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Direct contact with bone marrow stromal cells promotes the invasions of SHI-1 leukemia cells

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Chinese Medical Journal 2013年第14期126卷 2731-2735页

作者： LI Zhen-jiang CHEN Zi-xing cen jian-nong HE Jun QIU Qiao-cheng Department of Hematology Second Affiliated Hospital of Nanchang University Nanchang Jiangxi 330006 China Leukemia Research Unit Jiangsu Institute of Hematology First Affiliated Hospital of Soochow University Suzhou Jiangsu 215006 China

Background Interactions of tumor cells with the microenvironment were deemed to promote the tumor invasion and metastasis. CXC chemokine receptor 4 （CXCR4） and extracellular matrix metalloproteinase inducer （EMMPRIN） had reported to participate in this process. However the roles of bone marrow microenvironment in leukemic infiltration were not well investigated. Methods A co-culture system between SHI-1 cells and bone marrow stromal cells （BMSCs） is used to simulate the interactions of leukemic cells with their microenvironment. The trans-matrigel invasion was used to detect the capability of SHI-1 cells invasion. The BMSCs and SHI-1 cells were mixed in a ratio of 1：10 and added to the millicell chamber coated with matrigel. Either the co-culture supernatant or the functional blocking peptide of CXCR4 and EMMPRIN were added to the trans-matrigel invasion system. The expressions of EMMPRIN in SHI-1 cells and BMSCs were detected by RT-PCR. The changes of the expression of matrix metalloproteinase-2, 9 （MMP-2, MMP-9）, tissue inhibitor of metalloproteinase 2 （TIMP-2）, and CXCR4 mRNA in SHI-1 cells were determined by real-time PCR. The concentration of stromal cell derived factor 1 （SDF-1） in serum free supernatant was measured by ELISA. Results Both SHI-1 cells and BMSCs express EMMPRIN. SHI-1 cells could hardly invade the matrigel membrane; the co- culture supernatant did not induce the invasion of SHI-1 cells. When contacting directly with BMSCs, SHI-1 cells invaded to the lower chamber of millicell were significantly increased. The functional blocking peptide of CXCR4 and EMMPRIN could significantly inhibit the invasion triggered by BMSCs. When co-culturing with BMSCs, the expression of CXCR4, MMP-2, MMP-9 and TIMP-2 mRNA in SHI-1 cells were significantly elevated in company with a significantly higher level of SDF-1 in the co-cultured serum-free supernatant. Conclusion The interactions of leukemic cells and BMSCs play important roles in leukemic cell infiltration.

关键词： leukemia bone marrow stromal cells extramedullary infiltration EMMPRIN SDF-1/CXCR4

靶向转录信号传导子与激活子-3基因的RNAi对人结肠癌细胞HCT116侵袭能力的影响

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苏州大学学报（医学版） 2011年第6期31卷 917-921页

作者：蒋剑岑建农邱桥成江阴市人民医院普外科江苏江阴214400 苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所江苏苏州215006

目的探讨抑制靶向转录信号传导子与激活子-3(STAT-3)基因表达对结肠癌细胞增殖以及侵袭转移行为的影响。方法实验分三组:空白对照组、转染NC-siRNA(阴性对照组)及转染特异性STAT-3-siRNA组(RNAi组)。人结肠癌细胞HCT116瞬时转染特异性si... 详细信息

目的探讨抑制靶向转录信号传导子与激活子-3(STAT-3)基因表达对结肠癌细胞增殖以及侵袭转移行为的影响。方法实验分三组:空白对照组、转染NC-siRNA(阴性对照组)及转染特异性STAT-3-siRNA组(RNAi组)。人结肠癌细胞HCT116瞬时转染特异性siRNA,24、48、72 h后MTT法检测三组细胞的增殖活性,48 h后RQPCR检测STAT-3基因mRNA表达。RQ-PCR及细胞免疫化学法检测MMP-9在mRNA和蛋白水平的表达,Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力。结果 RNAi组与其他两组相比细胞增殖受抑明显(均P0.05)。结论下调STAT-3基因表达可有效抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭转移,抑制MMP-9在mRNA和蛋白水平的表达。沉默STAT-3基因抑制结肠癌细胞侵袭能力的机制之一可能是通过下调MMP-9途径。

关键词：转录信号传导子与激活子-3 RNA干扰结肠癌增殖转移

胃癌组织runt相关转录因子3基因表达与其甲基化状态的关系

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中华肿瘤杂志 2008年第5期30卷 361-364页

作者：高楠陈卫昌岑建农苏州大学附属第一医院消化内科 215006 江苏省血液研究所

目的探讨胃癌组织中DNA甲基化调控机制对runt相关转录因子3（Runx3）基因表达的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测70例胃癌组织及其配对的正常胃黏膜组织中Runx3mRNA表达，Westenblot法检测Runx3蛋白表达，甲基化特异性... 详细信息

目的探讨胃癌组织中DNA甲基化调控机制对runt相关转录因子3（Runx3）基因表达的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测70例胃癌组织及其配对的正常胃黏膜组织中Runx3mRNA表达，Westenblot法检测Runx3蛋白表达，甲基化特异性PCR（MSP）法检测Runx3基因启动子的甲基化状态；应用RT-PCR法检测DNA甲基转移酶1（Dnmtl）mRNA表达，分析Runx3基因甲基化与Dnmt1 mRNA表达之间的相关性。结果胃癌组织中Runx3mRNA表达（0．5740±0．3580）明显低于其配对的正常胃黏膜组织（1．7250±0．4080，P〈0．05），胃癌组织Runx3蛋白表达亦明显低于其配对的正常胃黏膜组织（P〈0．05）。在Runx3 mRNA表达下调的56例胃癌组织中，有28例（50．0％）呈启动子高甲基化状态。胃癌组织中，Runx3甲基化阳性者的Dnmt1 mRNA表达量明显高于Runx3甲基化阴性者（P〈0．05），Runx3基因启动子甲基化与Dnmt1转录表达呈正相关（r=0．64，P〈0．05）。结论Runx3基因启动子高甲基化是其基因表达下调的原因之一，可能参与胃癌的发生发展；Dnmt1高表达可能影响Runx3启动子区域甲基化改变。

关键词：胃肿瘤 DNA甲基化 Runx3 Dnmt1 甲基化特异性聚合酶链反应

慢病毒载体Venus在HL-60细胞应用的可行性研究

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中国实验血液学杂志 2013年第3期21卷 576-580页

作者：李争胡绍燕岑建荣陈子兴苏州大学附属儿童医院血液科江苏苏州215003 苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所江苏苏州215003

随着对急性髓系白血病(AML)发生、发展的基因机制深入研究,构建转染效率高且对细胞无毒性作用的载体变得十分重要。为了研究补体C3a的受体蛋白C3aR1(complement component 3a receptor 1)在AML中的作用,构建了携带C3aR1的第三代慢病毒载... 详细信息

随着对急性髓系白血病(AML)发生、发展的基因机制深入研究,构建转染效率高且对细胞无毒性作用的载体变得十分重要。为了研究补体C3a的受体蛋白C3aR1(complement component 3a receptor 1)在AML中的作用,构建了携带C3aR1的第三代慢病毒载体Venus。本研究主要观察Venus慢病毒载体在急性髓系白血病中应用的可行性。采用磷酸钙沉淀法将重组载体Venus-C3aR1转染包装细胞293T细胞,产生慢病毒颗粒,感染HL-60细胞,通过检测绿色荧光蛋白(GFP)观察感染效率,用RT-PCR和流式细胞术鉴定感染后HL-60细胞C3aR1的表达情况。用CCK8法绘制细胞生长曲线、观察细胞诱导分化能力来判断慢病毒载体的细胞毒性作用。结果显示,流式细胞仪(FCM)检测慢病毒感染率>95%,感染后HL-60细胞上C3aR1表达明显增加,病毒包装成功。慢病毒感染前后细胞生长曲线及诱导分化能力无明显变化,说明慢病毒载体不影响HL-60细胞的一般生物学特性,无明显的细胞毒性作用。结论:Venus慢病毒载体对AML细胞株HL-60的感染效率高,能够整合到细胞基因组中实现目的基因的稳定表达。慢病毒感染对细胞无明显的细胞毒性作用,不会干扰靶基因在细胞株中功能,因此慢病毒载体可以为白血病细胞的研究提供可靠的技术支持。

关键词： Venus慢病毒载体 HL-60 感染 AML 细胞毒性

过表达C3AR1基因促进HL-60细胞迁移和侵袭

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中国实验血液学杂志 2017年第1期25卷 1-7页

作者：颜青李争岑建农陈苏宁潘健胡绍燕苏州大学附属儿童医院血液科苏州大学附属第一医院血液科江苏苏州215000

目的:探讨C3AR1基因对人早幼粒细胞白血病细胞株(Human promyelocytic leukemia cells,HL-60)迁移及侵袭的作用和机制。方法:构建HL-60-C3AR1过度表达的细胞株并使其稳转表达。利用transwell小室进行迁移及侵袭实验,应用PCR array和流... 详细信息

目的:探讨C3AR1基因对人早幼粒细胞白血病细胞株(Human promyelocytic leukemia cells,HL-60)迁移及侵袭的作用和机制。方法:构建HL-60-C3AR1过度表达的细胞株并使其稳转表达。利用transwell小室进行迁移及侵袭实验,应用PCR array和流式细胞术探讨其可能的机制。结果:合适C3AR1的HL-60细胞在C3a和SDF-1的作用下,其细胞迁移及侵袭能力较转染空载体细胞明显增强。PCR array检测发现,包括CCL2在内的16个基因显著上调,而4个基因显著性下调,但与CXCR4基因的表达无关。结论:C3a和SDF-1促进过表达的C3AR1细胞迁移和侵袭,其机制与调控CCL2等相关基因有关。

关键词： C3AR1基因急性粒细胞白血病细胞迁移细胞侵袭

RNA干扰对乳腺癌MCF-7细胞株WT1基因表达的抑制作用

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肿瘤 2007年第1期27卷 16-21页

作者：谷敏陈子兴岑建农何军苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所白血病研究室

目的:为探索治疗乳腺癌新途径,研究RNA干扰(RNA interferance,RNAi)对MCF-7细胞株WT1基因表达的抑制作用。方法:设计制备多对针对WT1基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染MCF-7细胞,采用实时定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RQ-PCR)法测定WT1 mRNA的表达,westernblot测定WT1蛋白的表达,流式细胞仪检测加入长春新碱后的MCF-7细胞凋亡率。结果:siRNA能有效抑制WT1基因的表达,但不呈剂量关系,在较低浓度可维持RNAi至少4d时间,WT1基因表达下调的MCF-7细胞凋亡率增加。结论:RNAi能有效抑制MCF-7细胞中WT1基因的表达,同时转染siRNA后细胞对长春新碱敏感。

关键词：乳腺肿瘤 RNA 小干扰基因肾母细胞瘤 MCF-7细胞

组织型基质金属蛋白酶抑制剂-2对白血病SHI-1细胞生长及体内浸润的影响

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中华医学杂志 2006年第34期86卷 2409-2412页

作者：李振江陈子兴岑建农何军南昌大学第二附属医院血液科 215006 苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所 15006 苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所

目的研究组织型基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)过表达对白血病 SHI-1细胞增殖、侵袭能力以及于裸鼠体内浸润、转移能力的影响。方法用流式细胞术检测 SHI-1细胞膜表面TIMP-2的表达。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT 法)及与白血病患者骨髓基... 详细信息

目的研究组织型基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)过表达对白血病 SHI-1细胞增殖、侵袭能力以及于裸鼠体内浸润、转移能力的影响。方法用流式细胞术检测 SHI-1细胞膜表面TIMP-2的表达。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT 法)及与白血病患者骨髓基质细胞共培养跨人工基底膜侵袭实验检测高表达 TIMP-2的 SHI-1细胞体外增殖及侵袭能力的改变。经尾静脉接种进行预处理后的6周龄裸鼠,于接种后第30天处死部分裸鼠,检测 SHI-1细胞在各脏器中浸润生长情况。结果 SHI-1/TIMP-2细胞膜表面 TIMP-2的表达为99.3％±0.1％,显著高于 SHI-1/MSCV 细胞TIMP-2表达(85.9％±2.6％,P<0.05),平均荧光强度也提高2.06倍。SHI-1/TIMP-2细胞体外增殖能力及跨人工基底膜侵袭能力强于 SHI-1/MSCV。接种 SHI-1/TIMP-2细胞的裸鼠平均生存期为33.7 d,而接种 SHI-1/MSCV 细胞的裸鼠为40 d,两者之间平均生存期差异有统计学意义,体内浸润转移现象显著增强。结论膜表面高表达 TIMP-2的人单核细胞白血病细胞株 SHI-1/TIMP-2较 SHI-1/MSCV 细胞具有更强的增殖、浸润和转移能力。

关键词：白血病单核细胞急性基质金属蛋白酶小鼠肿瘤转移

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原位膀胱癌动物模型的建立及应用

癌症 2007年第4期26卷 341-345页

作者：杨慎敏温端改侯建全何军岑建农陈剑华苏州大学附属第一医院泌尿外科江苏苏州215006 江苏省血液研究所江苏苏州215006 苏州大学附属第一医院放射科江苏苏州215006

背景与目的:表浅性膀胱癌术后膀胱灌注丝裂霉素等药物进行化疗,肿瘤仍有较高的复发率。有研究报道往膀胱内灌注小型干扰RNA(siRNA)可抑制裸鼠膀胱肿瘤生长。本研究目的是建立荷人膀胱癌的原位动物模型,通过磁共振成像(magnetic resonanc... 详细信息

背景与目的:表浅性膀胱癌术后膀胱灌注丝裂霉素等药物进行化疗,肿瘤仍有较高的复发率。有研究报道往膀胱内灌注小型干扰RNA(siRNA)可抑制裸鼠膀胱肿瘤生长。本研究目的是建立荷人膀胱癌的原位动物模型,通过磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)监测肿瘤生长过程,并利用此模型评价靶向Survivin的干扰质粒对丝裂霉素的增效作用。方法:直视下经尿道机械损伤BALB/c裸鼠膀胱粘膜,将人膀胱癌细胞T24经尿道种植于25只裸鼠膀胱,建立荷人膀胱癌原位动物模型。以钆-二乙三胺五乙酸作为膀胱造影剂,用MRI监测肿瘤的生长,同时取裸鼠膀胱组织标本行HE染色进行病理学检查。同法建立膀胱癌裸鼠动物模型18只,分为对照组、丝裂霉素组和联合组3组,每周两次膀胱灌注,联合组为靶向Survivin的干扰质粒和丝裂霉素交替用药;膀胱灌注6次后荷瘤膀胱称重。结果:25只裸鼠在种植T24细胞后均形成膀胱肿瘤。种植后7天裸鼠膀胱MRI检查无明显变化,l4、21、28天MRI检查均可发现膀胱不同程度的充盈缺损,MRI图像与肿瘤实际大小吻合。病理检查显示:种植后7天,肿瘤生长于裸鼠膀胱粘膜或浅层肌肉;14～28天局限于肌层;35天时侵及浆膜层。丝裂霉素组和联合组的抑瘤率分别为33.45%、56.34%,联合组优于丝裂霉素组(P<0.05)。结论:成功建立了裸鼠原位膀胱癌动物模型,肿瘤生长基本模拟了人膀胱癌的发生、发展过程;MRI检查可作为对裸鼠膀胱原位肿瘤动态观察的可靠方法。靶向Survivin的干扰质粒增加了丝裂霉素的抗肿瘤作用。

关键词：膀胱肿瘤动物模型磁共振成像 Survivin 裸鼠

慢病毒介导RNA干扰血管内皮生长因子基因增强K562细胞对STI571敏感性

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中国病理生理杂志 2009年第6期25卷 1122-1126页

作者：李丽张日岑建农朱子玲苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所卫生部血栓与止血重点实验室江苏苏州215006 苏州市中心血站江苏苏州215006

目的:探讨慢病毒载体介导RNA干扰(RNAi)抑制血管内皮生长因子(VEGF)基因表达对白血病细胞系K562增殖和凋亡的影响。方法:构建靶向VEGF基因的短发夹状RNA(shRNA)慢病毒载体,与慢病毒包装质粒通过脂质体转染至293T细胞,包装产生的病毒液感... 详细信息

目的:探讨慢病毒载体介导RNA干扰(RNAi)抑制血管内皮生长因子(VEGF)基因表达对白血病细胞系K562增殖和凋亡的影响。方法:构建靶向VEGF基因的短发夹状RNA(shRNA)慢病毒载体,与慢病毒包装质粒通过脂质体转染至293T细胞,包装产生的病毒液感染K562细胞。采用实时荧光定量PCR、Western blotting、ELISA等方法检测RNAi对K562细胞VEGF mRNA和蛋白表达的影响;台盼蓝拒染法和MTT法分析转导VEGF-shRNA对K562细胞增殖的影响;流式细胞术检测经STI571(甲磺酸伊马替尼)作用后细胞凋亡变化情况。结果:构建VEGF基因shRNA慢病毒载体(pRNAT-shRNA),并成功将其导入K562细胞。与K562和K562-con(转导空载体)组细胞相比,转导pRNAT-shRNA的K562-shVEGF细胞VEGF mRNA和蛋白表达均显著下降;生长曲线提示K562-shVEGF细胞增殖速度减慢;在STI571作用下,K562-shVEGF细胞凋亡率较K562和K562-con组细胞明显增高(P<0.05)。结论:慢病毒载体介导的VEGF基因RNA干扰可有效抑制K562细胞增殖,并能够增强细胞对STI571的敏感性。

关键词：血管内皮生长因子 RNA干扰慢病毒载体 STI571 K562细胞