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白血病骨髓基质细胞促进SHI－1细胞体外侵袭及其作用机制探讨

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肿瘤 2008年第12期28卷 1081-1085页

作者：李振江陈子兴岑建农黄明德何军邱桥成姚利南昌大学第二附属医院血液科、血液研究所南昌330006 苏州大学附属第一医院、江苏省血液研究所苏州215006 江苏省淮安市第一人民医院肿瘤科淮安223300

目的:研究白血病患者骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)与白血病SHI-1细胞互相接触对后者侵袭能力的影响及其作用机制。方法:收集白血病患者BMSC及其条件培养液,采用RT-PCR法检测细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellul... 详细信息

目的:研究白血病患者骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)与白血病SHI-1细胞互相接触对后者侵袭能力的影响及其作用机制。方法:收集白血病患者BMSC及其条件培养液,采用RT-PCR法检测细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)在细胞SHI-1和BMSC中的表达。按1?10比例将BMSC与SHI-1细胞进行混合,接种于铺有matrigel基质胶的Transwell小室内,并加入终浓度为2μg/mL的CXC趋化因子受体4(CXCchemokine receptor 4,CXCR4)或EMMPRIN功能阻断抗体,或以BMSC条件培养液进行侵袭实验。采用实时定量PCR法检测共同培养前后SHI-1细胞的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9、基质金属蛋白酶组织抑制因子2(tis-sue inhibitor of metalloproteinase 2,TIMP-2)和CXCR4 mRNA表达的改变。应用ELISA法测定无血清培养上清液中基质细胞衍生因子1(stromal cell-derived factor1,SDF-1)的含量。结果:SHI-1和BMSC细胞均表达EMMPRIN。SHI-1细胞与BMSC共培养后,其侵袭能力有显著提高,但能被CXCR4和EMMPRIN抗体阻断,条件培养液未明显提高SHI-1细胞的侵袭能力。共同培养后,SHI-1细胞的MMP-2、MMP-9、TIMP-2和CXCR4 mRNA以及无血清上清液中SDF-1的含量均有显著提高。结论:白血病患者的BMSC与白血病SHI-1细胞接触时,前者可通过其细胞表面的多种分子途径来诱导SHI-1细胞跨matrigel侵袭能力的提高,这可能是导致白血病细胞向髓外浸润的一种重要机制。

关键词：白血病骨髓基质细胞白血病浸润基因表达调控细胞外基质蛋白质类

AML1-ETO融合蛋白对BCL-2基因表达的影响

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中国实验血液学杂志 2013年第6期21卷 1394-1398页

作者：庄文越李正祎赵昀岑建农庄文卓陈子兴北华大学医学检验学院吉林吉林132013 吉林医药学院检验系吉林吉林132013 苏州大学唐仲英血液学研究中心江苏苏州215000 苏州大学附属第一医院江苏省血液学研究所江苏苏州215000 苏州大学基础医学与生物科学学院细胞生物学系江苏苏州215000

本研究旨在观察AML1-ETO在白血病细胞中对于抗凋亡基因BCL-2表达的影响,探讨其在白血病发生中的作用。应用流式细胞术检测急性单核细胞白血病细胞株U937-WT、U937-Mock和经AML1-ETO基因转染的U937-A/E1-4的细胞凋亡率;使用免疫印迹法检... 详细信息

本研究旨在观察AML1-ETO在白血病细胞中对于抗凋亡基因BCL-2表达的影响,探讨其在白血病发生中的作用。应用流式细胞术检测急性单核细胞白血病细胞株U937-WT、U937-Mock和经AML1-ETO基因转染的U937-A/E1-4的细胞凋亡率;使用免疫印迹法检测cleaved caspase-3蛋白的表达;荧光实时定量PCR检测转染细胞和对照组细胞以及AML-M2患者白血病细胞BCL-2 mRNA的表达;染色质免疫沉淀技术研究转染细胞中AML1-ETO与BCL-2基因启动子之间直接的相互作用情况。结果表明:AML1-ETO转染细胞的凋亡率明显增加,且检测到cleaved caspase-3蛋白的表达;转染了AML1-ETO的U937细胞系和具有AML1-ETO融合基因的AML-M2患者中,BCL-2的mRNA表达水平显著下调;转染细胞沉淀富集的AML1-ETO直接结合的DNA中含有BCL-2基因的启动子序列。结论:BCL-2是AML1-ETO的直接靶基因,AML1-ETO能下调BCL-2的表达。

关键词： AML1-ETO融合蛋白 BCL-2 基因表达

三丁酸甘油酯诱导白血病细胞分化及凋亡机制的研究

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中国实验血液学杂志 2005年第5期13卷 774-777页

作者：殷红陈子兴岑建农王玮段卫明姚利苏州大学附属第一医院

为了探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂三丁酸甘油酯(tributyrin,TB)诱导NB4、K562白血病细胞分化和(或)凋亡的作用机制,利用Westernblot方法及逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测TB作用前后NB4、K562细胞组蛋白H3乙酰化水平以及p21WAF1表达量的... 详细信息

为了探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂三丁酸甘油酯(tributyrin,TB)诱导NB4、K562白血病细胞分化和(或)凋亡的作用机制,利用Westernblot方法及逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测TB作用前后NB4、K562细胞组蛋白H3乙酰化水平以及p21WAF1表达量的改变。结果表明:NB4(或K562)细胞经TB0.1mmol/L(或TB0.5mmol/L)作用16小时后可见组蛋白H3乙酰化水平明显上升,并有剂量依赖效应。NB4、K562细胞经TB0.1mmol/L作用后可见p21WAF1mRNA表达上调,且具有剂量依赖效应。p21WAF1mRNA的这种上调开始于TB作用2小时后,16小时达高峰,可维持48小时。结论:TB诱导NB4、K562细胞发生分化和(或)凋亡的机制与TB引起细胞组蛋白高乙酰化和继而上调p21WAF1表达有关。

关键词： tributyrin NB4 K562 组蛋白乙酰化 p21^WAF1

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移植性慢性髓系白血病裸鼠模型的初步建立

中国实验血液学杂志 2011年第6期19卷 1378-1382页

作者：李先敏丁昕章龙珍岑建农陈子兴苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所江苏苏州215006 徐州医学院附属医院放疗科江苏徐州221002

慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是一种起源于造血干细胞的恶性克隆性疾病,CML干细胞被认为是导致疾病发生、发展并最终急变的根源,目前尚缺乏稳定的动物模型证明CML干细胞的存在。本研究旨在通过建立CML裸鼠模型,探讨人... 详细信息

慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是一种起源于造血干细胞的恶性克隆性疾病,CML干细胞被认为是导致疾病发生、发展并最终急变的根源,目前尚缺乏稳定的动物模型证明CML干细胞的存在。本研究旨在通过建立CML裸鼠模型,探讨人CML细胞在BABL/c裸小鼠体内的生物学行为,并使CML干细胞在裸鼠体内富集成为可能。对4至6周龄的BALB/c裸鼠进行切脾(splenectomy,S),环磷酰胺腹腔注射(cytoxan intrap-eritoneal injection,C)及全身亚致死剂量照射(sublethal irradiation,I)等预处理(SCI)后,经尾静脉接种(5-8)×107个人CML慢性期患者单个核细胞。对4至6周龄的BALB/c裸鼠进行全身致死剂量照射(lethal irradiation)后,经尾静脉接种5×106同源裸鼠骨髓细胞和(5-8)×107个人CML慢性期患者单个核细胞。应用RT-PCR、塑胶包埋病理切片以及流式细胞术等检测裸鼠各脏器及骨髓中人CML细胞浸润情况,并比较两种建模方法的优劣。结果表明,CML细胞能浸润至经SCI预处理的裸鼠骨髓体内,但目前成功率还很低,仅为通过BABL/c裸鼠建立人CML动物模型的一个开端。而经致死剂量预处理裸鼠,CML细胞未能浸润至骨髓。结论:人CML慢性期白血病细胞能在经SCI预处理的裸鼠体内形成白血病,为建立CML动物模型寻找到新的方向。

关键词：慢性髓系白血病慢性髓系白血病干细胞动物模型

实时定量PCR技术在转基因肿瘤细胞株筛选中的应用

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中国实验血液学杂志 2005年第6期13卷 1062-1066页

作者：胡绍燕陈子兴赵晔顾伟英岑建农钱军河北北方学院附属第一医院血液科苏州大学附属第一医院江苏省血液病研究所苏州215006

为了探讨实时定量RTPCR技术用于筛选转基因细胞株的可行性,以转染RbAp46基因的细胞株为研究对象,利用优化的SYBRGreenI染料实时定量PCR技术检测RbAp46基因的的表达水平,并与半定量PCR及Westernblot检测结果相比较。结果表明:K562/RbAp46... 详细信息

为了探讨实时定量RTPCR技术用于筛选转基因细胞株的可行性,以转染RbAp46基因的细胞株为研究对象,利用优化的SYBRGreenI染料实时定量PCR技术检测RbAp46基因的的表达水平,并与半定量PCR及Westernblot检测结果相比较。结果表明:K562/RbAp46中RbAp46N为2064.42±253.47,KA562/CMV中RbAp46N为860.94±291.07;单克隆SHG44/RbAp46的细胞株中RbAp46N为234.46±31.08,多克隆SHG44/RbAp46的细胞株RbAp46N为18.17±5.14,SHG44/CMV为1.46±0.54。与半定量RTPCR及Westernblot检测结果比较,三者之间具有非常好的一致性。结论:实时定量RTPCR技术可以用于筛选转基因细胞株,与半定量RTPCR及Westernblot检测方法比较,具有简便、快捷、重复性好、灵敏度高且不需要后期处理等优点。

关键词：实时定量RT-PCR 半定量RT-PCR Western blot RbAp46基因

亚砷酸和柔红霉素对NB4细胞Annexin Ⅱ表达及纤溶活性的影响

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中华血液学杂志 2010年第12期31卷 813-816页

作者：刘艳慧王兆钺戴兰沈文红岑建农张威阮长耿苏州大学附属第一医院、江苏省血研所卫生部血栓与止血重点实验室215006

目的观察亚砷酸（ATO）和柔红霉素（DNR）对急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞膜联蛋白（Annexin,Ann）Ⅱ的表达及其促纤溶活性的影响.方法用ATO和DNR分别处理NB4细胞24～72 h,用流式细胞术和实时定量PCR方法检测细胞表面Ann Ⅱ的表... 详细信息

目的观察亚砷酸（ATO）和柔红霉素（DNR）对急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞膜联蛋白（Annexin,Ann）Ⅱ的表达及其促纤溶活性的影响.方法用ATO和DNR分别处理NB4细胞24～72 h,用流式细胞术和实时定量PCR方法检测细胞表面Ann Ⅱ的表达及其mRNA的水平;用发色底物法测定其促纤溶活性.结果与其他白血病细胞系相比,NB4细胞高表达AnnⅡ,NB4、HL-60、K562和A3细胞Ann Ⅱ阳性细胞率分别为（94.5±1.6）%、（40.1±2.1）%、（36.3±1.5）%和（11.8±2.5）%,其促纤溶活性也最强,代表纤溶活性的吸光度（A）值为0.68±0.02.与ATO、DNR及抗Ann Ⅱ单抗作用后NB4细胞促纤溶活性明显下降,分别下降至原来的60.4%、35.8%和26.0%.经ATO和DNR处理48 h均能下调NB4细胞AnnⅡ[Ann Ⅱ阳性细胞率分别为（55.46±4.72）%和（27.00±6.18）%]及其mRNA的表达.结论 ATO和DNR可通过下调NB4细胞Ann Ⅱ蛋白及其mRNA的表达,纠正NB4细胞的高纤溶状态.

关键词： NB4细胞膜联蛋白Ⅱ 基因表达亚砷酸柔红霉素

成人急性T淋巴细胞白血病T淋巴细胞受体β链基因重排的特点及其在微小残留病定量检测中的意义

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中华检验医学杂志 2010年第5期33卷 409-413页

作者：姚利陈子兴岑建农梁建英冯宇锋刘红吴德沛苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所 215006

目的建立以TCR β基因重排为分子标志,基于ASO引物的RQ-PCR方法,检测成人T-ALL患者的TCR β基因重排,以利于动态监测患者的MRD.方法 20例成人T-ALL患者的初诊DNA标本经多重PCR检测方法设计38条引物,分成3管,分别扩增TCR β基因完全重... 详细信息

目的建立以TCR β基因重排为分子标志,基于ASO引物的RQ-PCR方法,检测成人T-ALL患者的TCR β基因重排,以利于动态监测患者的MRD.方法 20例成人T-ALL患者的初诊DNA标本经多重PCR检测方法设计38条引物,分成3管,分别扩增TCR β基因完全重排和不完全重排,克隆产物经电泳和双色基因扫描鉴定.对其中4例患者进行基因测序和序列比对分析,根据克隆特异性序列信息,利用软件设计4条ASO引物,作为RQ-PCR检测的上游引物,合成通用的Jβ下游引物和TaqMan探针,对患者的随访标本定量监测MRD.结果 20例患者中有17例可检测到克隆性TCR β基因重排,克隆检出率为85.0%（17/20）.其中16例可检测到至少1个Vβ-Jβ完全重排（94.1%,16/17）,7例患者有Dβ-Jβ的不完全重排（41.2%,7/17）,完全Vβ-Jβ和不完全Dβ-Jβ重排之间的比例约为2∶1.双色基因扫描分析显示Jβ2家族的使用频率为73%,Jβ1家族的使用频率为27%,Jβ2家族的使用频率明显高于Jβ1家族.4例患者使用ASO引物RQ-PCR扩增TCR β重排靶基因的标准曲线的斜率为-3.60～-3.27,相关系数＞0.99,敏感性达4×10-5μg/μl,荧光背景信号不显示或较低.监测4例T-ALL患者在疾病治疗各随访时间点的TCR β重排靶基因水平,包括诱导完全缓解、巩固治疗等时间点,RQ-PCR显示其MRD水平随病情的缓解呈逐渐下降的趋势.结论以克隆性TCR β基因重排为靶分子的特异性寡核苷酸引物RQ-PCR方法可对T淋巴细胞系统的恶性克隆进行准确定量,适用于成人T-ALL患者MRD的随访监测.

关键词：白血病淋巴瘤,成人T细胞基因重排,β链T细胞抗原受体肿瘤,残余聚合酶链反应

全反式维甲酸联合地西他滨对U937细胞系和初发老年AML患者的作用及机制研究

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中国实验血液学杂志 2018年第4期26卷 964-971页

作者：董伟民曹阳向立丽林艳刘月岑建农谢晓宝顾伟英苏州大学第三附属医院常州市第一人民医院血液科江苏常州213003 徐州市中心医院血液科江苏徐州221006 苏州大学第一附属医院江苏省血液病研究所白血病实验室江苏苏州215006

目的:分析全反式维甲酸(ATRA)联合地西他滨(DAC)对p16INK4a(p16)和维甲酸受体β(RARβ)的DNA甲基化以及基因表达的影响,探讨2药联合对U937细胞和老年初发急性骨髓系白血病(AML)患者的抗肿瘤作用及其机制。方法:采用实时荧光定量PCR和Wes... 详细信息

目的:分析全反式维甲酸(ATRA)联合地西他滨(DAC)对p16INK4a(p16)和维甲酸受体β(RARβ)的DNA甲基化以及基因表达的影响,探讨2药联合对U937细胞和老年初发急性骨髓系白血病(AML)患者的抗肿瘤作用及其机制。方法:采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测p16和RARβ的表达,通过甲基化特异性PCR分析p16和RARβ启动子的甲基化水平,应用WST-1法和流式细胞术分别检测ATRA联合DAC对U937细胞的增殖作用及其对分化、凋亡和细胞周期的影响。结果:ATRA联合DAC可以诱导DNA去甲基化,增强p16和RARβ的基因表达;2药联合导致U937细胞的生长抑制和分化、凋亡和周期阻滞;此外,对于不能耐受标准化疗的老年AML患者,ATRA联合DAC联合方案在发挥抗肿瘤活性的同时,伴随着p16和RARβ表达水平的上调,以及骨髓原始细胞的减少,且患者显示良好的耐受性。结论:ATRA联合DAC方案,作为诱导分化和去甲基化的联合治疗策略,具有抗AML作用潜能,有助于优化老年AML治疗策略和改善临床预后。

关键词：全反式维甲酸地西他滨急性髓性白血病 U937细胞 p16 RARβ

伴inv(16)/t(16;16)(p13.1;q22)和/或CBFβ-MYH11融合基因的AML患者临床特征及预后分析

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中国实验血液学杂志 2022年第2期30卷 367-372页

作者：王叶敏蔡萍周美佳龚盈盈潘金兰岑建农杨小飞陈苏宁苏州大学附属第一医院血液科江苏省血液病研究所江苏苏州215006

目的:总结伴有inv(16)/t(16;16)(p13.1;q22)的急性髓系白血病(AML)患者临床及实验室特征,并分析影响患者预后的危险因素。方法:回顾性分析2008年1月1日至2019年10月30日苏州大学附属第一医院血液科收治的151例伴有inv(16)/t(16;16)(p13.... 详细信息

目的:总结伴有inv(16)/t(16;16)(p13.1;q22)的急性髓系白血病(AML)患者临床及实验室特征,并分析影响患者预后的危险因素。方法:回顾性分析2008年1月1日至2019年10月30日苏州大学附属第一医院血液科收治的151例伴有inv(16)/t(16;16)(p13.1;q22)和/或CBFβ-MYH11;的AML患者,记录所有患者临床及实验室指标、治疗方案及疗效评估,分析影响其总体生存(OS)、无事件生存(EFS)的相关因素。结果:在151例伴有inv(16)/t(16;16)(p13.1;q22)和/或CBFβ-MYH11;的AML患者中,伴有附加染色体异常占比约27.8%,其中最常见为+22(33例,21.8%),其次为+8(11例,7.3%);完善NGS检查者有112例,最常见的伴随基因突变为KIT突变(34例,30.4%)和FLT3突变(23例,20.5%)。单因素分析显示,初诊时中性粒细胞数(NE)≤0.5×10^(9)/L(P=0.006)、合并K-RAS突变(P=0.002)是影响EFS的因素;初诊时年龄≥50岁(P<0.001)、NE≤0.5×10^(9)/L(P=0.016)是影响OS的因素。多因素分析提示初诊时NE≤0.5×10^(9)/L(P=0.019)是影响OS的危险因素;初诊时骨髓嗜酸粒细胞(BME)细胞比例≥10.00%(P=0.029)是影响EFS的危险因素。结论:初诊高龄、高比例骨髓嗜酸性粒细胞、合并K-RAS突变以及处于粒细胞缺乏状态的患者预后较差,可在早期调整治疗方案,以期改善这类患者预后。

关键词： inv(16)/t(16 16)(p13.1 q22) CBFβ-MYH11融合基因临床特征预后