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High quality of neural labeling determined by high molecular weight BDA through the thalamic application in the rat

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Neuroanatomical interconnection of the complementary acupoints in the rat hindlimb

中国神经科学学会第十二届全国学术会议

作者： She Chen Wang hui Cui Jingjing Bai Wanzhu Institute of Acupuncture and Moxibustion China Academy of Chinese Medical Sciences

High molecular weight biotinylated dextran amine（BDA） has been used as an anterograde and/or retrograde tracer for many decades. In order to obtain the quality of its labeling, here, we provide a refined protocol how to effectively apply BDA in the central nervous system. Stereotactic injection of BDA was carried out on the ventral posteromedial nucleus of thalamus in the rat, and BDA labeling was stained with fluorescent streptavidin-alexa fluor（AF） 594 and counterstained with fluorescent Nissl stain AF500/525. The labeled neuronal cell bodies and axonal terminals with BDA were clearly detected in the somatosensory cortex on the background of green Nissl staining. In addition, calcium-binding protein parvalbumin（PV） was also examined for observing the correlation of BDA labeling and interneurons in the cortical target, providing an opportunity to study the local neural circuits and their chemical characteristics. Therefore, this refined method is suitable for the visualization of the high quality of BDA labeling as well as the correlation of BDA labeling and other neural markers with fluorescent histochemistry or immunochemistry.

关键词：

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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World Journal of Acupuncture-Moxibustion 2019年第3期29卷 206-209页

作者： hui WANG Jia WANG Jing-jing CUI Dong-sheng XU Chen SHE Shuang WU Wan-zhu BAI Institute of Acupuncture and Moxibustion China Academy of Chinese Medical SciencesBeijing 100700China

Objective:The innervations in Yinlingquan(阴陵泉SP9)and Yanglingquan(阳陵泉GB34)were investigated to explore the neuroanatomical interconnection of the complementary acupoints in the rat ***:A dual neural tracing technique was used,six male Sprague-Dawley rats were included in *** anesthesia with isoflurane,cholera toxin subunit B conjugated with alexa Fluor 488 and 594(CTB-AF488/594)were separately injected into SP9 and GB34 in the same *** days later,the neural labeling was examined in the dorsal root ganglion(DRG),spinal cord,and sympathetic chain at lumbar(L)spinal segments under a laser scanning confocal ***:All neural labeling were present on the ipsilateral side of tracer injection,including sensory,motor and sympathetic postganglionic *** sensory neurons associated with SP9 and GB34 were distributed in the DRG from L2 to L6 and concentrated in L3-L4 and L4-L5 respectively,while most of the double labeled sensory neurons were presented in *** the other hand,the labeled motor neurons for SP9 and GB34 were observed in the dorsolateral part of spinal ventral horn at L2-L4 and L3-L5 respectively,and some of them were double labeled at *** addition,the sympathetic postganglionic neurons related to SP9 and GB34 were found in the lumbar sympathetic chain ***:The similarities of the sensory,motor,and sympathetic innervation of SP9 and GB34 in the rat provide the neuroanatomical evidence to understand the synergetic effect that arise from the stimulation at the complementary acupoints.

关键词： Complementary acupoints Yinlingquan(阴陵泉SP9) Yanglingquan(阳陵泉GB34) Neural tracing technique Motor neurons Sensory neurons

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激光扫描共聚焦光谱成像系统

光学精密工程 2014年第6期22卷 1446-1453页

作者：张运海杨皓旻孔晨晖中国科学院苏州生物医学工程技术研究所江苏苏州215163 江苏省医用光学重点实验室江苏苏州215163

在激光扫描共聚焦显微成像技术基础上引入了光谱成像技术以便区分生物组织中的不同荧光成分.采用分光棱镜对荧光进行光谱展开,在光谱谱面处设置两个可移动缝片形成出射狭缝,两个步进电机带动安装其上的两个缝片设置系统在整个工作波长（... 详细信息

在激光扫描共聚焦显微成像技术基础上引入了光谱成像技术以便区分生物组织中的不同荧光成分.采用分光棱镜对荧光进行光谱展开,在光谱谱面处设置两个可移动缝片形成出射狭缝,两个步进电机带动安装其上的两个缝片设置系统在整个工作波长（400～ 700 nm）内的光谱带宽,其最小光谱带宽优于5 nm.用488 nm激光和低压汞灯实际测量了几条谱线对应的狭缝位置并和理论值做了比较,结果显示实际狭缝位置和理论值的差值均小于0.1 mm.在全光谱和50 μm出射狭缝（对应2.5 nm光谱带宽）对老鼠肾脏组织进行了共聚焦光谱成像实验,获得了老鼠肾脏组织中DAPI标定的细胞核图像和alexa Fluor（R） 488标定的肾脏小球曲管图像,实现了对老鼠肾脏组织不同成分的区分.实验结果表明：提出的系统能够进行共聚焦光谱成像,扩大了共聚焦显微镜的适用范围.

关键词：激光扫描共聚焦显微镜荧光分光棱镜

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基于域名系统知识图谱的CDN域名识别技术

计算机工程与应用 2022年第6期58卷 149-156页

作者：闫志豪刘京菊郭徽郭兵阳国防科技大学电子对抗学院合肥230037 网络空间安全态势感知与评估安徽省重点实验室合肥230037

内容分发网络(content delivery network,CDN)是互联网上的重要基础设施,目前识别CDN域名的方法主要利用域名字符特征、HTTP关键字和DNS记录等,识别范围有限。针对大规模识别CDN域名的问题,提出了基于域名系统知识图谱的CDN域名识别技... 详细信息

内容分发网络(content delivery network,CDN)是互联网上的重要基础设施,目前识别CDN域名的方法主要利用域名字符特征、HTTP关键字和DNS记录等,识别范围有限。针对大规模识别CDN域名的问题,提出了基于域名系统知识图谱的CDN域名识别技术。根据域名系统的特征进行本体建模、数据获取、知识图谱构建,通过分析域名系统相关数据获取CDN服务特征。将CDN域名作为知识图谱域名节点的属性,定义推理规则,通过知识图谱内包含的实体、关系和属性进行关联分析,识别CDN域名。基于该方法对alexa排名前100万域名及其部分子域名进行建模识别,构建了超百万节点和关系的域名系统知识图谱。实验结果表明,该方法在不通过手工识别构建样本集的情况下可以达到88%的分类精度和86%的F1指数。

关键词：域名系统知识图谱本体构建 CDN识别知识推理

Neural interconnection between acupoint“Chéngshān”(承山BL57)and sciatic nerve in the rat

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World Journal of Acupuncture-Moxibustion 2021年第2期31卷 129-135页

作者： Shuang WU Jia WANG Dong-sheng XU hui WANG Ling ZOU Yu-xin SU Yi SHEN Ya-ting GUO Jing-jing CUI Wan-zhu BAI Institute of Acupuncture and Moxibustion China Academy of Chinese Medical SciencesBeijing 100700China

Objective:The aim of this study is to assess the neural interconnection between the acupoint"Chéngshān(承山BL57)"and sciatic nerve from the peripheral nervous system(PNS)to the central nervous system(CNS).Methods:SD rats were systematically examined from the hip to the hind limb along the route of sciatic nerve with regional anatomical technique,and further traced from the BL57 and the trunk of sciatic nerve by the neural tracing technique with cholera toxin subunit B(CTB)and CTB conjugated alexa Fluor 488 and 594(CTB-AF488/594).Results:After regional anatomy,it was found that the sciatic nerve ran down from the hip to the hind limb and sequentially sent out the tibial and sural branches respectively to the deep and superficial layers of *** CTB labeling associated with both BL57 and sciatic nerve distributed in the same spinal segments and definite regions,including the sensory neurons in lumber 3(L3)-lumber 6(L6)dorsal root ganglia(DRGs),transganglionic axons mainly in the L3-L6 spinal dorsal horn,Clarke’s nucleus,and gracile nucleus,as well as motor neurons mainly in the L3-L6 spinal ventral ***,the amount of neural labeling was significantly less in the cases of BL57 than that of sciatic ***:These results indicate that there is distinct sensory and motor interconnection between the BL57 and the sciatic nerve,which may potentially serve for the active role of the BL57 playing in meliorating the disorders of sciatic nerve.

关键词： Acupoint “Chéngshān(承山BL57)” Sciatic nerve Neural interconnection Sensory neuron Motor neuron

CREG调控IGF2R/IGFII内吞抑制人血管平滑肌细胞增殖

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中国病理生理杂志 2011年第9期27卷 1676-1681页

作者：闫承慧栾波黄明方李杰张效林韩雅玲沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科辽宁沈阳110840 南京军区福州总医院心内科福建福州210002

目的:探讨E1A激活基因阻遏子(CREG)抑制人血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的机制。方法:应用逆转录病毒载体pLNCX2-CREG和pSM2-siCREG分别转染VSMCs,G418和puromycin筛选得到稳定转染细胞VSMCs-CREG和VSMCs-siCREG;Western blotting检测转染前后细胞CREG的表达;BrdU和流式细胞术检测CREG表达及对VSMCs增殖的影响。Western blotting和免疫荧光染色检测细胞胰岛素样生长因子Ⅱ受体(IGF2R)的表达;ELISA和RT-PCR检测胰岛素样生长因子Ⅱ(IGFⅡ)的表达;alexa 488标记重组IGFII内吞实验观察CREG表达对IGFII内吞的影响;重组IGF2R和anti-IGF2R中和抗体阻断实验观察IGF2R-IGFII内吞作用对细胞增殖的影响;Western blotting检测细胞增殖信号分子PI3K/Akt和ERK表达,抑制剂阻断研究分析上述信号分子表达变化在细胞增殖中的作用。结果:实验分别得到VSMCs-CREG和VSMCs-siCREG的细胞克隆,VSMCs-CREG中CREG表达增加,而VSMCs-siCREG中CREG表达减少。VSMCs-CREG细胞增殖较正常对照组明显受抑,VSMCs-siCREG细胞增殖显著增加。VSMCs-CREG细胞中IGF2R蛋白在细胞膜上的表达及分布均显著增加,而VSMCs-siCREG细胞中IGF2R在膜上分布明显下降。CREG过表达促进IGF2R对IGFII的内吞作用,抑制了IGFII的分泌。IGFII分泌增加启动了CREG沉默后VSMCs的增殖,PI3K/Akt和MAPK/ERK信号协同参与了IGFII对VSMCs增殖的调控作用。结论:CREG通过调控IGF2R在细胞膜的分布,加速IGFII内吞作用,抑制了体外培养VSMCs的增殖。

关键词： E1A激活基因阻遏子血管平滑肌细胞受体,胰岛素样生长因子

双光子活体成像技术检测缺血性脑卒中超早期血脑屏障损伤

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上海交通大学学报（医学版） 2019年第9期39卷 998-1003页

作者：黄婷婷李妍张月蔓周娜迎范仁辉李佩盈上海交通大学医学院附属仁济医院麻醉科

目的·评估双光子活体成像技术在缺血性脑卒中超早期血脑屏障(blood brain barrier,BBB)损伤的检测效果。方法·取8~12周龄的清洁级C57BL/6健康雄性小鼠12只,随机分为假手术组(Sham组)和大脑中动脉阻塞(middl ecerebral artery occlusio... 详细信息

目的·评估双光子活体成像技术在缺血性脑卒中超早期血脑屏障(blood brain barrier,BBB)损伤的检测效果。方法·取8~12周龄的清洁级C57BL/6健康雄性小鼠12只,随机分为假手术组(Sham组)和大脑中动脉阻塞(middl ecerebral artery occlusion,MCAO)组,每组6只。MCAO组小鼠采用微线栓阻塞大脑中动脉60min,引发小鼠发生缺血性脑卒中(即建立MCAO模型);Sham组小鼠进行与MCAO组小鼠相同的所有手术操作,但不置入微线栓。当MCAO组小鼠缺血60min后,拔除线栓给予再灌注30~60min。随后,2组小鼠均行静脉注射荧光素488偶联的右旋糖苷(alexa-Fluora-488conjugated dextran)和罗丹明6G(rhodamine 6G),分别标记血管和中性粒细胞,并采用四甲基罗丹明-5-马来酰亚胺(tetramethylrhodamine-5-maleimide,TMR)检测BBB的完整性。采用双光子荧光显微镜观察MCAO组小鼠脑卒中前、后脑血管内外荧光强度的实时变化。结果·与发生脑卒中前相比,MCAO组小鼠脑卒中发生后30~60min即可观察到脑血管外TMR荧光强度显著增强(P=0.000),提示发生了示踪剂渗漏。与Sham组相比,MCAO组小鼠发生脑卒中后中性粒细胞在血管内运动速度明显减慢(P=0.000)。结论·双光子活体成像技术可对缺血性脑卒中超早期的BBB损伤进行检测,为临床应用提供了一定的参考价值。

关键词：缺血性脑卒中血脑屏障双光子活体成像

大鼠“肾俞”穴区与肾上腺神经支配的相关性研究

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针刺研究 2018年第7期43卷 414-418页

作者：张知云徐东升王慧佘琛王佳崔晶晶白万柱中国中医科学院针灸研究所北京100700

目的:探索"肾俞"穴与肾上腺相关感觉、交感和运动神经元的分布特征,揭示"肾俞"穴与肾上腺之间的神经解剖学联系。方法:以6只正常SD大鼠作为实验对象,将alexa荧光素488结合霍乱毒素亚单位B(AF 488-CTB)注射在大鼠第2腰椎(L)左侧相当于人... 详细信息

目的:探索"肾俞"穴与肾上腺相关感觉、交感和运动神经元的分布特征,揭示"肾俞"穴与肾上腺之间的神经解剖学联系。方法:以6只正常SD大鼠作为实验对象,将alexa荧光素488结合霍乱毒素亚单位B(AF 488-CTB)注射在大鼠第2腰椎(L)左侧相当于人体肾俞穴的位置,将alexa荧光素594结合霍乱毒素亚单位B(AF 594-CTB)注入肾上腺实质。3d后灌流固定,用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜对脊神经节、交感神经链和脊髓标记到的神经元进行观察。结果:被AF 488-CTB和AF 594-CTB标记的神经元均出现在相应神经组织的左侧,与大鼠"肾俞"穴区和肾上腺相关的感觉神经元主要分布于胸(T)10至L 2节段脊神经节,并分别集中在T 12—T 13和T 11—T 12脊神经节中,T 12—L 1脊神经节中分布有少量的AF 488/594-CTB双标记神经元。在腰部交感神经链仅观察到由AF 488-CTB和AF 594-CTB各自标记的交感节后神经元,而在T 11—T 13节段脊髓侧角中只有AF 594-CTB标记的交感节前神经元。在颈(C)7—C 8以及T 11—L 1节段脊髓前角观察到AF 488-CTB标记的运动神经元。结论:大鼠"肾俞"穴区和肾上腺在感觉和交感神经支配方面存在节段性联系,这种联系可能是针刺"肾俞"穴调节肾上腺功能的神经解剖学途径。

关键词：肾上腺肾俞荧光双标记神经示踪技术感觉神经元交感节前神经元交感节后神经元运动神经元

鹌鹑流感病毒SA受体的分布特点及其在流感病毒生态系统中的作用

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广西医学 2010年第11期32卷 1313-1317页

作者：张增峰罗殿中樊晓晖广西医科大学微生物学教研室南宁市530021 广西医科大学病理学教研室南宁市530021

目的探讨鹌鹑流感病毒受体分布特点及其在流感病毒生态系统中的位置和作用。方法应用亲和组化法检测鹌鹑呼吸道和消化道流感病毒SA受体的分布,用荧光素alexa488标记的禽流感病毒H9N1、人流感病毒H1N1分别与鹌鹑呼吸道、消化道各解剖部... 详细信息

目的探讨鹌鹑流感病毒受体分布特点及其在流感病毒生态系统中的位置和作用。方法应用亲和组化法检测鹌鹑呼吸道和消化道流感病毒SA受体的分布,用荧光素alexa488标记的禽流感病毒H9N1、人流感病毒H1N1分别与鹌鹑呼吸道、消化道各解剖部位结合。结果鹌鹑呼吸道均表达SAα-2,3Gal受体和SAα-2,6Gal受体,SAα-2,3Gal受体在呼吸道气管、支气管、次级支气管和消化道结肠上皮细胞均呈弱阳性分布,而副支气管呈阳性弥漫分布;SAα-2,6Gal受体在呼吸道气管、支气管和次级支气管多呈强阳性弥漫分布,而在副支气管、消化道结肠均为缺乏或仅极少量分布。禽流感病毒H9N1、人流感病毒H1N1均可与呼吸道和消化道上皮细胞结合。结论鹌鹑同时表达SAα-2,3Gal受体和α-2,6Gal受体,能与禽流感病毒和人流感病毒结合,有助于病毒基因重配,可充当产生人类流感大流行潜在的中间宿主。

关键词：甲型流感病毒受体唾液酸 SAα-2,3Gal受体 SAα-2,6Gal受体鹌鹑