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MyD88在鼠衣原体生殖道感染过程中的作用

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微生物学通报 2010年第6期37卷 937-942页

作者：陈丽丽吴移谋周洲雷磊蔡恒玲钟光明南华大学病原生物学研究所湖南衡阳421001 Department of Mic.obiology and Immunology University of Texas Health Science Center at San Antonio

用1×104IFUs的MoPn经生殖道感染WT、MyD88 KO小鼠,每组一半小鼠于感染后54d,再次感染相同剂量的MoPn。每隔3-4d取生殖道分泌物,测定其中衣原体包涵体的数量。初次感染后80d,处死小鼠,眼眶取血,分离血清,用间接免疫荧光法测其中抗体类... 详细信息

用1×104IFUs的MoPn经生殖道感染WT、MyD88 KO小鼠,每组一半小鼠于感染后54d,再次感染相同剂量的MoPn。每隔3-4d取生殖道分泌物,测定其中衣原体包涵体的数量。初次感染后80d,处死小鼠,眼眶取血,分离血清,用间接免疫荧光法测其中抗体类型及效价;同时分离生殖道,肉眼观察其输卵管、子宫角水肿程度,并做病理切片观察其炎症反应;分离小鼠脾细胞,体外用衣原体EB刺激,测定产生的IL-4、IL-5、IL-17和IFN-γ等细胞因子水平。MyD88 KO小鼠阴道带菌时间与WT组相当,但上生殖道病理反应,尤其是输卵管水肿程度明显比WT组严重。脾细胞细胞因子水平显示,MyD88 KO鼠IFN-γ和IL-17的产生量明显比WT组低,而IL-4和IL-5水平明显高于WT组。血清中各亚类抗体效价无明显区别,但MyD88 KO鼠血清IgG2a/IgG1比值<1,且明显低于WT组。研究结果说明MyD88与抗衣原体免疫无关,但与衣原体引起的炎症损伤密切相关。

关键词：鼠衣原体(MoPn) MyD88 泌尿生殖道感染病理

IFN-γ抗鹦鹉热衣原体急性感染保护作用研究

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中国人兽共患病学报 2017年第2期33卷 98-103页

作者：唐国芳陈丽丽刘良专王川卢兰芬吴移谋南华大学医学院病原生物学研究所衡阳421001 广州市第八人民医院传染病研究所广州510060 中山市人民医院检验医学中心中山528403

目的探讨IFN-γ对鹦鹉热衣原体(c.lamydia psittac.,c.s)的抗感染作用,为进一步阐明机体抗衣原体免疫机制提供参考数据。方法不同浓度的重组人IFN-γ(5ng/mL、25ng/mL和50ng/mL)作用于感染c.s 6Bc.HeLa细胞,48h后计数包涵体数量,并观... 详细信息

目的探讨IFN-γ对鹦鹉热衣原体(c.lamydia psittac.,c.s)的抗感染作用,为进一步阐明机体抗衣原体免疫机制提供参考数据。方法不同浓度的重组人IFN-γ(5ng/mL、25ng/mL和50ng/mL)作用于感染c.s 6Bc.HeLa细胞,48h后计数包涵体数量,并观察包涵体形态的改变。2×10~6 IFUs c.s 6Bc.鼻感染c.7BL/6j.鼠,于感染前、后24h腹腔内注射10μg重组鼠IFN-γ,观察小鼠体重、活动状态、生存率等一般指标,分别于感染后5d和10d处死小鼠,取肝、肺组织进行HE染色检测其病理变化;并取感染后5d的肺组织,匀浆,计数其中c.s包涵体数量。结果感染48h后,c.s 6Bc.5ng/mL、25ng/mL、50ng/mL重组人IFN-γ处理的HeLa细胞中包涵体数量低于对照组(包涵体数分别为(23.8±5.1)×10~6,(10±3.58)×10~6,(8.0±2.22)×10~6,(43.3±11.05)×10~6,衣原体包涵体形状不规则,体积变小。小鼠实验显示,腹腔注射IFN-γ可明显提高c.s 6Bc.染小鼠生存率,并减轻急性临床表现及脏器病变。结论 IFN-γ可发挥早期抗c.s感染的保护作用。

关键词：干扰素-γ 鹦鹉热衣原体急性感染免疫保护

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溶剂挥发法制备甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微球

农药学学报 2012年第5期14卷 557-564页

作者：郑海瑛刘德坤牟洪征杨石有张翠黄彬彬吴刚福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室福州350002

以甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(以下简称甲维盐)为芯材,以生物可降解材料聚乳酸(PLA)为壁材,采用溶剂挥发法制备了甲维盐缓释微球,分别考察了反应温度、芯壁材质量比、聚乳酸质量浓度对微球形态、粒径、载药量和包封率的影响。结果表明:在... 详细信息

以甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(以下简称甲维盐)为芯材,以生物可降解材料聚乳酸(PLA)为壁材,采用溶剂挥发法制备了甲维盐缓释微球,分别考察了反应温度、芯壁材质量比、聚乳酸质量浓度对微球形态、粒径、载药量和包封率的影响。结果表明:在聚乳酸质量浓度和芯壁材质量比值固定不变时,温度保持20℃,微球的粒径、载药量、包封率均达到最佳;而固定其他条件不变,若增加聚乳酸的质量浓度,则微球的载药量、包封率和粒径也随之增加;当芯壁材质量比由1∶1变化到1∶5时,微球粒径和载药量均逐渐减小,而包封率则在芯壁材质量比为1∶1至1∶4之间逐渐增大,最大值为97.8%。电镜扫描结果显示,当芯壁材质量比在1∶3至1∶5之间时,微球呈现光滑完整的球形。差示扫描量热检测结果显示,甲维盐和聚乳酸能够有机地结合为一体。微球释药性研究表明,甲维盐聚乳酸微球具备明显的缓释性能。

关键词：甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微球芯壁材质量比聚乳酸缓释

鼠衣原体在不同遗传背景小鼠中病变差异性与炎症细胞动态变化

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微生物学通报 2017年第8期44卷 1927-1937页

作者：周洲陈建林张洪波陈丽丽李忠玉吴移谋南华大学医学院病原生物学研究所湖南衡阳421001 中南大学湘雅二医院妇产科湖南长沙410011 中南大学湘雅二医院病理科湖南长沙410011

【目的】初步分析鼠衣原体(c.lamydia muridarum,c.)致不同遗传背景小鼠生殖道病变的原因,探讨炎症细胞动态变化在衣原体感染致不同人群病变差异的可能机制。【方法】用2×105 Inc.usion forming units(IFUs)/小鼠的c.剂量经子宫角(Intr... 详细信息

【目的】初步分析鼠衣原体(c.lamydia muridarum,c.)致不同遗传背景小鼠生殖道病变的原因,探讨炎症细胞动态变化在衣原体感染致不同人群病变差异的可能机制。【方法】用2×105 Inc.usion forming units(IFUs)/小鼠的c.剂量经子宫角(Intrauterine inoc.lation,iu)途径分别感染DBA/2j.和A/j.;在感染60 d处死两组小鼠,肉眼观察其输卵管水肿程度,显微镜下观察评估输卵管的扩张程度及炎症反应程度;每组小鼠在感染后3、7、14、21、28、35、42、49、56、60 d分别取阴道分泌物并检测其中衣原体包涵体的数量;在第14天每组各处死5只小鼠,检测上生殖道(输卵管及卵巢)组织匀浆中衣原体包涵体数量及炎症因子水平;同时,在3、28、35 d每组分别处死5只小鼠,显微镜下鉴定病变组织炎症细胞种类及变化。【结果】两组小鼠在感染60 d肉眼观察下的生殖道病变率有明显统计学差异,且两组小鼠病变组织的输卵管扩张程度也具有统计学差异,但炎症反应程度评分无统计学差异;DBA/2j.A/j.组小鼠在阴道分泌物的衣原体包涵体检测及小鼠阳性检出率中并无显著性差异;感染后14 d两组小鼠在上生殖道组织匀浆中的包涵体检出量无统计学差异,但某些炎症因子水平具有统计学差异;感染早期两组小鼠病变组织中嗜中性粒细胞浸润增加,但无明显差异,第28天DBA/2j.鼠病变组织中出现较多嗜酸性粒细胞,并在第35天与A/j.鼠形成统计学差异。【结论】DBA/2j.A/j.鼠在以iu方式感染等量c.后,引起小鼠的生殖道病变差异可能与嗜酸性粒细胞参与的炎症反应有关。

关键词：鼠衣原体小鼠模型输卵管水肿病变率炎症细胞

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大唇香科科化学成分研究

鲁东大学学报（自然科学版） 2011年第3期27卷 261-262,273页

作者：皮科张前军牟明月贵州大学化学与化工学院贵阳550025 贵州茅台酒股份有限公司贵州仁怀564501

以乙醇提取,用硅胶、Sephadex LH-20柱色谱等方法对黔产大唇香科科(Teuc.ium labiosum *** et ***)乙醇提取物乙酸乙酯部位的化学成分进行了分离,根据理化常数和光谱数据对分离到的6种化合物进行了结构鉴定.经鉴定这6种化合物分别为:正... 详细信息

以乙醇提取,用硅胶、Sephadex LH-20柱色谱等方法对黔产大唇香科科(Teuc.ium labiosum *** et ***)乙醇提取物乙酸乙酯部位的化学成分进行了分离,根据理化常数和光谱数据对分离到的6种化合物进行了结构鉴定.经鉴定这6种化合物分别为:正二十八烷(1)、正十六烷酸(2)、正二十二烷酸(3)、达玛烷-20,24-二烯-3β-醇(4)、1,3-二氧杂环戊酮(5)和正十六烷酸单甘油脂(6).化合物1—6为首次从该种植物中分离得到,化合物3—5为首次从该属植物中分离得到.

关键词：唇形科大唇香科科化学成分

硫酸软骨素酶ABc.脑损伤后胶质瘢痕影响的实验研究

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中华神经医学杂志 2011年第6期10卷 609-613页

作者：洪怡瑜李业海寇盛斌杜谋选姜晓丹南方医科大学珠江医院神经外科广东神经外科研究所广东省脑功能修复与再生重点实验室广州510282

目的探讨硫酸软骨素酶ABc.c.ABc.对脑损伤后胶质瘢痕组织的影响。方法38只Wistar大鼠按随机数字表法分成5组：正常对照组（n=2）、模型组（n=9）、1．0U／mLc.ABc.疗组m=9）、2．5U／mLc.ABc.疗组（n=9）、5．0U／mLc.ABc.疗组（n=... 详细信息

目的探讨硫酸软骨素酶ABc.c.ABc.对脑损伤后胶质瘢痕组织的影响。方法38只Wistar大鼠按随机数字表法分成5组：正常对照组（n=2）、模型组（n=9）、1．0U／mLc.ABc.疗组m=9）、2．5U／mLc.ABc.疗组（n=9）、5．0U／mLc.ABc.疗组（n=9），后4组采用自由落体撞击法制作大鼠脑损伤模型，造模后即刻在后3组大鼠局部脑皮层下1mm处注射不同浓度c.ABc.μL，正常对照组不做任何处理。造模后1、2、4周取脑组织标本行HE染色．分别应用免疫组化染色和Western blotting检测硫酸软骨素多聚蛋白糖（c.PGs）的表达。结果HE染色显示损伤后2周模型组大鼠脑皮层大量星形胶质细胞聚集．不同浓度c.ABc.疗组损伤部位的星形胶质细胞聚集较模型组减少，以5．0U／mL c.ABc.疗组明显。免疫组化染色显示模型组，1．0、2．5、5．0U／mLc.ABc.疗组损伤后2周大鼠脑组织c.PGs分泌均较正常对照组增加，差异有统计学意义（职0．05）；与模型组比较，5．0U／mLc.ABc.疗组大鼠脑组织c.PGs分泌减少．差异有统计学意义（P〈0．05）。Westem blotting检测显示造模后1、2、4周不同浓度c.ABc.疗组c.PGs表达均较模型组低．差异有统计学意义（p〈0．05）；模型组和2．5、5．0U／mLc.ABc.疗组大鼠脑组织中c.PGs的表达在造模后1、2、4周逐渐降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论c.ABc.降解胶质瘢痕中主要抑制分子c.PGs，改善脑损伤后局部轴突再生的抑制性微环境．且高浓度（5．0U／mL）c.ABc.现最明显。

关键词：硫酸软骨素酶ABc 颅脑损伤神经再生

紫花苜蓿高温诱导启动子pMsMBF1c.克隆与功能分析

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草业学报 2019年第1期28卷 128-137页

作者：李小冬莫本田牟琼娄芬陈文贵陈光吉张瑜韩永芬贵州省农业科学院草业研究所贵州贵阳550006 贵州金农富平生态农牧科技有限公司贵州松桃554100 大方县农牧局贵州大方551600

植物耐热性受复杂而精细的调控。热诱导启动子能经济、高效的激活或关闭耐热调节途径关键基因的表达,在植物功能基因组研究与现代分子育种技术中起十分重要的作用。以紫花苜蓿耐热候选基因MsMBF1c.编码序列为基础,采用酶切连接的方法... 详细信息

植物耐热性受复杂而精细的调控。热诱导启动子能经济、高效的激活或关闭耐热调节途径关键基因的表达,在植物功能基因组研究与现代分子育种技术中起十分重要的作用。以紫花苜蓿耐热候选基因MsMBF1c.编码序列为基础,采用酶切连接的方法分离获得了其上游1748bp序列,生物信息学分析发现该区域具有HSE与GATA结合位点等2个与植物耐热调节相关的保守模体,此外还有5个ABA应答元件(ABRE、MYB2、MIc.、c.F与DPBF)和2个MYB蛋白结合位点,说明MsMBF1c.了参与植物耐热性调节外,还可能参与其他抗逆性调节。构建pBI121-MsMBF1c.:GUS双元载体转化野生型拟南芥,荧光定量分析热诱导后的转基因植物中GUS与AtMBF1c.因的表达发现其分别上调了5.4与4.8倍,并且高温诱导下转基因植株的组织化学染色分析同样证明MsMBF1c.动子显著受高温诱导。分离获得紫花苜蓿MsMBF1c.动子序列并转化拟南芥,并且从生物信息学、组织化学染色与基因表达等方面验证该序列能显著被高温诱导,为探讨紫花苜蓿耐热调控机制及通过分子生物技术改善紫花苜蓿耐热性提供理论支撑,最终为培育适应南方高温气候条件的紫花苜蓿新品种提供技术储备。

关键词：高温 MBF1c 紫花苜蓿转基因启动子

人脑胶质瘤干细胞移植于表达绿色荧光蛋白裸小鼠的研究

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中华医学杂志 2008年第33期88卷 2317-2320页

作者：吴自成黄强邵义祥薛智谋董军刁艺王爱东兰青苏州大学附属第二医院神经外科 215004 南通大学实验动物中心苏州大学实验动物中心

目的培育表达绿色荧光蛋白（GFP）的裸小鼠，并探讨将其用于人胶质瘤干细胞（HGSc.移植实验研究。方法将c.7BL／6j.GFP转基因小鼠与Nc.裸小鼠进行交配，在继代时严格挑选都表达GFP的无毛雄鼠与有毛母鼠交配，通过肉眼、免疫组织化学... 详细信息

目的培育表达绿色荧光蛋白（GFP）的裸小鼠，并探讨将其用于人胶质瘤干细胞（HGSc.移植实验研究。方法将c.7BL／6j.GFP转基因小鼠与Nc.裸小鼠进行交配，在继代时严格挑选都表达GFP的无毛雄鼠与有毛母鼠交配，通过肉眼、免疫组织化学和荧光显微镜等方法观察GFP在裸小鼠皮肤和脏器中的表达情况，继将HGSc.位移植于表达GFP的裸小鼠，以观察移植瘤的生长情况。结果传至8代的裸小鼠，包括脑在内的全身主要器官和细胞都表达GFP。对用于HGSc.位移植的脑，能清晰辨认出不发光的瘤细胞和发光的宿主细胞。而瘤细胞经人特异白细胞抗体（HLA）连接红色荧光剂（PE）的免疫组织化学染色后，在共聚焦显微镜下可清晰显示与宿主脑细胞的组织学关系。结论用免疫功能健全、表达GFP的转基因鼠与免疫功能缺陷的裸小鼠杂交，可获得脑等组织器官表达GFP的裸小鼠。对其进行HGSc.位移植，因可清晰辨认移植瘤与宿主组织的关系而有望用于肿瘤组织重构的研究。

关键词：神经胶质瘤绿色荧光蛋白转基因小鼠肿瘤移植肿瘤干细胞

白纹伊蚊唾液源34ku-1基因的克隆表达及鉴定

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中国病原生物学杂志 2022年第3期17卷 308-313页

作者：陈素素吴家红程金芝赵久刚商正玲聂映牟荣贵州医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学现代病原生物学特色重点实验室贵州医科大学基础医学院免疫学教研室

目的克隆表达白纹伊蚊唾液腺34ku-1蛋白(Aalb_34 ku-1),并制备鼠抗34ku-1多克隆抗体,用于蚊唾液34ku-1蛋白的检测。方法根据白纹伊蚊罗马株(GenBank:AY826117.1)34ku去除信号肽后的基因序列设计特异性引物,采用RT-Pc.技术从白纹伊蚊安... 详细信息

目的克隆表达白纹伊蚊唾液腺34ku-1蛋白(Aalb_34 ku-1),并制备鼠抗34ku-1多克隆抗体,用于蚊唾液34ku-1蛋白的检测。方法根据白纹伊蚊罗马株(GenBank:AY826117.1)34ku去除信号肽后的基因序列设计特异性引物,采用RT-Pc.技术从白纹伊蚊安顺株雌蚊体内扩增获得34ku-1基因。利用美国国家生物技术信息中心(Nc.I)、瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(ExPASy)等对该蛋白进行生物信息学分析。将该基因构建到原核表达质粒pET-32a(+)中,转染大肠埃希菌BL21(DE3)后经异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析表达结果。镍柱纯化34ku-1重组蛋白,采用Western blot验证纯化蛋白的免疫反应性。用纯化的34ku-1重组蛋白免疫BALB/c.鼠,制备免疫血清,采用间接ELISA法检测血清抗体效价,采用Western blot方法对抗体的特异性进行鉴定。收集雌蚊唾液,采用Western blot方法用制备的多克隆抗体检测蚊唾液34ku-1蛋白。结果成功克隆获得34ku-1基因,生物信息学分析该基因全长888 bp,编码295个氨基酸。编码蛋白的理论分子质量单位为33.6 ku,等电点为5.54。重组质粒pET-32a(+)-34ku-1经Pc.、双酶切及测序验证构建正确。经IPTG诱导的BL21重组菌表达产物主要以包涵体形式存在。经亲和层析法获得高纯度的34ku-1重组蛋白,浓度为0.71 mg/mL。Western blot显示重组蛋白可被抗6-His tag抗体识别,制备的鼠抗34ku-1血清抗体效价为1∶625000,且特异性良好,用34ku-1多克隆抗体Western blot可检测到蚊虫唾液中的34ku-1蛋白。结论成功克隆并表达了白纹伊蚊34ku-1原核蛋白,制备了高效价、高特异性的鼠抗34ku-1多克隆抗体,应用该抗体可检测到雌蚊唾液中的34ku-1蛋白。

关键词：白纹伊蚊唾液腺 34ku-1重组蛋白原核表达多克隆抗体