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Development of novel-nanobody-based lateral-flow immunochromatographic strip test for rapid detection of recombinant human interferon a2b

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Journal of Pharmaceutical Analysis 2022年第2期12卷 308-316页

作者： Xi Qin Maoqin Duan Dening Pei Jian Lin Lan Wang Peng Zhou Wenrong Yao Ying Guo Xiang Li Lei Tao Youxue Ding Lan Liu Yong Zhou Chuncui Jia chunming rao Junzhi Wang National Institutes for Food and Drug Control Beijing100050China Synthetic and Functional Biomolecules Center Peking UniversityBeijing100871China WHO Collaboration Centre for Biologicals Standardization and Evaluation Beijing100050China

Recombinant human interferon a2b(rhIFNa2b)is widely used as an antiviral therapy agent for the treatment of hepatitis B and hepatitis C.The current identification test for rhIFNa2b is complex.In this study,an anti-rhIFNa2b nanobody was discovered and used for the development of a rapid lateral flow strip for the identification of rhIFNa2b.RhIFNa2b was used to immunize an alpaca,which established a phage nanobody library.After five steps of enrichment,the nanobody I22,which specifically bound rhIFNa2b,was isolated and inserted into the prokaryotic expression vector pET28a.After subsequent purification,the physicochemical properties of the nanobody were determined.A semiquantitative detection and rapid identification assay of rhIFNa2b was developed using this novel nanobody.To develop a rapid test,the nanobody I22 was coupled with a colloidal gold to produce lateral-flow test strips.The developed rhIFNa2b detection assay had a limit of detection of 1 mg/mL.The isolation of I22 and successful construction of a lateral-flow immunochromatographic test strip demonstrated the feasibility of performing ligand-binding assays on a lateral-flow test strip using recombinant protein products.The principle of this novel assay is generally applicable for the rapid testing of other commercial products,with a great potential for routine use in detecting counterfeit recombinant protein products.

关键词： Recombinant human interferon a2b Nanobody Phage display Screening Rapid test

Quality-control method for the determination of biological activity of engineered calcineurin subunit B

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Science China(Life Sciences) 2016年第6期59卷 584-588页

作者： Xinchang Shi Huan Yang Li Xu Xiang Li Zongwen Huang Yudong Han Qun Wei chunming rao Key Laboratory of the Ministry of Health for Research on Quality and Standardization of Biotech Products National Institutes for Food and Drug Control Department of Biochemistry and Molecular Biology Beijing Normal University Gene Engineering and Biotechnology Beijing Key Laboratory Haikou Qili Pharmaceutical CO. LTD.

The aim of this study was to establish a quality-control method for calcineurin subunit B(CNB) biological activity determinations. CNB enhances the p-nitrophenylphosphate(p NPP) dephosphorylating activity of calcineurin subunit A Δ316 mutant(CNAΔ316). A series of CNB concentrations were fitted to a four-parameter equation to calculate the corresponding p NPP maximum dephosphorylation rates. Values were calculated based on biological activity references using a parallel line method. The method was then validated for accuracy, precision, linearity, linear range, sensitivity, specificity, and robustness. The recovery results were greater than 98%. Intra-plate precision was 6.7%, with inter-plate precision of 10.8%. The coefficient of determination was greater than 0.98. The linear range was 0.05–50 μg m L?1, with sensitivity of 50 μg m L?1. Tested cytokines did not induce CNAΔ316 dephosphorylation of p NPP. The chosen CNAΔ316 concentration range did not affect activity determinations.

关键词：生物活性测定钙调神经磷酸酶质量控制方法基因工程 B亚单位去磷酸化浓度范围对硝基苯酚

重组5型腺相关病毒基因组滴度测定用国家标准品的研制

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中国生物制品学杂志 2023年第4期36卷 429-433页

作者：郑红梅于雷李永红史新昌安怡方郭莹韩春梅饶春明周勇中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的研制重组5型腺相关病毒(recombinant type 5 adeno-associated virus,rAAV5)基因组滴度测定用国家标准品。方法对三质粒系统制备的rAAV5-GFP原液,按《中国药典》三部(2020版)相关要求进行鉴别、外观、pH、无菌、基因组滴度、纯度、... 详细信息

目的研制重组5型腺相关病毒(recombinant type 5 adeno-associated virus,rAAV5)基因组滴度测定用国家标准品。方法对三质粒系统制备的rAAV5-GFP原液,按《中国药典》三部(2020版)相关要求进行鉴别、外观、pH、无菌、基因组滴度、纯度、感染滴度等检定,根据结果稀释、分装,制备成候选标准品;采用热加速试验对候选标准品进行稳定性考察;组织3家实验室,采用微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)法对候选标准品进行协作标定。结果候选标准品原液及候选标准品的各项检测指标均符合相关要求;在25、4、-20、-40、-80℃条件下,1、3、4、6个月基因组滴度均无明显下降;经3家实验室协作标定,候选标准品赋值为2.56×10^(12)copies/mL,95%置信区间为2.48×1012~2.64×10^(12)copies/mL。结论研制的rAAV5基因组滴度测定用国家标准品具有良好的稳定性,可用于rAAV5相关产品的质量评价。

关键词：重组5型腺相关病毒微滴式数字PCR 基因组滴度协作标定国家标准品

应用半干胶转移免疫印迹法分析人白细胞干扰素

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中国生物制品学杂志 1994年第1期7卷 29-31页

作者：饶春明赵燕萍丁锡申中国药品生物制品检定所北京100050

应用半干胶转移仪和ABC-试剂盒，建立了高灵敏度的半干胶转移免疫印迹法并用该法分析了不同厂家生产的人白细胞干扰素．结果表明，该法具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特点，很适用于人白细胞干扰素的检定．

关键词：干扰素免疫印迹法鉴定

应用生物素探针检测重组人α_1型干扰素中外源DNA

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中国生物制品学杂志 1990年第2期3卷 70-72页

作者：饶春明李佐刚丁锡申中国药品生物制品检定所北京100050

本文应用生物素标记重组人α_1 型干扰素(rHuIFN-α_1)工程菌的总DNA作为探针,检测rHuIFN-α_1制品中的外源DNA,其灵敏度可达10pg。用蛋白酶K(Proteinase K)消化制品中的蛋白,排除了使用生物素所常见的非特异性影响。

关键词： biotin-DNA探针外源DNA 蛋白酶K

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2.5sNGF酶联免疫检测试剂盒的研制

中国生物制品学杂志 1999年第4期12卷 219-220,237页

作者：饶春明沈心亮谢溱高凯王军志中国药品生物制品检定所北京100050 兰州生物制品研究所

用成年雄性小鼠颌下腺提纯的 2 5sNGF免疫家兔得到兔抗NGF抗体 ,研制出 2 5sNGFELISA试剂盒。经检测本试剂盒灵敏度达到 1ng ml,在 0 84～ 6 7ng ml范围内线性良好 (r >0 99)。对人、小鼠、大鼠血浆无非特异反应 ,在大鼠血浆... 详细信息

用成年雄性小鼠颌下腺提纯的 2 5sNGF免疫家兔得到兔抗NGF抗体 ,研制出 2 5sNGFELISA试剂盒。经检测本试剂盒灵敏度达到 1ng ml,在 0 84～ 6 7ng ml范围内线性良好 (r >0 99)。对人、小鼠、大鼠血浆无非特异反应 ,在大鼠血浆中NGF样品回收率在 91%～ 10 7%之间 ,变异系数小于 10 % (n =4)。对NGF参比品进行 6次标定 ,平均值为 13 4± 1 13ng 支 ,板间CV为 8 43% (n =6 ) ,板内CV值均小于 6 % (n =4,3次 )。表明本试剂盒可用于小鼠 2 5sNGF制品的定量检测和药代动力学研究。

关键词： ELISA 试剂盒定量检测药物动力学 NGF

RP-HPLC法测定可溶性CD95-Fc融合蛋白中异天冬氨酸的含量

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中国医药导报 2019年第6期16卷 109-112页

作者：于雷陶磊毕华李响饶春明中国食品药品检定研究院重组药物室北京100050

目的测定可溶性CD95-Fc融合蛋白中异天冬氨酸(IsoAsp)含量。方法采用ISOQUANT誖异天冬氨酸检测试剂盒结合反相高效液相色谱法测定样品中IsoAsp含量,采用Phenomenex Synergi 4μm Hydro RP-80 C18色谱柱(150 mm×3 mm,4μm),以7.9 mmol/... 详细信息

目的测定可溶性CD95-Fc融合蛋白中异天冬氨酸(IsoAsp)含量。方法采用ISOQUANT誖异天冬氨酸检测试剂盒结合反相高效液相色谱法测定样品中IsoAsp含量,采用Phenomenex Synergi 4μm Hydro RP-80 C18色谱柱(150 mm×3 mm,4μm),以7.9 mmol/L磷酸二氢钾-1.1 mmol/L磷酸氢二钾-10%甲醇为流动相A,以甲醇为流动相B,梯度洗脱,流速为0.43 mL/min。结果对照品和3批原液中IsoAsp含量相近(0.30～0.32 mol/mol sCD95-Fc),3批成品中IsoAsp含量明显增高(0.51～0.53 mol/mol sCD95-Fc);25℃和37℃处理24 h后成品中IsoAsp含量无明显变化,60℃处理后明显增加。结论该法适用于可溶性CD95-Fc融合蛋白中IsoAsp含量检测,高温处理可加快样品中IsoAsp生成。

关键词：可溶性CD95-Fc 异天冬氨酸脱酰胺修饰反相高效液相色谱

神经生长因子对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

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中国生物制品学杂志 1998年第2期11卷 107-109页

作者：王军志饶着明吴勇杰中国药品生物制品检定所北京100050 兰州医学院兰州730000

用眼内高压法造成大鼠视网膜缺血45min，然后回复常压，造成缺血-再灌注损伤。采用符合临床给药途径的眼球分注射法，小鼠颌下腺神经生长因子（NGF）250、500、1000BU／眼，于缺血损伤前及其后球旁注射，每天1次，连续4天，第10天取材... 详细信息

用眼内高压法造成大鼠视网膜缺血45min，然后回复常压，造成缺血-再灌注损伤。采用符合临床给药途径的眼球分注射法，小鼠颌下腺神经生长因子（NGF）250、500、1000BU／眼，于缺血损伤前及其后球旁注射，每天1次，连续4天，第10天取材病检。观察到NGF500、1000BU／眼可减轻视网膜缺血-再灌注损伤，使神经节细胞存活率增加，视网膜全层及内核层萎缩减轻。提示NGF球旁注射可扩散到视网膜，对视网膜缺血-再灌注损伤产生保护作用。

关键词：神经生长因子视网膜缺血再灌注损伤

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碱性成纤维细胞生长因子凝胶的无菌检查

中国药事 2013年第9期27卷 932-934页

作者：丁有学刘兰毕华史新昌饶春明中国食品药品检定研究院北京100050 卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的建立碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)凝胶剂的无菌检查方法。方法依据《中国药典》2010年版三部要求,采用直接接种法进行bFGF凝胶剂无菌检查并进行方法学验证。结果与结论通过方法学验证说明建立的无菌检查法适用于bFGF凝胶剂的无菌... 详细信息

目的建立碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)凝胶剂的无菌检查方法。方法依据《中国药典》2010年版三部要求,采用直接接种法进行bFGF凝胶剂无菌检查并进行方法学验证。结果与结论通过方法学验证说明建立的无菌检查法适用于bFGF凝胶剂的无菌检查。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子无菌检查直接接种