并通过Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光进行鉴定,取P1代细胞进行实验,共设5组,其中1组设为空白对照组,另外4组分别用6.25μmol/L,... 详细信息

目的:探讨不同浓度丹参酮ⅡA对软骨细胞Ⅱ型胶原及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:提取新生SD大鼠原代软骨细胞,并通过Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光进行鉴定,取P1代细胞进行实验,共设5组,其中1组设为空白对照组,另外4组分别用6.25μmol/L,12.5μmol/L,25μmol/L及50μmol/L浓度丹参酮ⅡA对其进行干预,24h后通过蛋白印迹分析法(Western Blot)检测软骨细胞Ⅱ型胶原及β-catenin蛋白的表达情况。结果:随着丹参酮ⅡA浓度的增加,Ⅱ型胶原蛋白表达增加,12.5μmol/L,25μmol/L及50μmol/L丹参酮ⅡA组Ⅱ型胶原蛋白量均较对照组增高(P<0.05),且Ⅱ型胶原蛋白量与丹参酮ⅡA浓度呈正相关(r=0.949,P<0.001),各丹参酮ⅡA组β-catenin蛋白量均较对照组降低(P<0.05),且β-catenin蛋白量与丹参酮ⅡA浓度呈负相关(r=-0.949,P<0.001)。结论:丹参酮ⅡA可抑制Wnt/β-catenin信号通路,促进软骨细胞Ⅱ型胶原表达,延缓软骨细胞退变。

关键词：丹参酮ⅡA 软骨细胞 Ⅱ型胶原 Wnt/β-catenin信号通路

凝血酶促大鼠软骨细胞生长、形态转变和抑制胶原合成的作用

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中国中医骨伤科杂志 2022年第11期30卷 1-6页

作者：朱志恒吴希晨丁佳滢王学宗曹月龙郑昱新丁道芳上海中医药大学康复医学院上海201203 上海中医药大学康复医学研究所上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心

目的:观察凝血酶对大鼠软骨细胞生长、形态和胶原合成的影响。方法:提取新生SD大鼠软骨细胞,取P1代细胞进行实验,设对照组和凝血酶组,凝血酶组加入20 U/mL凝血酶进行干预。倒置显微镜下观察两组细胞形态,并使用Edu试剂盒检测细胞增殖;... 详细信息

目的:观察凝血酶对大鼠软骨细胞生长、形态和胶原合成的影响。方法:提取新生SD大鼠软骨细胞,取P1代细胞进行实验,设对照组和凝血酶组,凝血酶组加入20 U/mL凝血酶进行干预。倒置显微镜下观察两组细胞形态,并使用Edu试剂盒检测细胞增殖;实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测软骨细胞外基质成分Col2α1、Acan、Eln、Comp,炎症因子IL-6、TNF-α,炎症趋化因子Ccl2、Ccl7、Cxcl6、Cxcl16和胶原合成相关酶P3H1、Colgalt1、Lox的表达;免疫细胞化学检测Lox的表达;免疫荧光检测Col2α1的表达;Western Blot法检测分解代谢基因MMP9、MMP13、COX2的表达。结果:与对照组相比,凝血酶组的软骨细胞多为长梭形或不规则形状,且增殖明显;凝血酶组Col2α1、Acan、Eln、Comp、P3H1、Colgalt1、Lox的mRNA表达下调(P<0.05),IL-6、TNF-α、Ccl2、Ccl7、Cxcl6、Cxcl16 mRNA表达上调(P<0.05),Lox和Col2α1表达下调(P<0.05),MMP9、MMP13、COX2蛋白表达上调(P<0.05)。结论:凝血酶能够促进大鼠软骨细胞增殖和纤维样形态转变,提高炎症因子和分解代谢基因的表达,降低胶原合成相关酶表达而抑制胶原合成。

关键词：凝血酶软骨细胞胶原合成增殖形态

过表达Mash-1-1基因促进小鼠胚胎干细胞向神经细胞分化的研究

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中国修复重建外科杂志 2015年第12期29卷 1553-1559页

作者：徐乐勤丁道芳李晓锋施杞王拥军周重建福建中医药大学附属厦门中医院科教科福建厦门361009 上海中医药大学脊柱病研究所上海中医药大学附属曙光医院骨伤科研究所

目的探讨过表达Mash-1基因对小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESC)向神经细胞分化的影响。方法采用病毒感染技术将MSCV-Mash-1基因、MSCV空载体感染至小鼠ESC(CE3细胞)(MSCV-Mash-1-CE3组、MSCV-CE3组),RT-PCR鉴定细胞Mash-1基因的表达情况;然后采用悬滴培养法使其形成拟胚体,再经神经培养液贴壁诱导分化。培养7、21 d于倒置相差显微镜下观察细胞形态改变;免疫荧光染色检测细胞贴壁后其神经干细胞和神经元标记蛋白巢蛋白(nestin)和β-微管蛋白Ⅲ(β-tubulinⅢ)的阳性率;实时荧光定量PCR检测诱导培养0、1、7、14、21 d时,细胞甲胎蛋白(α-fetal protein,AFP)(内胚层标记基因)、Brachyury(中胚层标记基因)、FGF-5(外胚层标记基因)、Oct3/4(ESC标记基因)、nestin(神经干细胞标记基因)和β-tubulinⅢ(神经元标记基因)表达情况。以正常CE3细胞作为对照(CE3组)。结果与MSCV-CE3组和CE3组比较,MSCVMash-1-CE3组细胞Mash-1基因表达明显升高。经神经培养液诱导培养7、21 d后,MSCV-Mash-1-CE3组可见许多细胞折光性增强,长出细长轴突,出现单极、双极或多极形态,呈神经干细胞和神经元细胞形态;MSCV-CE3组和CE3组仅能观察到少数细胞长出细长轴突。免疫荧光染色检测示MSCV-Mash-1-CE3组诱导分化7 d nestin阳性率和21 dβ-tubulinⅢ阳性率显著高于MSCV-CE3组及CE3组(P0.05)。3组间各时间点AFP和Oct3/4表达比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论过表达Mash-1基因能促进小鼠ESC向神经细胞方向分化。

关键词：胚胎干细胞 Mash-1 神经分化小鼠

基于DigiGait成像系统的帕金森病模型大鼠行为学分析

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康复学报 2022年第4期32卷 320-325页

作者：刘欣昊马书杰丁道芳罗开亮马欣然姜汶伶胡军上海中医药大学康复医学院上海201203 上海市第二康复医院上海200441

目的:探讨DigiGait成像系统评估帕金森病(PD)模型大鼠步态变化的可行性。方法:选择清洁级雄性SD大鼠24只,按照随机数字表法分为正常组、假手术组及模型组,每组8只。模型组采用单侧2点法脑注射6-羟基多巴胺(6-OHDA)制备PD大鼠模型,假手... 详细信息

目的:探讨DigiGait成像系统评估帕金森病(PD)模型大鼠步态变化的可行性。方法:选择清洁级雄性SD大鼠24只,按照随机数字表法分为正常组、假手术组及模型组,每组8只。模型组采用单侧2点法脑注射6-羟基多巴胺(6-OHDA)制备PD大鼠模型,假手术组运用相同方法脑注射0.2%抗坏血酸溶液,正常组不进行任何手术处理。采用DigiGait成像系统分析3组大鼠跑带运动时间子成分(摆动时长、制动时长、触地时长、站立系数)、空间子成分(步幅频率、步幅长度、触地宽度、步态对称性、脚爪重叠距离、脚爪放置定位)及姿势子成分(脚爪角度、步偏角、脚爪面积)等3个维度的步态变化。结果:①时间子成分:与正常组比较,模型组左前肢、左后肢及右前肢在运动过程中的摆动时长、制动时长及触地时长明显延长(P0.05)。③姿势子成分:与正常组和假手术组比较,模型组在运动过程中左前肢、左后肢及右后肢与跑带接触的脚爪面积较小(P0.05)。结论:DigiGait成像系统可以客观评价PD模型大鼠步行功能、平衡功能及协调功能,在PD相关基础研究中具有广泛应用的前景。

关键词：帕金森病步态分析行为学 DigiGait成像系统

MAPK-ERK1/2信号通路调控成骨性基因表达和细胞增殖

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南方医科大学学报 2013年第10期33卷 1432-1436页

作者：丁道芳李玲慧宋奕杜国庆卫晓恩曹月龙上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心上海市中医药研究院骨伤科研究所上海201203

目的观察在不同浓度大鼠血清作用下,激活或抑制MAPK-ERK1/2信号通路对大鼠成骨细胞的成骨性基因表达和增殖的影响。方法原代培养大鼠成骨细胞,进行形态和碱性磷酸酶初步鉴定后,分别用1%和5%的大鼠血清进行培养24 h,WB检测MAPK-ERK1/2信... 详细信息

目的观察在不同浓度大鼠血清作用下,激活或抑制MAPK-ERK1/2信号通路对大鼠成骨细胞的成骨性基因表达和增殖的影响。方法原代培养大鼠成骨细胞,进行形态和碱性磷酸酶初步鉴定后,分别用1%和5%的大鼠血清进行培养24 h,WB检测MAPK-ERK1/2信号通路蛋白p-ERK1/2和ERK1/2表达,同时检测成骨性基因(Runx2、Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶)和增殖蛋白PCNA的表达;MAPK-ERK1/2信号通路阻断剂PD0325901抑制P-ERK1/2的表达后观察对Runx2、Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶和增殖蛋白PCNA的表达。结果 5%大鼠血清激活p-ERK1/2水平明显高于1%大鼠血清(P<0.05),在MAPK-ERK1/2高水平激活状态下,成骨性基因如Runx2、Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶的表达水平出现显著的增加及促进PCNA的表达;当抑制MAPK-ERK1/2信号通路时,成骨性基因Runx2、Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶的表达水平也随之下调,且PCNA表达也受到抑制。结论激活MAPKERK1/2通路促进成骨基因表达和成骨细胞增殖,抑制此通路将抑制成骨性基因表达和细胞增殖,此通路可能作为治疗骨质疏松症的药物靶点。

关键词：原代成骨细胞成骨性基因表达大鼠血清信号通路

真核表达人Wnt7b基因建立软骨细胞退变模型

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南方医科大学学报 2015年第3期35卷 370-374页

作者：王小军张浩郑杰庞坚曹月龙詹红生丁道芳浙江中医药大学附属湖州市中医院浙江湖州313000 上海吉凯基因化学技术有限公司上海201203 上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心上海201203 上海市中医药研究院骨伤科研究所上海201203

目的在真核细胞中表达人Wnt7b基因并且观察对大鼠原代软骨细胞的退变作用。方法取出生24 h SD大鼠关节处软骨,Ⅱ型胶原酶多次消化后获得原代软骨细胞,取P1代细胞进行实验。扩增人Wnt7b基因及克隆至PCDH-GFP上,转染PCDH-GFP和PCDH-Wnt7b... 详细信息

目的在真核细胞中表达人Wnt7b基因并且观察对大鼠原代软骨细胞的退变作用。方法取出生24 h SD大鼠关节处软骨,Ⅱ型胶原酶多次消化后获得原代软骨细胞,取P1代细胞进行实验。扩增人Wnt7b基因及克隆至PCDH-GFP上,转染PCDH-GFP和PCDH-Wnt7b至293ft细胞中,48 h后收集细胞上清及转染细胞,Western blot鉴定Wnt7b在293ft细胞中的表达。收集的上清分别稀释10倍和50倍培养大鼠软骨细胞,24 h后观察细胞形态并收集细胞蛋白和抽提RNA,Western blot和定量PCR检测软骨退变指标MMP13、MMP3、Ⅱ型胶原、A-can、ADAMTS5、ColⅩ和SOX9的表达。结果成功克隆人Wnt7b基因至PCDH-GFP载体上且在293ft细胞中得到有效表达。含Wnt7b培养基干预软骨细胞24 h后,软骨细胞形态由原来的多角形变成长梭形,Wnt7b处理组软骨细胞MMP13和MMP3表达显著上调,Ⅱ型胶原的表达下调。PCR结果表明A-can和Sox9表达下降,ColⅩ和ADAMTS5表达增强。结论有效在真核细胞中表达Wnt7b基因并且促进大鼠软骨细胞退变,建立软骨细胞退变的体外模型。

关键词： Wnt7b基因 293ft细胞软骨细胞转染细胞退变

基于Wnt信号通路的骨质疏松症分子靶向治疗研究进展

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中华内分泌代谢杂志 2014年第8期30卷 712-715页

作者：李玲慧詹红生丁道芳陈博杜国庆宋奕中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心上海201203

Wnt信号通路在骨代谢中发挥了重要作用，激活该通路可以促进骨形成，反之则导致骨量减少。尽管调控Wnt信号通路可以带来诸多的治疗潜力，但由于存在引发肿瘤的风险，仍需开展更深层次的研究以寻找安全有效的治疗手段。本文综述了Wnt通... 详细信息

Wnt信号通路在骨代谢中发挥了重要作用，激活该通路可以促进骨形成，反之则导致骨量减少。尽管调控Wnt信号通路可以带来诸多的治疗潜力，但由于存在引发肿瘤的风险，仍需开展更深层次的研究以寻找安全有效的治疗手段。本文综述了Wnt通路在骨代谢中的作用机制及相关的治疗骨质疏松症的分子靶点。

关键词： Wnt信号通路骨质疏松症成骨细胞