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丁香酚微乳对鸽源金黄色葡萄球菌临床分离耐药株抗生素增敏作用的研究

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安徽农业大学学报 2021年第3期48卷 418-422页

作者：赵昕魏思敏刘敏李洋静陶娅刘明江柏若楠李金贵扬州大学兽医学院扬州225009 江苏省动物重要疫病与人畜共患病防控协同创新中心扬州225009 江苏省威特凯鸽业有限公司无锡214410 江苏省常熟市沙家浜动物防疫站常熟215500

为探讨丁香酚微乳(Eugenol microemulsion,Em)对鸽源金黄色葡萄球菌(***)临床分离耐药株的抗菌活性及与抗生素联合的作用效果。采用MALDI质谱分析法鉴定从病鸽分离的菌株类别,以ATCC29213为质控菌株,微量肉汤稀释法测定Em和6种抗生素对... 详细信息

为探讨丁香酚微乳(Eugenol microemulsion,Em)对鸽源金黄色葡萄球菌(***)临床分离耐药株的抗菌活性及与抗生素联合的作用效果。采用MALDI质谱分析法鉴定从病鸽分离的菌株类别,以ATCC29213为质控菌株,微量肉汤稀释法测定Em和6种抗生素对临床分离株的最低抑菌浓度(MICs),微量棋盘稀释法测定Em与6种抗生素联合作用的分级抑菌浓度指数(FICI),以平板计数法检测Em及其联合多西环素(doxycycline,DOX)对临床分离***耐药株生长的抑制作用。检测结果表明,分离自病鸽心脏的***(200113-J3-H1)为环丙沙星(CIP)、黏菌素(COL)、DOX和土霉素(OXY)的多重耐药菌株;Em对该菌的MIC为0.25%,与DOX、OXY、COL和CIP联合作用时均呈现协同作用(FICI=0.125~0.281),其中对DOX的增敏作用最明显,可使其MIC降低16倍;与ENR联合则表现为相加作用(FICI=0.561)。此外,从病鸽肝脏分离的***(200113-J2-L5)为四环素类DOX和OXY耐药菌株;沙门菌(200113-J1-H3)CIP、恩诺沙星(ENR)、卡那霉素(kan)、COL、DOX和OXY的敏感株,Em对这两种菌的MIC均为0.03125%。结论表明,Em对耐药菌和非耐药菌均具有显著的抑菌活性,有望成为抗生素替代药物,且可显著增强***多重耐药菌对抗生素的敏感性,这为鸽场细菌性疾病的控制提供了参考。

关键词：丁香酚微乳鸽抗生素耐药金黄色葡萄球菌

基于食管癌分子分型液体活检技术的研发和推广应用

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肿瘤基础与临床 2020年第5期33卷 395-399页

作者：王盼盼赵学科李秀敏钟侃胡景峰宋昕王伟李欣然杨苗苗徐瑞华魏梦霞韩文莉雷玲玲孟超龙胡守佳程锟李留玉张立国李志强刘太江张高富陈志国李喜琴王立东郑州大学第一附属医院河南省食管癌重点开放实验室、省部共建食管癌防治国家重点实验室河南郑州450052 新乡医学院第三附属医院消化内科河南新乡453000 新乡医学院河南省肿瘤分子治疗医学重点实验室河南新乡453003 新乡市中心医院胸外科河南新乡453000 辉县市第三人民医院(孟庄镇卫生院)肿瘤科河南新乡453621 新乡同盟医院肿瘤科河南新乡453800 辉县市共济医院肿瘤科河南新乡453600

目的探讨食管癌分子分型液体活检技术在食管癌高危人群预警和早期发现中的应用价值。方法利用间接酶联免疫吸附试验检测研究对象血清细胞周期蛋白E(CyclinE)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)、细胞周期相关转录因子1(E2F1)、胰岛素样... 详细信息

目的探讨食管癌分子分型液体活检技术在食管癌高危人群预警和早期发现中的应用价值。方法利用间接酶联免疫吸附试验检测研究对象血清细胞周期蛋白E(CyclinE)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)、细胞周期相关转录因子1(E2F1)、胰岛素样生长因子2 mRNA-结合蛋白1(IMP1)和P65等5种肿瘤相关抗原自身抗体,比较其在食管癌组和正常对照组中的表达差异;对食管癌高发区无症状人群行液体活检技术和色素内镜检查,并对比2种方法检测结果;采用液体活检技术对食管癌高发区无症状人群大规模筛查,阳性者行色素内镜检查,了解食管癌检出情况。结果食管癌组CyclinE、STAT3、E2F1、IMP1和P65等5种肿瘤相关抗原自身抗体阳性率均高于正常对照组,差异均有统计学意义(χ^2=7.779,P=0.005;χ^2=14.222,P<0.001;χ^2=13.211,P<0.001;χ^2=13.455,P<0.001;χ^2=26.510,P<0.001)。5种肿瘤相关抗原自身抗体联合检测至少1种阳性用于食管癌诊断的敏感性为77.00%,特异性为87.00。验证组400例无症状人群中,5种肿瘤相关抗原自身抗体联合液体活检技术检出食管癌8例(72.73%)、癌前病变22例(75.86%),用于食管癌诊断的敏感性为72.73%,特异性为86.94%。推广应用组10752例无症状人群液体活检技术筛查共发现2043例阳性人群(19.00%),进一步行色素内镜检查的结果显示,正常人群1075例(52.62%),早期食管癌258例(12.63%),不典型增生患者710例(34.75%)。液体活检技术联合色素内镜检查的食管癌检出率为2.40%(258/10752)。结论CyclinE、STAT3、E2F1、IMP1和P65等5种肿瘤相关抗原自身抗体联合液体活检技术是食管癌高危人群筛查和早期发现的有效手段;该技术的食管癌前病变和早期癌检出率与传统筛查方法相似,大幅减少了内镜检查人数,显著降低了筛查成本,具有明显的人群推广应用价值。

关键词：食管癌肿瘤相关抗原自身抗体液体活检高危人群预警早期发现

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农杆菌介导的甜椒遗传转化体系的建立

江西农业学报 2019年第6期31卷 9-15页

作者：苏振华张俊华张泽鑫李妹芳郭尚敬曹雪松冀芦沙聊城大学生命科学学院山东聊城252000 聊城大学农学院山东聊城252000 聊城大学药学院山东聊城252000

以低温渗透系甜椒CL122为材料,采用其子叶节为外植体材料,研究了农杆菌介导的甜椒遗传转化体系的主要影响因子,如卡那霉素选择压、农杆菌菌液浓度、乙酰丁香酮浓度、侵染时间、共培养时间、激素浓度等,初步建立了一个高效的甜椒遗传转... 详细信息

以低温渗透系甜椒CL122为材料,采用其子叶节为外植体材料,研究了农杆菌介导的甜椒遗传转化体系的主要影响因子,如卡那霉素选择压、农杆菌菌液浓度、乙酰丁香酮浓度、侵染时间、共培养时间、激素浓度等,初步建立了一个高效的甜椒遗传转化体系。结果表明:最适的卡那霉素选择压为50mg/L,乙酰丁香酮浓度在100μmol/L时可以明显提高外植体的抗性芽数,最适合的预培养时间和共培养时间为2d,最佳侵染时间5min,外植体在MS+0.2mg/LIAA(吲哚乙酸)+400mg/L特美汀培养基上生根率最高。

关键词：甜椒农杆菌遗传转化外植体

肾肿瘤伴静脉瘤栓“301分级系统”及手术策略(附100例病例分析)

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微创泌尿外科杂志 2017年第6期6卷 328-332页

作者：黄庆波彭程顾良友王保军刘侃杜松良范阳吕香君沈诞唐露李新涛史涛坪李宏召朱捷郭刚陈光富徐阿祥宋涛符伟军董隽张磊胡明根肖苍松王海屹刘凤永马鑫张旭中国人民解放军总医院泌尿外科中国人民解放军总医院肾脏疾病国家重点实验室北京100853 中国人民解放军总医院肝胆外二科中国人民解放军总医院心血管外科中国人民解放军总医院影像科中国人民解放军总医院介入放射科

目的:介绍肾肿瘤伴静脉瘤栓"301分级系统"以及对应的手术策略,并评价其安全性及可行性。方法:总结中国人民解放军总医院泌尿外科2013年6月~2017年8月对100例肾肿瘤伴静脉瘤栓形成患者手术治疗经验,提出"301分级系统"。右肾静脉瘤栓为0级... 详细信息

目的:介绍肾肿瘤伴静脉瘤栓"301分级系统"以及对应的手术策略,并评价其安全性及可行性。方法:总结中国人民解放军总医院泌尿外科2013年6月~2017年8月对100例肾肿瘤伴静脉瘤栓形成患者手术治疗经验,提出"301分级系统"。右肾静脉瘤栓为0级,手术策略为右肾根治性切除术;左肾静脉瘤栓根据是否超过肠系膜上动脉分为0a及0b级。下腔静脉瘤栓分为四级:第一肝门以下的下腔静脉瘤栓为Ⅰ级,第一肝门以上至第二肝门Ⅱ级,第二肝门至膈肌水平为Ⅲ级,膈肌以上为Ⅳ级。按瘤栓分级不同手术策略包括是否需要术前肾动脉栓塞,是否需要翻肝、阻断肝脏血流和是否需要采用静脉转流或体外心肺循环。回顾性分析患者临床病理资料,手术时间、出血量、住院时间及手术并发症等指标。结果:100例肾肿瘤伴静脉瘤栓患者纳入分析,其中男77例,女23例,平均年龄56岁(23~81岁)。按"301分级系统"分级,0(左侧0a)级40例,0b级6例,Ⅰ级32例,Ⅱ级15例,Ⅲ级6例,Ⅳ级1例。100例手术均按照"301分级系统"对应的手术策略顺利完成手术,其中开放手术13例,腹腔镜手术19例,机器人手术68例,无术中瘤栓脱落致死病例,1例出现肠道损伤,2例损伤脾脏。中位手术时间164 min(43~465 min),其中0a级为109.5 min(43~324min),0b级196 min(120~348 min),Ⅰ级170 min(76~422 min),Ⅱ级240min(130~360 min),Ⅲ级337 min(255~465 min),Ⅳ级336 min,各组间差异有统计学意义(P<0.001)。中位出血量400 ml(20~7 000 ml),0a级为100 ml(20~2 000 ml),0b级450 ml(100~3 000 ml),Ⅰ级425 ml(20~4 500 ml),Ⅱ级1 200 ml(100~4 000 ml),Ⅲ级2 600 ml(500~7 000 ml),Ⅳ级3 000 ml。各组间差异有统计学意义(P<0.001)。术后所有患者均恢复良好出院,中位术后住院时间7 d(3~30 d)。术后病理提示透明细胞癌79例,乳头状细胞癌9例,其余类型12例。结论:根据"301分级系统"制定肾肿瘤伴静脉瘤栓手术策略处理是安全可行的,但仍须多中心及更多病例进行验证。

关键词：肾肿瘤肿瘤瘤栓形成机器人手术腹腔镜手术分级系统

基因工程方法抗甜菜丛根病病毒育种的研究(I)甜菜坏死黄脉病毒外壳蛋白基因转化甜菜及植株再生

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中国甜菜糖业 2000年第2期 1-4页

作者：刘巧红孔凡江于歆江莉萍徐德昌吴永英董龙福哈尔滨工业大学糖业研究院黑龙江哈尔滨150086 黑龙江省富裕县农业站

采用含有甜菜坏死黄脉病毒外壳蛋白 (BNYVVCP)基因的农杆菌 ,分别以不同甜菜品系的叶柄、下胚轴及子叶为外植体材料进行基因转化研究。含有BNYVVCP基因和卡那霉素抗性筛选基因 (kanr)的农杆菌与甜菜组织不同外植体共培养后 ,经过诱导分... 详细信息

采用含有甜菜坏死黄脉病毒外壳蛋白 (BNYVVCP)基因的农杆菌 ,分别以不同甜菜品系的叶柄、下胚轴及子叶为外植体材料进行基因转化研究。含有BNYVVCP基因和卡那霉素抗性筛选基因 (kanr)的农杆菌与甜菜组织不同外植体共培养后 ,经过诱导分化培养 ,在含有卡那霉素 (kanamycin)的培养基上 ,从叶柄及下胚轴分别直接诱导出抗卡那霉素再生芽 ,而从子叶上只诱导出紧密型绿色愈伤组织 ,未分化出不定芽。从叶柄及下胚轴诱导再生芽的诱导培养基分别为 :MS +BA0 5+TIBA0 2 +3 %蔗糖 +kan2 0 0 +Cb50 0、MS+BA0 1 5+NAA0 2 +3 %蔗糖 +kan1 0 0 +Cb50 0。甜菜再生植株诱导频率与甜菜品系、外植体类型、苗龄、温度、TIBA、预处理等因素有关。再生植株生根培养基为 :MS +IBA2 0 +2 %蔗糖 +kan50。

关键词：农杆菌介导 BNYVVCP 甜菜抗病育种基因工程

1 025t／h锅炉燃用烟煤掺烧贫瘦煤的试验研究

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电力设备 2008年第10期9卷 48-51页

作者：果志明孙绍增陈刚李争起赵启名李正义杜新定苏效奇北京国电龙高科环境工程技术有限公司黑龙江省哈尔滨市150001 大唐洛阳首阳山发电厂河南省偃师市471900

某电厂DC1025/18.2-Ⅱ6型锅炉为加大贫瘦煤的掺烧比例,采用了水平浓淡风煤粉燃烧器技术改造。进行了混煤掺烧优化调整试验研究,在50%贫瘦煤与50%长焰煤掺烧、60%贫瘦煤与40%长焰煤掺烧、70%贫瘦煤与30%长焰煤掺烧情况下进行了试验。改造... 详细信息

某电厂DC1025/18.2-Ⅱ6型锅炉为加大贫瘦煤的掺烧比例,采用了水平浓淡风煤粉燃烧器技术改造。进行了混煤掺烧优化调整试验研究,在50%贫瘦煤与50%长焰煤掺烧、60%贫瘦煤与40%长焰煤掺烧、70%贫瘦煤与30%长焰煤掺烧情况下进行了试验。改造后,在60%无烟烧和40%烟煤配比的情况下,锅炉效率为92.3%,锅炉实现了50%负荷长期无油运行;改造前再热汽温始终偏低的现象有明显改善,锅炉没有发生因结渣影响运行的情况。文章对燃用烟煤和贫瘦煤掺烧的锅炉运行调整和改造具有一定参考作用。

关键词：煤粉燃烧器掺烧调整再热汽温

肠出血性大肠杆菌O157:H7△hly△stx△toxB基因缺失株的构建

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华北农学报 2011年第5期26卷 76-82页

作者：张雪寒何孔旺赵攀登栾晓婷叶青温立斌倪艳秀周俊明李彬王小敏郭容利俞正玉茅爱华吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157:H7是食源感染的人兽共患病原菌。志贺毒素(Shiga toxin,Stx)、溶血素(haemolysin,Hly)和ToxB是O157:H7重要的毒力因子。选用自杀性质粒pMEG375,体外构建具有同源臂的重组自杀性质粒,借助于sm10宿主菌获得O157:H7杂交菌株,通过同源重组,依次获得O157:H7(△hly△stx△toxB)基因缺失株,△hly△stx△toxB接种HEp-2细胞和感染链霉素处理的Balb/c小鼠,明确缺失株粘附定植的能力。经PCR鉴定,hly、stx和toxB基因分别被壮观霉素(Spc+)、庆大霉素(Gm+)和卡那霉素(kan+)基因表达盒所代替,Western blot鉴定结果显示,O157:H7(△hly△stx△toxB)检测不到相应的Stx、Hly和ToxB蛋白。O157:H7(△hly△stx△toxB)生长特性与亲本株无明显差异。对于HEp-2细胞的粘附能力明显降低。Balb/c小鼠排菌时间和排菌量明显减少和降低。本研究成功获得O157:H7(△hly△stx△toxB),并且明确Stx、Hly和ToxB的缺失导致了O157:H7对HEp-2细胞和Balb/c小鼠的粘附和定植能力降低。本研究旨在为研制EHEC O157:H7基因缺失疫苗奠定物质基础。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7 hly stx toxB 缺失株小鼠粘附

肠出血性大肠杆菌O157∶H7 toxB基因缺失株的构建

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江苏农业学报 2012年第2期28卷 337-343页

作者：张雪寒何孔旺赵攀登栾晓婷叶青温立斌倪艳秀李彬郭容利王小敏周俊明俞正玉茅爱华吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了明确肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157∶H7大质粒pO157编码的蛋白质ToxB与O157∶H7在肠道黏附、定殖的关系,构建含有toxB基因同源臂的重组自杀性质粒pMEG375-BN-kan-BC,转化SM10宿主菌获得重组SM10(pMEG375-BN-kan-BC)。将SM10(pMEG375-BN-kan-BC)与O157∶H7进行混合培养,通过同源重组,获得杂交toxB基因缺失株。用体外接种的HEp-2细胞和体内感染链霉素处理的小鼠,明确缺失株黏附定殖能力。经PCR和Western blot鉴定,toxB基因被卡那霉素(kan+)选择标记基因表达盒所代替。O157∶H7(△toxB)生长特性与亲本株相比无明显差异。O157∶H7(△toxB)与亲本株相比,对HEp-2细胞的黏附能力降低了2倍。口服感染小鼠后,O157∶H7(△toxB)第3 d粪便排菌量仅为3.1×105 CFU,持续排菌11 d;而亲本株排菌量高达4.03×107 CFU,持续排菌时间超过14 d。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157∶H7 toxB基因缺失株小鼠黏附

一种带增强子的原核高效表达载体的构建及初步应用

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生物工程学报 2000年第5期16卷 578-581页

作者：罗文新张军杨海杰李少伟谢小燕逄淑强李少菁夏宁邵厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005

构建的 pTO T7大肠杆菌高效融合表达载体 ,调控序列中有一个Ω序列和一个T7启动子串联 ;多克隆位点 (MCS)包括 8个常用酶切位点 ;可进行融合表达或者非融合表达 ,根据不同的需要加以选择 ;融合蛋白N端为T7g10的 12个起始氨基酸 ,C端为Hi... 详细信息

构建的 pTO T7大肠杆菌高效融合表达载体 ,调控序列中有一个Ω序列和一个T7启动子串联 ;多克隆位点 (MCS)包括 8个常用酶切位点 ;可进行融合表达或者非融合表达 ,根据不同的需要加以选择 ;融合蛋白N端为T7g10的 12个起始氨基酸 ,C端为His标签 ;含kan抗性基因作为选择标记。将增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因克隆至 pTO T7载体 ,在E .coli中的表达结果表明 ,融合EGFP达到菌体总蛋白量的 5 0 %以上 ,90 %以上的融合蛋白以可溶性形式存在 ,融合后的EGFP仍保持原有的荧光性质。与同时构建的不含Ω序列的 pT T7载体的表达产量的比较研究结果表明 ,Ω序列在 pTO T7载体中能显著提高表达效率。

关键词：增强子原核细胞表达载体 PTO-T7 Ω序列