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CpG免疫刺激序列增强日本血吸虫TPIdNA疫苗免疫保护作用的研究

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中国血吸虫病防治杂志 2004年第2期16卷 109-114页

作者：赵松朱荫昌 d.a.harn 司进殷旭仁何伟梁幼生徐明许永良江苏省血吸虫病防治研究所无锡214064 美国哈佛大学公共卫生学院

目的研究CpG免疫刺激序列对日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶dNA疫苗诱导BALB/c小鼠免疫保护的增强作用.方法设计合成一对含6个免疫刺激序列的寡脱氧核苷酸,克隆到真核表达载体pcdNA3.1第5314碱基Ssp I酶切位点,改建为pcdNA3.1-CpG.... 详细信息

目的研究CpG免疫刺激序列对日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶dNA疫苗诱导BALB/c小鼠免疫保护的增强作用.方法设计合成一对含6个免疫刺激序列的寡脱氧核苷酸,克隆到真核表达载体pcdNA3.1第5314碱基Ssp I酶切位点,改建为pcdNA3.1-CpG.再将SjCTPIdNA片段克隆到pcdNA3.1-CpG的多克隆位点区,构建为pcdNA3.1-TPI/CpG.56只BALB/c雌性小鼠随机分为4组,各组小鼠分别肌肉注射pcdNA3.1、pcdNA3.1-TPI、pcdNA3.1-CpG、pcd-NA3.1-CpG/TPI质粒dNA,每鼠100 μg.每隔2周加强免疫1次,共3次.末次免疫后4周每鼠经腹部皮肤攻击感染(45士1)条日本血吸虫尾蚴,45 d后剖杀,计数成虫及肝脏虫卵数.首次免疫前2d及攻击感染前2 d经尾静脉采血检测抗体水平、抗体亚类IgG1、IgG2a.末次免疫后2周制备脾细胞,检测细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ的水平.结果 pcdNA3.1-TPI组和pcdNA3.1-TPI/CpG组小鼠血清都检测到特异性IgG抗体,抗体亚类IgG2./IgG1的比值分别为1.76和2.67,而其他两组则未检测到特异性IgG抗体;pcdNA3.1-TPI组和pcdNA3.1-TPI/CpG组小鼠的IL-2、IFN-γ较对照组均有不同程度的升高,IL-4无明显差异;pcdNA3.1-TPI组和pcdNA3.1-TPI/CpG组分别获得了25.98%和34.54%的减虫率,后者高于前者,并分别获得了27.68%和29.50%的减卵率.结论 CpG免疫刺激序列似能增强dNA疫苗在小鼠体内诱导的Th1型免疫应答,并提高dNA疫苗的免疫保护作用.

关键词：日本血吸虫 CpG免疫刺激序列磷酸丙糖异构酶 dNA疫苗

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日本血吸虫多价dNA疫苗的构建及鉴定

中国血吸虫病防治杂志 2005年第3期17卷 166-171,F003页

作者：王晓婷朱荫昌管晓虹司进赵松 d.a.harn 殷旭仁何伟梁幼生徐明江苏省血吸虫病防治研究所江苏省寄生虫分子生物学重点实验室江苏省寄生虫病学重点学科无锡214064 南京医科大学分子生物学研究所美国哈佛大学公共卫生学院

目的构建含日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶(TPI)基因和日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30H链CdR3区6倍重复表位基因(CdR3)6的多价dNA疫苗,并观察该融合基因在真核细胞中表达。方法设计合成连接肽(Gly4Ser)3基因的两条互补单链,退... 详细信息

目的构建含日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶(TPI)基因和日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30H链CdR3区6倍重复表位基因(CdR3)6的多价dNA疫苗,并观察该融合基因在真核细胞中表达。方法设计合成连接肽(Gly4Ser)3基因的两条互补单链,退火成双链后克隆到真核表达载体pcdNA3.1,改建为pcdNA3.1-linker。分别将SjCTPIdNA片段及NP30的(CdR3)6dNA片段克隆到连接肽的上游或下游,构建pcdNA3.1-TPI-linker-(CdR3)6和pcd-NA3.1-(CdR3)6-linker-TPI2种多价疫苗。设计引物分别扩增TPI-linker-(CdR3)6和(CdR3)6-linker-TPI,再分别插入真核表达载体pEGFP-N1多克隆位点,绿色荧光蛋白基因的上游,重组质粒用脂质体导入真核细胞COS-7,观察插入基因在真核细胞的表达。结果经双酶切及测序鉴定证实多价疫苗pcdNA3.1-TPI-linker-(CdR3)6和pcdNA3.1-(CdR3)6-linker-TPI构建成功;构建的pEGFP-N1-TPI-linker-(CdR3)6和pEGFP-N1-(CdR3)6-linker-TPI在导入COS-7细胞后能成功表达。结论日本血吸虫TPI和NP30-(CdR3)6的多价dNA疫苗构建成功,且该融合基因能在真核细胞中表达。

关键词：日本血吸虫磷酸丙糖异构酶 NP30-(CdR3) 多价dNA疫苗

日本血吸虫(中国大陆株)磷酸丙糖异构酶dNA疫苗的研制及其保护性免疫的研究

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中国血吸虫病防治杂志 2000年第6期12卷 324-329页

作者：司进朱荫昌 d.a.harn 余传信何伟华万全殷旭仁梁幼生徐明江苏省血吸虫病防治研究所无锡214064 美国哈佛大学公共卫生学院

目的　研究日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶 dNA疫苗诱导 C5 7BL /6小鼠的保护性免疫作用。方法　分别以 p U C19- Sj CTPI和 pc dNA1.1- IL - 12为模板设计引物 ,将 PCR扩增到的Sj CTPI基因以及 IL - 12的亚单位 P35 和 P40 基因... 详细信息

目的　研究日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶 dNA疫苗诱导 C5 7BL /6小鼠的保护性免疫作用。方法　分别以 p U C19- Sj CTPI和 pc dNA1.1- IL - 12为模板设计引物 ,将 PCR扩增到的Sj CTPI基因以及 IL - 12的亚单位 P35 和 P40 基因克隆到真核表达载体 pc dNA .3.1中。大量制备 pc d-NA3.1- Sj CTPI和 pc dNA 3.1- P35 、pc dNA3.1- P40 的质粒 dNA。把 45只 5～ 6周龄 C5 7BL /6小鼠分成 3组 ,对照组 (pc dNA组 )肌肉注射 10 0μg的 pc dNA3.1;实验组 (TPI组 )肌肉注射 10 0μg的pc dNA3. 1- Sj CTPI;加强组 (TPI+ IL - 12组 )肌肉注射 10 0μg的 pc dNA 3.1- Sj CTPI及 10 0μg的pc dNA3.1- P35 和 pc dNA3.1- P40 的混合物 ,分别于第 1、5周各免疫 1次 ,第 9周每鼠用 45条尾蚴攻击感染 ,攻击后 45 d剖杀小鼠 ,计数成虫、肝内虫卵。采用免疫组化法检测 Sj CTPI在局部肌组织内的表达 ,用脾细胞培养法检测特异性抗原刺激后的 IL - 2、IL - 4、IL - 10、IFN-γ在攻击前后的水平。分别于 2次免疫前和攻击前及攻击后 2周经尾静脉采血 ,分别采用 EL ISA和 Western- blot检测血清中抗 TPI抗体。结果　 Sj CTPI可在 C5 7BL /6小鼠骨骼肌细胞膜、细胞浆中得到表达。细胞因子 IL -2的水平在攻击前、后。

关键词：日本血吸虫磷酸丙糖异构酶 dNA疫苗保护性免疫

日本血吸虫多价dNA疫苗免疫保护作用的研究

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中国血吸虫病防治杂志 2006年第1期18卷 1-5页

作者：王晓婷朱荫昌管晓虹 d.a.harn 司进赵松徐明殷旭仁梁幼生何伟江苏省血吸虫病防治研究所江苏省寄生虫分子生物学重点实验室江苏省寄生虫病学重点学科无锡214064 南京医科大学分子生物学研究所美国哈佛大学公共卫生学院

目的研究日本血吸虫多价dNA疫苗诱导BALB/c小鼠的免疫保护作用。方法65只BALB/c雌性小鼠随机分为5组,各组小鼠分别肌肉注射纯化的质粒dNApcdNA3.1(对照组)、pcdNA3.1-TPI(TPI)、pcdNA3.1-(CdR3)6[(CdR3)6]、pcdNA3.1-TPI-linker-(CdR3)6(TLC)和pcdNA3.1-(CdR3)6-linker-TPI(CLT),每鼠100μg。每隔2周加强免疫1次,共3次。末次免疫后4周每鼠经腹部皮肤攻击感染(45±1)条日本血吸虫尾蚴,45d后剖杀,计数成虫及肝脏虫卵数。首次免疫前2天及感染前2天经尾静脉采血检测IgG抗体水平、抗体亚类IgG1、IgG2a。末次免疫后2周取小鼠脾脏制备单个脾细胞,检测细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ的水平。结果TPI、TLC组和CLT组小鼠血清都检测到特异性IgG抗体,抗体亚类IgG2a/IgG1的比值分别为1.71、2.71和4.70,而其他两组则未检测到特异性IgG抗体;TPI、TLC组和CLT组小鼠的IL-2、IFN-γ较对照组均有不同程度的升高,IL-4则无明显差异。多价dNA疫苗TLC组和CLT组减虫率分别达到37.30%、39.09%,减卵率分别为41.61%、49.54%,均显著高于TPI组和(CdR3)6组(P均dNA疫苗相对于单价dNA疫苗能诱导小鼠产生较高的免疫保护作用,且诱导宿主产生较高的以Th1为主的免疫应答。

关键词：日本血吸虫多价dNA疫苗免疫保护作用

日本血吸虫中国大陆株23 kda膜蛋白dNA疫苗诱导小鼠保护性免疫的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2001年第6期19卷 336-339,F003页

作者：任建功朱荫昌 d.a.harn 余传信殷旭仁司进何伟徐明华万全许永良江苏省血吸虫病防治研究所无锡214064 美国哈佛大学公共卫生学院

目的　研究日本血吸虫中国大陆株 2 3kda膜蛋白 (SjC2 3)dNA疫苗诱导C5 7BL/6小鼠免疫保护作用。方法　将全长的SjC2 3基因克隆到真核表达载体pcdNA3.1,构建dNA疫苗 pcdNA3.1 SjC2 3。制备SjC2 3及IL 12的两个亚单位 p35、p4 0的dNA疫... 详细信息

目的　研究日本血吸虫中国大陆株 2 3kda膜蛋白 (SjC2 3)dNA疫苗诱导C5 7BL/6小鼠免疫保护作用。方法　将全长的SjC2 3基因克隆到真核表达载体pcdNA3.1,构建dNA疫苗 pcdNA3.1 SjC2 3。制备SjC2 3及IL 12的两个亚单位 p35、p4 0的dNA疫苗和对照 pcdNA3.1。 4 8只C5 7BL/6小鼠随机分为A、B、C 3组。A组小鼠肌注 10 0 μgpcdNA3.1;B组注射 10 0 μg pcdNA3.1 SjC2 3;C组肌注 pcdNA3.1 SjC2 3、pcdNA3.1 p35及pcdNA3.1 p4 0各 10 0 μg的混合物。每隔 2周各免疫 1次 ,共 3次。第 8周每鼠感染 4 5± 2条 /只尾蚴 ,4 5d后剖杀 ,计数成虫及肝内虫卵。采用免疫组化法检测SjC2 3及 p35、p4 0在小鼠局部组织内的表达 ;用脾细胞培养法检测经rSjC2 3 Hd刺激后 ,攻击前、后小鼠脾细胞IL 2、IL 4、IL 10和IFN γ的水平。用Westernblotting检测血清中抗SjC2 3抗体。结果　SjC2 3以及p35、p4 0在免疫小鼠股四头肌细胞膜和细胞浆均获得表达。IL 2和IFN γ的水平攻击前、后在B组和C组均明显升高。Westernblotting检测抗SjC2 3抗体结果表明 ,免疫后两周 ,B组 8/10份血清为阳性 ,C组 9/10份血清阳性。B组和C组分别获得 2 6 .9%和 35 .4 %的减虫率 ,C组显著高于B组 (P <0 .0 5 ) ;减卵率分别为 2 2 .2 %和 2 8.4 %。

关键词：日本血吸虫 23kda膜蛋白 dNA疫苗保护性免疫

日本血吸虫SjCTPI和SjC23dNA疫苗联合免疫保护作用的研究

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中国血吸虫病防治杂志 2002年第2期14卷 84-87页

作者：朱荫昌任建功司进 d.a.harn 余传信梁幼生殷旭仁徐明许永良江苏省血吸虫病防治研究所无锡214064 美国哈佛大学公共卫生学院

目的　探索 Sj CTPI和 Sj C2 3dNA疫苗联合应用保护性免疫的协同作用。方法　大量制备 pc dNA3.1- Sj CTPI和 pc dNA3.1- Sj C2 3的质粒 dNA。 4 8只 BAL B/ c小鼠分为 4个组 (A、B、C、d组 )每组 12只。 A组每鼠经双侧股四头肌注射 10... 详细信息

目的　探索 Sj CTPI和 Sj C2 3dNA疫苗联合应用保护性免疫的协同作用。方法　大量制备 pc dNA3.1- Sj CTPI和 pc dNA3.1- Sj C2 3的质粒 dNA。 4 8只 BAL B/ c小鼠分为 4个组 (A、B、C、d组 )每组 12只。 A组每鼠经双侧股四头肌注射 10 0 μg pc dNA3.1的质粒 dNA,为对照组 ;B组为Sj C2 3组 ,每鼠肌注 10 0μg pc dNA3.1- Sj CTPI的质粒 dNA;C组为 Sj CTPI组 ,每鼠肌注 10 0μgpc dNA3.1- Sj CTPI的质粒 dNA;d组为联合免疫组 ,每组肌注 10 0μg pc dNA3.1- Sj C2 3和 10 0μgpc dNA3.1- Sj CTPI质粒 dNA的混和物。分别于 0、14、2 8d免疫 3次。末次免疫后 30 d,每鼠经腹部皮肤攻击感染 (45± 2 )条日本血吸虫尾蚴。攻击后 4 5 d,剖杀所有小鼠 ,灌冲 ,收集成虫并计数。每鼠肝脏称重后剪碎 ,置 5 % KOH中消化 ,并计数虫卵数。比较各组间的减虫率和减卵率。结果　与对照组相比 ,Sj C2 3组、Sj CTPI及联合组的减虫率分别为 2 8.1%、2 9.1%和 4 1.5 % ,均非常显著地高于对照组 (P分别为 <0 .0 1,<0 .0 1,<0 .0 0 1) ,而联合组则又显著地高于单独 Sj C2 3组及单独 Sj CTPI组 (P均 <0 .0 5 )。三组的减卵率分别为 37.9%、4 4 .2 %和 6 1.4 % ,均非常显著地高于对照组 (P分别为 <0 .0 1,<0 .0 1,<0 .0 0 1) ,但?

关键词：日本血吸虫 SjCTPI SjC23 dNA疫苗联合免疫免疫保护

日本血吸虫SjC23蛋白质疫苗对核酸疫苗免疫增强作用的研究

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中国血吸虫病防治杂志 2002年第4期14卷 248-251页

作者：任建功朱荫昌 d.a.harn 余传信司进殷旭仁梁幼生徐明许永良江苏省血吸虫病防治研究所无锡214064 美国哈佛大学公共卫生学院

目的　研究 Sj C2 3蛋白质疫苗对 Sj C2 3dNA疫苗增强小鼠的免疫保护作用的效果。方法　分别构建和制备 Sj C2 3dNA疫苗 (pc dNA3.1- Sj C2 3)和 Sj C2 3大亲水片段融合蛋白质 (GST-Hd)疫苗。把 48只 BAL B/ c小鼠随机分为 A、B、C、d 4... 详细信息

目的　研究 Sj C2 3蛋白质疫苗对 Sj C2 3dNA疫苗增强小鼠的免疫保护作用的效果。方法　分别构建和制备 Sj C2 3dNA疫苗 (pc dNA3.1- Sj C2 3)和 Sj C2 3大亲水片段融合蛋白质 (GST-Hd)疫苗。把 48只 BAL B/ c小鼠随机分为 A、B、C、d 4组 ,每组 12只。 A组 (dNA和蛋白质疫苗联合免疫组 )每只小鼠分别在第 0、2周经股四头肌注射 10 0μg Sj C2 3质粒 dNA,在第 4周经背部皮下多点注射 5 0 μg GST- Hd+5 0 μg CFA;B组 (Sj C2 3dNA组 )每只小鼠分别在第 0、2、4周经股四头肌注射 10 0 μg Sj C2 3质粒 dNA;C组 (蛋白质疫苗组 )于第 4周每鼠经背部皮下多点注射 5 0 μgGST- Hd+5 0 μg CFA1次 ;d组 (对照组 )每鼠分别在第 0、2、4周肌注 10 0 μg pc dNA3.1。各组在末次免疫后 4周每鼠以 45± 2条日本血吸虫尾蚴攻击感染 ,攻击后 45 d剖杀小鼠 ,计数成虫及肝内虫卵数。在免疫前、末次免疫后和攻击后从小鼠尾静脉采血 ,分离血清 ,用 Western- blot法检测抗体反应。结果　联合组与质粒对照组相比 ,获得了 42 .9%的减虫率和 6 0 .0 %的减卵率 ,均显著高于单独Sj C2 3dNA疫苗组 2 8.1%的减虫率和 37.9%的减卵率 ,及单独蛋白质疫苗组 (GST- Hd) 2 3.8%减虫率和 39.5 %的减卵率 (P均 <0 .0 5 )。联合组抗体水平?

关键词：日本血吸虫中国大陆株 SjC23dNA疫苗 SjC23蛋白质疫苗联合免疫血吸虫病

日本血吸虫中国大陆株23kda膜蛋白核酸疫苗对猪免疫保护作用的研究

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中国血吸虫病防治杂志 2002年第1期14卷 3-7页

作者：朱荫昌任建功 d.a.harn 徐明余传信司进叶萍殷旭仁何伟许永良曹国群华万全1 江苏省血吸虫病防治研究所无锡214064 美国哈佛大学公共卫生学院中国农科院上海家畜寄生虫病研究所

目的　研究日本血吸虫中国大陆株 2 3k da膜蛋白 (Sj C2 3) dNA疫苗诱导猪的保护性免疫作用。方法　构建并大量制备 pc dNA3.1- Sj C2 3质粒 dNA和 pc dNA3.1- p35 ,pc dNA3.1- p40(小鼠 IL - 12的 2个亚单位 )的 dNA疫苗。 30头 2 .5... 详细信息

目的　研究日本血吸虫中国大陆株 2 3k da膜蛋白 (Sj C2 3) dNA疫苗诱导猪的保护性免疫作用。方法　构建并大量制备 pc dNA3.1- Sj C2 3质粒 dNA和 pc dNA3.1- p35 ,pc dNA3.1- p40(小鼠 IL - 12的 2个亚单位 )的 dNA疫苗。 30头 2 .5月龄的上海松江本地猪 (阉猪 )分为 A、B、C3组 ,每组 10头。 A组 (Sj C2 3组 )于每头猪两侧臀部肌肉注射 5 0 0 μg pc dNA3.1- Sj C2 3质粒 dNA,B组 (Sj C2 3+IL- 12组 ) ,于每头猪肌肉注射 5 0 0 μg pc dNA3.1- Sj C2 3dNA及 5 0 0 μg pc dNA3.1- p35和 5 0 0μg pc dNA 3.1- p40的混和质粒 dNA ;C组 (对照组 )每头猪肌肉注射 5 0 0μg pc dNA3.1质粒dNA。共免疫 3次 ,每次间隔 3周。末次免疫后 30 d,每猪经背部皮肤攻击感染日本血吸虫尾蚴 6 0 0条。攻击后 45 d剖杀 ,经胸主动脉灌冲 ,并从门静脉收集计算成虫。从肝脏的同一部位切下小块肝组织 ,置 5 % KOH内消化后 ,计算每克肝组织虫卵数 (EPG)。比较各组间减虫率、减雌率和减卵率。在免疫前 ,末次免疫后和攻击后从猪耳静脉采血 ,分离血清 ,用 EL ISA检测抗 Sj C2 3抗体。结果　Sj C2 3组与 Sj C2 3+IL - 12组与质粒对照组相比 ,分别获得 2 9.2 %和 5 8.6 %的减虫率、5 0 .8%和5 8.8%的减雌率以及 48.2 %和 5 6 .4%

关键词：日本血吸虫中国大陆株 23kda膜蛋白核酸疫苗猪保护性免疫

日本血吸虫23kda膜蛋白dNA疫苗和蛋白质疫苗联合应用免疫保护性作用的研究

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中国血吸虫病防治杂志 2002年第2期14卷 98-101页

作者：任建功朱荫昌 d.a.harn 余传信司进殷旭仁何伟梁幼生徐明华万全许永良江苏省血吸虫病防治研究所无锡214064 美国哈佛大学公共卫生学院

目的　研究 Sj C2 3dNA疫苗和 Sj C2 3蛋白疫苗联合免疫对 C5 7BL/ 6感染小鼠的免疫保护作用。方法　分别构建和制备 Sj C2 3dNA疫苗 (pc dNA3.1- Sj C2 3)和蛋白疫苗 (Sj C2 3大亲水片段融合蛋白 GST- Hd)。 4 8只 C5 7BL / 6小鼠随机... 详细信息

目的　研究 Sj C2 3dNA疫苗和 Sj C2 3蛋白疫苗联合免疫对 C5 7BL/ 6感染小鼠的免疫保护作用。方法　分别构建和制备 Sj C2 3dNA疫苗 (pc dNA3.1- Sj C2 3)和蛋白疫苗 (Sj C2 3大亲水片段融合蛋白 GST- Hd)。 4 8只 C5 7BL / 6小鼠随机分为 A、B、C、d 4组 ,每组 12只。 A组 (Sj C2 3dNA+GST- Hd联合应用组 )每只小鼠分别在第 0、2周经股四头肌注射 10 0μg Sj C2 3质粒 dNA,在第 4周经背部皮下多点注射 5 0 μg GST- Hd+5 0 μg CFA;B组 (Sj C2 3dNA组 )每只小鼠分别在第 0、2、4周经股四头肌注射 10 0 μg Sj C2 3质粒 dNA;C组 (蛋白疫苗组 )于第 4周每鼠经背部皮下多点注射5 0μg GST- Hd+5 0μg CFA 1次 ;d组 (对照组 )每鼠分别在第 0、2、4周肌注 10 0μg pc dNA 3.1。各组在末次免疫后 30 d每鼠以 4 5± 2条 /只日本血吸虫尾蚴攻击感染 ,攻击后 4 5 d剖杀小鼠 ,计数成虫及肝内虫卵数。在免疫前、末次免疫后和攻击后从小鼠尾静脉采血 ,分离血清 ,用 Western- blot法检测抗体反应。结果　联合组与质粒对照组相比 ,获得了 36 .9%的减虫率和 30 .7%减卵率 ;而单独Sj C2 3dNA疫苗组的减虫率为 2 6 .9% ,显著低于联合组 (Pd)为 15 .2 %和 12 .2 %

关键词：日本血吸虫 SiC23 dNA疫苗蛋白疫苗联合免疫保护性免疫动物实验