检索结果-南通市图书馆

p53凋亡刺激蛋白2基因敲除小鼠的构建及其对二乙基亚硝胺诱导肝癌的影响

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中华肝脏病杂志 2020年第9期28卷 784-789页

作者：刘晓霓寇卜心柴梦音陈德喜首都医科大学附属北京佑安医院北京市肝病研究所 100069

目的构建p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)基因敲除小鼠,用该小鼠建立二乙基亚硝胺(DEN)诱导的肝癌模型以研究ASPP2的生物学功能。方法构建单链向导RNA寡聚核苷酸,用CRISPR/Cas9系统制备ASPP2基因敲除小鼠。采用PCR法和测序方法鉴定F0、F1代及... 详细信息

目的构建p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)基因敲除小鼠,用该小鼠建立二乙基亚硝胺(DEN)诱导的肝癌模型以研究ASPP2的生物学功能。方法构建单链向导RNA寡聚核苷酸,用CRISPR/Cas9系统制备ASPP2基因敲除小鼠。采用PCR法和测序方法鉴定F0、F1代及其子代的基因型。用DEN诱导ASPP2+/-小鼠建立肝癌模型。结果PCR和测序结果表明F0代小鼠ASPP2基因敲除成功;F1代小鼠基因型符合ASPP2+/-,获得稳定遗传性;F1代自杂交获得ASPP2+/-小鼠DEN诱导的肝癌模型成功率(7/8与3/8)明显高于野生型。结论基于CRISPR/Cas9系统成功构建ASPP2基因敲除小鼠,ASPP2基因敲除小鼠DEN诱导的肝癌模型成功率明显高于野生型。

关键词：肝细胞癌 p53凋亡刺激蛋白2 基因敲除 CRISPR/Cas9系统二乙基亚硝胺

角蛋白18磷酸化增加结肠癌HCT116细胞自噬并提高其对奥沙利铂的敏感性

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞与分子免疫学杂志 2016年第1期32卷 34-38,43页

作者：闫晓东石英冦卜心朱振宇柴杰陈德喜郭洪亮山东省肿瘤医院外科四病区山东济南250117 济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院山东济南250022 首都医科大学附属北京佑安医院感染科北京100069

目的研究奥沙利铂(OXA)作用下角蛋白18(K18)磷酸化与结肠癌HCT116细胞自噬和凋亡的关系并分析其可能机制。方法 HCT116细胞分别转染空载质粒、野生型K18和33、52磷酸化位点突变的K18质粒(Ser33/52A),用60μmol/L的OXA处理细胞,加入自噬... 详细信息

目的研究奥沙利铂(OXA)作用下角蛋白18(K18)磷酸化与结肠癌HCT116细胞自噬和凋亡的关系并分析其可能机制。方法 HCT116细胞分别转染空载质粒、野生型K18和33、52磷酸化位点突变的K18质粒(Ser33/52A),用60μmol/L的OXA处理细胞,加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)或细胞自噬诱导剂雷帕霉素处理细胞。异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术以及钙黄绿素乙酰甲酯/碘化丙啶(calcein-AM/PI)染色法分析K18及其突变体对细胞凋亡的影响;Western blot法检测K18的磷酸化水平、自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、beclin-1的表达。结果 Ser33/52A质粒的转染可以明显降低K18的磷酸化水平,经过OXA处理后,转染K18质粒组的HCT116细胞的凋亡率显著高于空载质粒转染对照组,而Ser33/52A质粒转染的HCT116细胞的凋亡率明显低于空载体和K18质粒转染的细胞凋亡率,K18质粒转染组细胞自噬明显高于空载转染对照组,而Ser33/52A质粒转染组自噬水平明显降低。结论 K18过表达促进HCT116细胞自噬及其对OXA的敏感性,而K18 Ser33和Ser52磷酸化水平的降低则抑制自噬并降低HCT116细胞的凋亡率。

关键词：结肠肿瘤奥沙利铂 HCT116细胞角蛋白18 磷酸化细胞凋亡

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华肝脏病杂志 2022年第7期30卷 770-776页

作者：柴梦音寇卜心伏志魏飞力豆双双陈德喜刘晓霓首都医科大学附属北京佑安医院北京100069 北京肝病研究所北京100069

目的探讨索拉非尼抗肝癌的分子机制。方法应用肝癌人源肿瘤异体移植(PDX)模型进行索拉非尼药效筛选和验证;采用小动物B型超声和活体激光共聚焦观察PDX血管生成;采用免疫组化观察PDX组织增殖、血管生成相关蛋白的表达;采用实时定量PCR技... 详细信息

目的探讨索拉非尼抗肝癌的分子机制。方法应用肝癌人源肿瘤异体移植(PDX)模型进行索拉非尼药效筛选和验证;采用小动物B型超声和活体激光共聚焦观察PDX血管生成;采用免疫组化观察PDX组织增殖、血管生成相关蛋白的表达;采用实时定量PCR技术观察PDX组织Runt相关转录因子3(RUNX3)基因表达;采用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析。结果用4例PDX进行索拉非尼药效筛选,PDX1对索拉非尼有明显应答,抑制率为68.07%;与对照组相比,索拉非尼明显抑制PDX1相对肿瘤体积(5.76±2.14比11.71±2.87,P<0.05);细胞分裂指数(39.50±7.72比67.10±9.14,P<0.05)以及Ki67表达明显降低(288.60±43.40比531.70±55.60,P<0.05);小动物超声可以检测到PDX1肿瘤有明显血流信号;活体激光共聚焦结果显示索拉非尼能明显减低PDX1肿瘤的总血管长度(1573.00±236.21比2675.03±162.00,P<0.05)和面积(11145.33±1931.97比20105.37±885.93,P<0.05);免疫组织化学结果显示索拉非尼显著下调CD34(27.55±3.76比45.47±5.57,P<0.05)和血管内皮生长因子(VEGF)(16.33±2.86比22.77±3.20,P<0.05)蛋白表达以及减少微血管密度(38.75±6.01比55.50±8.61,P<0.05);Real-time PCR结果显示索拉非尼明显上调RUNX3基因表达(2.14±0.71比1.00±0.36,P<0.05),索拉非尼组RUNX3基因表达量与VEGF阳性细胞比率呈负相关(R^(2)=0.5097)。结论索拉非尼可能通过调控RUNX3-VEGF通路抑制肝癌PDX血管生成进而抑制肝癌生长。

关键词：索拉非尼肝癌血管生成 runt相关转录因子3 人源肿瘤异体移植

黄芪超微粉抗急性肝损伤、抗疲劳作用及黄芪甲苷含量的变化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

现代中医药 2022年第5期42卷 26-32页

作者：柴梦音寇卜心豆双双刘晓霓首都医科大学附属北京佑安医院北京100069 北京肝病研究所北京100069

目的观察黄芪超微粉的抗急性肝损伤、抗疲劳作用及黄芪甲苷含量的变化,为黄芪超微粉的应用提供科学依据。方法采用低温超微粉碎技术将黄芪饮片粉碎成超微粉,利用显微镜和激光粒度仪观察其显微表征和粒度表征,采用高效液相法检测黄芪饮... 详细信息

目的观察黄芪超微粉的抗急性肝损伤、抗疲劳作用及黄芪甲苷含量的变化,为黄芪超微粉的应用提供科学依据。方法采用低温超微粉碎技术将黄芪饮片粉碎成超微粉,利用显微镜和激光粒度仪观察其显微表征和粒度表征,采用高效液相法检测黄芪饮片和黄芪超微粉中黄芪甲苷的含量。取昆明种小鼠,随机分为对照组(Con)、模型组(M)、黄芪饮片组(HQY,10 g·kg^(-1))、黄芪超微粉高剂量组(HQFH,10 g·kg^(-1))、黄芪超微粉中剂量组(HQFM,2 g·kg^(-1))、黄芪超微粉低剂量组(HQFL,0.4 g·kg^(-1))。除对照组和模型组,各药物组提前给药7 d,对照组给予相同体积生理盐水。末次给药后,模型组和各药物组腹腔注射0.1%四氯化碳(CCl 4)橄榄油10 mL·kg^(-1),18 h后眼眶采血,分离血浆,检测AST、ALT;取部分肝组织观察组织病理学改变。另取昆明种小鼠,分组与给药同前,末次给药后,按照体重10%负重,将小鼠置入水中游泳(25℃),并开始计时。当小鼠沉入水中不再浮出水面5 s,停止计时,计算小鼠游泳时间,自眼眶取血,检测血中乳酸含量。对照组不进行游泳,实验终点取血检测乳酸含量。结果显微镜和粒度仪显示黄芪饮片被粉碎成大小不等的细小颗粒,粒径分布范围为0.45~709μm,小于80μm的颗粒累积大于80%。黄芪超微粉(0.4~10 g·kg^(-1))可以减少0.1%CCl_(4)所致的肝坏死和AST,ALT的升高(P<0.05)。黄芪超微粉(0.4~10 g·kg^(-1))可以明显提高小鼠游泳时间(P<0.05),减少小鼠血中乳酸含量(P<0.05)。0.4 g·kg^(-1)黄芪超微粉的保肝作用和抗疲劳作用与10 g·kg^(-1)的黄芪饮片相当。高效液相显示黄芪超微粉的黄芪甲苷含量明显升高。结论与黄芪饮片相比,黄芪超微粉具有更好的保肝耐疲劳的作用,可能与黄芪超微粉中黄芪甲苷成分含量增高有关。

关键词：黄芪急性肝损伤游泳实验中药超微粉黄芪甲苷

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中空纤维肿瘤模型研究进展

中国比较医学杂志 2021年第5期31卷 139-145页

作者：王雪婧尹玲寇卜心柴梦音陈德喜刘晓霓汪晓军首都医科大学附属北京佑安医院中西医结合中心北京100069 首都医科大学附属北京佑安医院北京市肝病研究所北京100069

中空纤维肿瘤模型(hollow fiber tumor model)或中空纤维测定法(Hollow Fiber Assay,HFA)是由美国国家癌症研究所(Nationa Cancer Institute,NCI)设计的一种新型抗癌药物初步筛选模型,可以简单快速、准确可行地进行初步体内疗效的评估... 详细信息

中空纤维肿瘤模型(hollow fiber tumor model)或中空纤维测定法(Hollow Fiber Assay,HFA)是由美国国家癌症研究所(Nationa Cancer Institute,NCI)设计的一种新型抗癌药物初步筛选模型,可以简单快速、准确可行地进行初步体内疗效的评估。近年来已被广泛应用于抗肿瘤药物的研发过程中,并且有了新的改良优化和应用。本文系统综述了中空纤维肿瘤模型在抗肿瘤药物筛选方面的优势特点以及近10年最新应用进展,研究认为,HFA在抗肿瘤药物研究中占据了越来越重要的地位,HFA的改良模型在个体化癌症治疗和机制研究上有着广阔的应用前景。

关键词：中空纤维测定法抗肿瘤药物筛选应用价值体内

黄芪超微粉对环磷酰胺致免疫失衡小鼠免疫功能的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

亚太传统医药 2022年第1期18卷 22-26页

作者：寇卜心柴梦音豆双双刘晓霓首都医科大学附属北京佑安医院北京100069 北京市肝病研究所北京100069

目的:观察黄芪超微粉对环磷酰胺免疫失衡小鼠免疫功能的影响。方法:将5~6周龄昆明种小鼠60只随机分为对照组、模型组、黄芪饮片组(HQY,10g/kg)、黄芪超微粉高剂量组(HQFH,10g/kg)、黄芪超微粉中剂量组(HQFM,2g/kg)、黄芪超微粉低剂量组(... 详细信息

目的:观察黄芪超微粉对环磷酰胺免疫失衡小鼠免疫功能的影响。方法:将5~6周龄昆明种小鼠60只随机分为对照组、模型组、黄芪饮片组(HQY,10g/kg)、黄芪超微粉高剂量组(HQFH,10g/kg)、黄芪超微粉中剂量组(HQFM,2g/kg)、黄芪超微粉低剂量组(HQFL,0.4g/kg),每组10只,雌雄各半。模型组和各药物治疗组小鼠采用80mg/kg环磷酰胺腹腔注射建立小鼠免疫失衡模型,连续注射4天,然后每周强化1次,共强化2次,各药物治疗组小鼠于环磷酰胺腹腔注射当日开始灌胃给药,所有小鼠于末次强化后第1天取材,进行指标检测。采用器官重量法测胸腺指数和脾指数;采用MTT法测脾淋巴细胞增殖能力;采用Elisa法测量脾细胞上清IL-2和INF-γ细胞因子含量;采用流式细胞仪检测外周血和脾脏免疫细胞分群。结果:与对照组比较,模型组小鼠的胸腺指数明显降低(P<0.05),脾指数增高(P<0.05),脾细胞刺激指数降低(P<0.05),脾细胞细胞因子含量降低(P<0.05),外周血和脾脏CD3^(+)细胞增多(P<0.05),CD19^(+)、CD314^(+)细胞减少(P<0.05);与环磷酰胺组比较,黄芪饮片及黄芪超微粉各剂量组小鼠的胸腺指数明显升高(P<0.05),脾指数降低(P<0.05),脾细胞刺激指数升高(P<0.05),脾细胞细胞因子含量增高(P<0.05),外周血和脾脏CD3^(+)细胞减少(P<0.05),CD19^(+)、CD314^(+)细胞升高(P<0.05)。结论:黄芪超微粉可以对抗环磷酰胺所致小鼠的免疫失衡,调节小鼠免疫功能。

关键词：免疫功能黄芪中药超微粉环磷酰胺

ASPP2重组腺病毒通过调控NF-κB信号通路抑制DEN诱导的小鼠肝细胞癌发生

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

实用肝脏病杂志 2024年第2期27卷 169-173页

作者：高明慧柴梦音寇卜心豆双双刘晓霓首都医科大学附属北京佑安医院北京肝病研究所北京市

目的研究ASPP2重组腺病毒(ASPP2-ad)对二乙基亚硝胺(DEN)诱导的小鼠肝细胞癌(HCC)发生的抑制作用及其可能的作用机制。方法采用DEN腹腔注射联合0.005%DEN饮水方法构建小鼠HCC模型。将动物分为DEN处理组和DEN-ASPP2-ad处理组,每组10只。... 详细信息

目的研究ASPP2重组腺病毒(ASPP2-ad)对二乙基亚硝胺(DEN)诱导的小鼠肝细胞癌(HCC)发生的抑制作用及其可能的作用机制。方法采用DEN腹腔注射联合0.005%DEN饮水方法构建小鼠HCC模型。将动物分为DEN处理组和DEN-ASPP2-ad处理组,每组10只。使用小动物超声成像系统动态观察小鼠HCC形成情况,大体记数肝脏肿瘤数量,采用免疫组化法检测肿瘤组织Ki67表达,采用流式多重蛋白定量技术检测小鼠血清IL-1β、IL-6、KC、IL-2和TNFα水平,采用Western blot法检测组织AFP、caspase3、cyclinD1、PCNA、p-IKK、IKK、p-IκB、IκB、p-p65和p65蛋白表达,采用实时定量PCR法检测Nfatc1 mRNA水平。结果DEN诱导24周后,DEN组小鼠肝脏肿瘤数为(9.9±1.9)个,显著多于DEN联合ASPP2-ad组[(3.9±1.2)个,P<0.05];DEN组小鼠Ki67阳性细胞数为(91.4±9.1)个,显著多于DEN联合ASPP2-ad组[(56.6±10.5)个,P<0.05];在实验40周末,DEN组小鼠生存率为65.2%,显著低于DEN联合ASPP2-ad组的90.0%(P<0.05);DEN组小鼠血清ALT和AST水平分别为(271.5±143.8)U/L和(299.3±221.4)U/L,均显著高于DEN-ASPP2-ad干预组[分别为(101.7±44.6)U/L和(124.1±75.0)U/L,P<0.05];DEN联合ASPP2-ad组血清IL-6和TNFα水平分别为(8.1±1.6)MFI和(8.1±1.0)MFI,均显著低于DEN组[分别为(16.3±0.4)MFI和(26.3±5.3)MFI,P<0.05];DEN/ASPP2-ad处理组AFP、Cyclin D1和PCNA表达减弱,而caspase-3表达增强,NF-κB信号通路蛋白(p-IKK、p-IκB和p-p65)表达减弱,p-IKK/IKKα、p-IκB/IκB和p-p65/p65比值也降低,NF-κB下游癌基因Nfatc1表达减弱(P<0.05)。结论ASPP2-ad可能通过调控NF-κB通路显著抑制DEN诱导的炎性增殖反应,阻抑HCC的发生,值得深入研究。

关键词：肝细胞癌 P53凋亡刺激蛋白2 二乙基亚硝胺核因子κB 小鼠

维普期刊数据库博看期刊

p53凋亡刺激蛋白2基因肝脏条件性敲除小鼠的构建和鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

实用肝脏病杂志 2022年第2期25卷 170-174页

作者：寇卜心柴梦音豆双双庞丽君陈德喜刘晓霓首都医科大学附属北京佑安医院/北京市肝病研究所/北京市肝炎与肝癌精准医疗及转化工程技术研究中心北京市100069

目的采用Cre-LoxP系统构建p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)基因肝脏条件性敲除小鼠。方法利用自行设计的sgRNA序列,在ASPP2基因两端插入LoxP序列,构建ASPP2-flox小鼠。采用PCR法和测序法对F0代和F1代小鼠进行基因型鉴定。将ASPP2-flox F1小鼠... 详细信息

目的采用Cre-LoxP系统构建p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)基因肝脏条件性敲除小鼠。方法利用自行设计的sgRNA序列,在ASPP2基因两端插入LoxP序列,构建ASPP2-flox小鼠。采用PCR法和测序法对F0代和F1代小鼠进行基因型鉴定。将ASPP2-flox F1小鼠与特异性表达Alb-Cre的工具鼠交配,获得肝脏敲除ASPP2基因小鼠。采用PCR法进行基因型鉴定。采用Westernblot和免疫组化法检测ASPP2基因肝脏敲除小鼠肝脏ASPP2蛋白表达。结果对F0代和F1代动物基因行PCR和测序结果表明,构建ASPP2-flox小鼠成功;F1代杂合子的基因型为ASPP2^(fl/-);将F1代杂合子与Alb-Cre小鼠进行杂交后,回交ASPP2^(fl/-)小鼠,其基因型为ASPP2^(fl/fl) Cre^(T),即为ASPP2肝脏条件性敲除小鼠;经Western blot和免疫组化法检测显示ASPP2^(fl/fl) Cre^(T)小鼠肝脏ASPP2蛋白表达显著减少。结论基于Cre-LoxP系统成功构建ASPP2基因肝脏条件性敲除小鼠,为后续实验作了良好的基础。

关键词： Cre-LoxP系统 p53凋亡刺激蛋白2 条件性敲除小鼠

维普期刊数据库博看期刊

癌基因Ras及其常见突变与P53协同作用对结肠癌细胞化疗药物敏感性的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

北京医学 2015年第9期37卷 872-875,I0004页

作者：王俊伟石英乔录新寇卜心陈德喜郭洪亮山东省肿瘤医院外科四病区 250117 首都医科大学附属北京佑安医院北京市肝病研究所

目的探讨P53与Ras及常见Ras突变协同作用对结肠癌细胞化疗药物敏感性的影响。方法 P53-/-的结肠癌细胞(HCT116 P53-/-)中分别单转染Ras野生型、Ras V12、Ras N17质粒,另外3组细胞分别转染以上质粒后感染P53腺病毒。用奥沙利铂处理12 h... 详细信息

目的探讨P53与Ras及常见Ras突变协同作用对结肠癌细胞化疗药物敏感性的影响。方法 P53-/-的结肠癌细胞(HCT116 P53-/-)中分别单转染Ras野生型、Ras V12、Ras N17质粒,另外3组细胞分别转染以上质粒后感染P53腺病毒。用奥沙利铂处理12 h后分别用钙黄绿素-AM(Calcein-AM)和碘化丙啶(PI)染色、实时荧光定量PCR(Real-time PCR)、免疫印迹(WB)检测各组凋亡水平。结果 Calcein-AM/PI染色显示,Ras V12转染组凋亡率[(16.8±1.7)%]显著高于Ras[(8.3±1.5)%,P<0.01]和Ras N17转染组[(4.4±1.6)%,P<0.01],Ras N17转染组凋亡率最低(P=0.016);P53腺病毒处理3组凋亡率均显著增高,仍以Ras V12转染组凋亡率[(25.9±2.2)%]为最高,Ras N17转染组最低[(7.6±1.2)%]。Real-time PCR和WB显示,P53存在与不存在条件下,Ras V12转染组Bax m RNA和蛋白表达均显著高于Ras和Ras N17转染组;Bcl-2水平则与Bax水平相反(P均<0.05)。结论 Ras突变体Ras V12过表达能够引起奥沙利铂作用下细胞凋亡的增加,而突变体RAS N17能够降低细胞凋亡;P53与Ras有协同作用,能够提高Ras的促细胞凋亡作用,提高细胞对奥沙利铂化疗药的敏感性。

关键词：结肠癌 Ras P53 基因凋亡