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敲降HER-2和TOP2A增强乳腺癌细胞放射敏感性研究

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中华放射肿瘤学杂志 2016年第6期25卷 652-656页

作者：袁鹏王承正徐本玲杨晗昭孙恒秦鹏吴军召谢天秦丽刘晓郑州大学附属肿瘤医院乳腺外科 450000 郑州大学附属肿瘤医院中心实验室 450000 郑州大学附属肿瘤医院乳腺放疗科 450000

目的研究HER-2和TOP2A对乳腺癌细胞系SK-Br-3的放射敏感性影响,并探讨二者联合作用,为临床研究奠定基础。方法分别构建表达HER-2或TOP2A siRNA的重组质粒,并使用lipofectamine 2000将其转染至乳腺癌细胞SK-Br-3中,敲降HER-2和TOP2A的... 详细信息

目的研究HER-2和TOP2A对乳腺癌细胞系SK-Br-3的放射敏感性影响,并探讨二者联合作用,为临床研究奠定基础。方法分别构建表达HER-2或TOP2A siRNA的重组质粒,并使用lipofectamine 2000将其转染至乳腺癌细胞SK-Br-3中,敲降HER-2和TOP2A的基因表达。2 d后利用蛋白印迹法检测干扰效果,利用流式细胞仪和MTT法分别检测放射处理后细胞凋亡和增殖变化,并检测凋亡和增殖相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Ki-67表达变化。克隆形成实验检测放射敏感性。结果在乳腺癌细胞SK-Br-3中敲降HER-2和TOP2A的表达,放射处理后细胞凋亡率升高,增殖率降低。凋亡标志蛋白活化的Caspase-3表达升高,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达降低。细胞增殖标志蛋白Ki-67表达降低。同时敲降HER-2和TOP2A两个基因时促进凋亡和抑制增殖及克隆形成的作用增强,表明这两个基因存在协同效应。结论敲降HER-2和TOP2A基因在乳腺癌细胞SK-Br-3中的表达后,乳腺癌细胞的放射敏感性提高,细胞凋亡率升高,细胞增殖率降低,克隆形成率降低,且2基因存在协同效应,作用机制可能与Caspase-3、Bcl-2有关的凋亡通路及细胞增殖蛋白Ki-67有关。

关键词： HER-2基因 TOP2A基因 SK-Br-3细胞系放射敏感性

保留盆腔自主神经的腹腔镜经肛拖出直肠癌根治术

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中国当代医药 2011年第17期18卷 18-20页

作者：袁龙李智徐本玲吴惠泽韩广森郑州大学附属肿瘤医院(河南省肿瘤医院)普外科河南郑州450008

目的:分析男性患者采用保留盆腔自主神经的腹腔镜经肛拖出直肠癌根治术后患者的预后和性功能变化情况,评价该手术安全性和可行性。方法:选择本院就诊的中低位直肠癌患者分为腹腔镜组和开腹组,分别进行保留盆腔自主神经的腹腔镜经肛拖出... 详细信息

目的:分析男性患者采用保留盆腔自主神经的腹腔镜经肛拖出直肠癌根治术后患者的预后和性功能变化情况,评价该手术安全性和可行性。方法:选择本院就诊的中低位直肠癌患者分为腹腔镜组和开腹组,分别进行保留盆腔自主神经的腹腔镜经肛拖出直肠癌根治术和开腹直肠癌根治术。以问卷形式调查患者的排尿及性功能情况。结果:开腹组术后性能力障碍者9例(30.0%),腹腔镜组术后性能力障碍者3例(8.3%),差异有统计学意义(P0.05)。结论:腹腔镜经肛拖出直肠癌根治术较开腹直肠癌根治术能更好地保护盆腔自主神经,保留患者的性功能,具有可靠的安全性和可行性,并由于其更微创,易于被患者接受,值得在临床应用。

关键词：腹腔镜直肠癌全系膜直肠切除术神经保护

微小RNA-520e通过调控锌指蛋白367抑制肺癌A549细胞的迁移和侵袭

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中华实验外科杂志 2017年第7期34卷 1163-1165页

作者：徐本玲秦鹏陈广玉袁鹏王振雷润增慈赵鹏袁龙郑州大学附属肿瘤医院生物免疫治疗科 450008 郑州大学附属肿瘤医院普外科 450008

目的探讨微小RNA-520e（miR-520e）对肺癌细胞株A549细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肺癌细胞A549和正常肺上皮细胞BEAS-2B中miR-520e的表达差异，转染miR-520e模拟物（miR-520e mimics... 详细信息

目的探讨微小RNA-520e（miR-520e）对肺癌细胞株A549细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肺癌细胞A549和正常肺上皮细胞BEAS-2B中miR-520e的表达差异，转染miR-520e模拟物（miR-520e mimics）获得miR-520e过表达细胞株，迁移实验及Transwell实验检测miR-520e对A549细胞迁移和侵袭的影响。生物信息学预测miR-520e靶向锌指蛋白367（ZNF367）基因，通过双荧光素酶报告体系进行验证。Western blot检测miR-520e过表达对ZNF367蛋白表达的影响，采用小干扰RNA（siRNA）研究ZNF367对A549细胞迁移和侵袭的影响。结果RT-PCR结果显示，相对于BEAS-2B细胞（1.000±0.135），A549细胞中miR-520e表达量为0.342±0.214（P=0.000）。转染miR-520e mimic后，相对空白对照（NC）组（1.000±0.273），mimic组miR-520e过表达（2.617±0.124，P=0.000）。划痕培养24 h后，与NC组[（100.000±12.347）%]相比，mimic组细胞迁移率为[（43.727±16.746）%]，scramble组细胞迁移率为[（91.722±7.631）%]，过表达miR-520e抑制肺癌细胞迁移（P=0.000）。侵袭实验结果显示，mimic组发生侵袭的细胞数[（36.458±21.301）%]与miR-520e scramble组[（93.783±9.125）%]和NC组[（100.000±15.114）%]比较减少（P=0.000）。荧光素酶报告基因结果显示，转染miR-520e mimics抑制荧光素酶的活性（0.374±0.241，P=0.000）。RT-PCR和Western blot发现miR-520e mimics下调ZNF367的表达（0.426±0.153, P=0.000；0.368 ±0.127，P=0.000）。进一步实验发现，miR-520e靶向ZNF367基因调控肺癌细胞的迁移和侵袭。结论miR-520e通过调控ZNF367抑制肺癌A549细胞的迁移和侵袭。

关键词：微小RNA-520e 锌指蛋白367 肺癌迁移侵袭

三阴性乳腺癌患者外周血及肿瘤组织中CD4^+ T淋巴细胞上Tim-3和PD-1的表达及其临床意义

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河南医学研究 2017年第7期26卷 1173-1176页

作者：徐本玲袁鹏陈广玉王振雷袁龙郑州大学附属肿瘤医院河南郑州450008

目的探讨三阴性乳腺癌(BC)患者外周血、肿瘤组织和癌旁组织中CD4^+T淋巴细胞上Tim-3和PD-1的表达与BC疾病进展的关系。方法收集郑州大学附属肿瘤医院乳腺外科2013年1月至2014年1月收治的52例BC患者全血标本,并同时收集其中7例Ⅲ期患者... 详细信息

目的探讨三阴性乳腺癌(BC)患者外周血、肿瘤组织和癌旁组织中CD4^+T淋巴细胞上Tim-3和PD-1的表达与BC疾病进展的关系。方法收集郑州大学附属肿瘤医院乳腺外科2013年1月至2014年1月收治的52例BC患者全血标本,并同时收集其中7例Ⅲ期患者的肿瘤组织和癌旁组织标本,采用密度梯度离心法分离获得组织中的淋巴细胞,采用流式细胞学方法检测CD4^+T淋巴细胞上Tim-3和PD-1的表达水平。结果 52例BC患者外周血CD4^+T淋巴细胞上Tim-3、PD-1和Tim-3^+PD-1^+的表达水平明显高于其在22例健康人外周血中的表达水平(Tim-3∶2.74%比1.7%,P=0.026 4;PD-1∶17.15%比11.8%,P=0.000 6;Tim-3^+PD-1^+∶2.23%比1.13%,P=0.006 6)。Ⅲ/Ⅳ期BC患者外周血CD4^+T细胞上Tim-3^+PD-1^+的表达水平明显高于Ⅰ/Ⅱ期BC患者(3.23%比1.66%,P=0.021 6)及健康人。BC患者肿瘤组织中CD4^+细胞表面Tim-3,PD-1和Tim-3^+PD-1^+的表达水平高于癌旁组织和外周血。结论 BC患者外周血及肿瘤组织中CD4^+T细胞上抑制性受体Tim-3和PD-1的表达水平升高,可能是CD4^+T细胞参与肿瘤细胞免疫逃逸,促进BC病情进展的机制之一。

关键词：乳腺癌 CD4^+T淋巴细胞 T细胞耗竭 T细胞免疫球蛋白黏蛋白结构域相关分子3 程序性死亡分子1

不同培养液对肾癌患者外周血T淋巴细胞体外扩增及CXC趋化因子受体3表达的影响

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郑州大学学报（医学版） 2020年第6期55卷 775-779页

作者：郭金东李铁鹏徐本玲张成娟杜雪相王瑶高全立郑州大学附属肿瘤医院(河南省肿瘤医院)免疫治疗科郑州450008 郑州大学附属肿瘤医院(河南省肿瘤医院)生物样本中心郑州450008

目的:探讨不同培养液对肾癌患者外周血T淋巴细胞体外扩增及CXC趋化因子受体3(CXCR3)表达的影响。方法:密度梯度离心法分离肾癌患者PBMC,分为4组,分别用4种培养液(GT-T551、GT-T551 H3、ALyS505N、X-VIVOTM15)培养,应用CD3单克隆抗体、... 详细信息

目的:探讨不同培养液对肾癌患者外周血T淋巴细胞体外扩增及CXC趋化因子受体3(CXCR3)表达的影响。方法:密度梯度离心法分离肾癌患者PBMC,分为4组,分别用4种培养液(GT-T551、GT-T551 H3、ALyS505N、X-VIVOTM15)培养,应用CD3单克隆抗体、重组人纤维连接蛋白、白细胞介素2、干扰素γ诱导、活化PBMC。显微镜下观察细胞形态并进行细胞计数,采用流式细胞术检测T淋巴细胞亚群比例及膜表面CXCR3的表达情况。结果:4组细胞培养至第13天状态良好,第16天开始逐渐老化,组间无明显差异。4组细胞增殖倍数均于第16天达到峰值;培养第22、25天,GT-T551 H3组细胞增殖倍数低于ALyS505N组和X-VIVOTM15组(P<0.05)。CD3+、CD3+CD8+及CD3+CD56+T淋巴细胞比例随培养时间的延长逐渐提高,CD3+CD4+T淋巴细胞的比例逐渐下降;GT-T551 H3组的CD3+T淋巴细胞比例在培养第15天低于其他3组(P=0.042),而CD3+CD56+T淋巴细胞比例在培养第11、13、15天高于其他3组(P<0.05)。与活化前相比,各组T淋巴细胞亚群中CXCR3阳性细胞比例均有显著提高,在第13天后降低,呈先高后低的变化趋势(P<0.05)。结论:4种培养液对肾癌患者PBMC形态和最高增殖倍数的影响差异无统计学意义;GT-T551 H3培养液更适用于NKT淋巴细胞的培养;4种培养液均可以提升T淋巴细胞亚群表面CXCR3的表达水平,13 d为较好的培养周期。

关键词：肾癌免疫细胞治疗 T淋巴细胞 CXCR3 趋化因子

程序性死亡分子-1＋T细胞免疫球蛋白黏蛋白结构域相关分子-3＋细胞在结直肠癌患者外周血及组织CD4＋T淋巴细胞中的比例及临床意义

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中华实验外科杂志 2017年第5期34卷 856-859页

作者：袁龙黄涛徐本玲王振雷润增慈赵鹏陈广龙高全立郑州大学附属肿瘤医院普外科 450008 郑州大学附属肿瘤医院生物免疫治疗中心 450008

目的探讨程序性死亡分子-1（PD-1）＋T细胞免疫球蛋白黏蛋白结构域相关分子-3（Tim-3）＋细胞在结直肠癌（CRC）患者外周血和组织CD4＋T淋巴细胞中的比例及其与CRC疾病进展的关系。方法连续采样的方法，收集2012年1月至2013年1月于我院... 详细信息

目的探讨程序性死亡分子-1（PD-1）＋T细胞免疫球蛋白黏蛋白结构域相关分子-3（Tim-3）＋细胞在结直肠癌（CRC）患者外周血和组织CD4＋T淋巴细胞中的比例及其与CRC疾病进展的关系。方法连续采样的方法，收集2012年1月至2013年1月于我院收治的58例确诊CRC患者的外周血标本（CRC组），并同时收集其中7例Ⅲ期患者的肿瘤组织和癌旁组织标本，密度梯度离心法分离获得单个核细胞，采用流式细胞学方法检测PD-1＋Tim-3＋细胞在CD4＋T淋巴细胞中的比例。结果PD-1＋Tim-3＋细胞在CRC组外周血CD4＋T淋巴细胞中的比例明显高于其在20例对照组外周血中的比例（2.1%比1.2%，P=0.012）。PD-1＋Tim-3＋细胞在Ⅲ/Ⅳ期CRC患者外周血CD4＋T淋巴细胞中的比例明显高于其在Ⅰ/Ⅱ期CRC患者（3.5%比1.9%，P=0.024）及对照组中的比例（3.5%比1.2%，P=0.002）。PD-1＋Tim-3＋细胞在CRC肿瘤组织CD4＋T淋巴细胞中的比例明显高于其在癌旁组织（21.58%比5.66%，P=0.002）及外周血（21.58%比2.44%，P=0.001）中的比例。CD4＋PD-1＋Tim-3＋T淋巴细胞分泌干扰素-γ（IFN-γ）的能力低于其他各亚群。结论CRC患者外周血及肿瘤组织CD4＋T淋巴细胞中比例升高的PD-1＋Tim-3＋细胞亚群与T细胞功能耗竭有关，可能是CD4＋T细胞参与肿瘤细胞免疫逃逸，促进CRC病情进展的机制之一。

关键词：结直肠癌 CD4+T淋巴细胞 T细胞免疫球蛋白黏蛋白结构域相关分子-3 程序性死亡分子-1

自体CIK细胞联合化疗治疗转移性肾癌的临床疗效

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肿瘤防治研究 2012年第6期39卷 722-724页

作者：王黎高全立王子兵付晓敏张小杰徐本玲张旭华张勇杨勇豪刘雨晴宋永平河南省肿瘤医院生物治疗科郑州450008 新乡医学院第三附属医院肿瘤科

目的评价化疗联合自体CIK(cytokine-induced killer)细胞治疗转移性肾癌的临床疗效及安全性。方法 19例转移性肾癌患者接受至少1周期的5-氟尿嘧啶和(或)吉西他滨(5-fluorouracil/gemcit-abine,5-Fu/Gem)化疗,化疗结束后接受4～8次CIK细... 详细信息

目的评价化疗联合自体CIK(cytokine-induced killer)细胞治疗转移性肾癌的临床疗效及安全性。方法 19例转移性肾癌患者接受至少1周期的5-氟尿嘧啶和(或)吉西他滨(5-fluorouracil/gemcit-abine,5-Fu/Gem)化疗,化疗结束后接受4～8次CIK细胞治疗,细胞回输后应用3天d1～d3白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)和胸腺肽α-1。结果 19例患者中1例部分缓解(PR),13例稳定(SD),5例进展(PD),疾病总控制率(CP+PR+SD)为73.68%。评价为PD的5例患者无进展生存期(PFS)为(4.43±2.85)月;其余14例患者PFS未到,中位PFS已达11.64月。结论 CIK细胞联合化疗治疗转移性肾癌疗效确切,疾病控制率得到明显提高,患者带瘤生存时间明显延长。

关键词：细胞因子诱导的杀伤细胞免疫治疗化疗转移性肾癌

原发性肺癌患者外周血PD-1淋巴细胞亚型检测与临床预后的关系研究

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四川解剖学杂志 2016年第4期24卷 11-14页

作者：李鹏秦鹏张国伟闫相涛张米娜杨金坡张晓娟王慧娟徐本玲马智勇河南省肿瘤医院/郑州大学附属肿瘤医院呼吸内科郑州450008 河南省肿瘤医院/郑州大学附属肿瘤医院生物治疗科郑州450008

目的检测原发性肺癌患者外周血PD-1淋巴细胞亚型,并进行临床随访,分析其与临床预后的关系。方法采集2015年1月至2016年11月在河南省肿瘤医院呼吸内科诊治的35例可疑原发性肺癌患者的血液学标本,并进行外周血淋巴细胞亚型分析以及PD-1表... 详细信息

目的检测原发性肺癌患者外周血PD-1淋巴细胞亚型,并进行临床随访,分析其与临床预后的关系。方法采集2015年1月至2016年11月在河南省肿瘤医院呼吸内科诊治的35例可疑原发性肺癌患者的血液学标本,并进行外周血淋巴细胞亚型分析以及PD-1表达,然后进行临床随访。结果 35例患者中,31例患者最终病理确诊为原发性肺癌(腺癌23例,鳞癌3例,小细胞肺癌5例),剩余4例患者为炎症。CD3+CD8+T细胞比例数值高、CD4+/CD8+的比值低、PD-1+/PBMC比例高的患者近期疗效越好。未发现治疗前淋巴细胞亚型比例异常患者与正常患者之间存在PFS的差异。结论在本项回顾性小样本研究中,发现原发性肺癌治疗前特定淋巴细胞亚型与近期疗效相关,尤其是PD-1+PBMC比例升高的患者近期疗效更佳。需要进一步前瞻性大样本研究验证。

关键词：原发性肺癌淋巴细胞亚群程序性死亡受体1

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阿霉素心肌病大鼠模型的建立及评价

武汉大学学报（医学版） 2007年第4期28卷 500-503,I0004页

作者：刘洪智高传玉曹林生戚本玲徐予陈岩付海霞河南省人民医院心内科河南郑州450000 华中科技大学同济医学院附属协和医院心内科湖北武汉430022

目的:建立阿霉素心肌病大鼠动物模型,并对其进行评价。方法:35只雄性Wistar大鼠随机分2组:正常对照组(CON组,n=10)和阿霉素心肌病组(ADR-DCM组,n=25)。ADR-DCM模型建立方法:阿霉素2.5 mg/kg,尾静脉注射,每周1次,连续10周。CON组注射相... 详细信息

目的:建立阿霉素心肌病大鼠动物模型,并对其进行评价。方法:35只雄性Wistar大鼠随机分2组:正常对照组(CON组,n=10)和阿霉素心肌病组(ADR-DCM组,n=25)。ADR-DCM模型建立方法:阿霉素2.5 mg/kg,尾静脉注射,每周1次,连续10周。CON组注射相同体积的生理盐水注射液。12周时进行超声检测评价其心功能,氯胺T法检测羟脯氨酸及胶原含量,苦味酸天狼星红染色进行左室胶原特异染色及定量分析,计算胶原容积分数(CVF),并作HE染色观察其组织学变化。结果:ADR-DCM组大鼠死亡率为40%(10/25),CON组无死亡。ADR-DCM组大鼠左室舒张末期内径(LVEDD)及收缩末期内径(LVESD)增加,左室短轴缩短率(FS)明显降低(P<0.01);羟脯氨酸及胶原含量增加(P<0.01);苦味酸天狼星红染色显示左室胶原明显增加,胶原容积分数(CVF)明显增高;病理学结果证实符合心肌病样改变。结论:ADR常规剂量多次静脉注射,可致大鼠发生心脏间质纤维化及心脏收缩功能降低,成功建立ADR-DCM大鼠动物模型。

关键词：动物模型大鼠阿霉素心肌病