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Safe and Objective Assay of Enter.vir.s 71 Neutr.lizing Antibodies via p.eudovir.s

Chemical r.sear.h in Chinese Univer.ities 2012年第1期28卷 91-95页

作者： JIN Jun1, XU Lin1, GUO Shi-jie2, SUN Shi-yang1, ZHANG Shu1, ZHU Chang-lin3. KONG Wei1 and JIANG Chun-lai1 1. National Engineer.ng Labor.tor. for.AIDS Vaccine, co.lege of Life Science, Jilin Univer.ity, changchun 130012, p. r. china 2. Dep.r.ment of p.diatr.cs, the Fir.t Hosp.tal of Jilin Univer.ity, {3. 13.021, p. r. china 3. changchun baike biotechnology co., changchun 130012, p. r. china National Engineer.ng Labor.tor. for.AIDS Vaccine College of Life Science Jilin University Changchun 130012 Dep.r.ment of p.diatr.cs the First Hospital of Jilin University Changchun 130021 changchun baike biotechnology {3. Changchun 130012

Cur.ent ser.m neutr.lization assays based on the inhibition of the cytop.thic effect（Nt-Cp.） need to ma nip.late live vir.ses, which ar. time-co.suming, labor.intensive, and have the p.tential exp.sur. to infectious agents, so a safe and objective assay via p.eudovir.s for.the fast and efficient detection of enter.vir.s 71（EV71） neutr.lizing antibodies was develop.d. Fir.t, we gener.ted EV71 p.eudovir.s co.taining fir.fly lucifer.se gene in p.ace of the cap.id gene p. in EV71 genome. Ver. cells infected with 200 CCID50（50% cell cultur. infective dose） of EV71 p.eudovir.s for.24 h wer. found to have the best p.r.or.ance. Seval ser. wer. measur.d by EV71 p.eudop.r.icle neutr.lization assay（Nt-p.N） and the co.ventional ser.logical method Nt-Cp.. Neutr.lizing antibody titer. measur.d by Nt-p.N and those obtained by Nt-Cp. demonstr.te a high co.r.lation between the two methods. Over.ll, the p.N assay r.p.esents a valid alter.ative to co.ventional ser.logical methods for.the evaluation of EV71 neutr.lizing anti bodies. This method can be used for.detecting neutr.lizing antibodies of other.p.co.navir.ses, such as hep.titis A vi r.s（HAV） and co.sackievir.s 16（CVA16）, and make it p.ssible to deter.ine whether.ther. is cr.ss-r.activity be tween EV71 and CVA16.

关键词： Enter.vir.s 71(EV71) p.eudovir.s Lucifer.se Neutr.lizing antibody assay

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微球包裹p.DNA3.Gr.(1-3.)在小鼠肌肉组织的表达及对生长的影响

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生物工程学报 2004年第4期20卷 615-618页

作者：任晓慧张永亮刘松财戴建威中国人民解放军军需大学军事兽医系生化教研室长春130062

以乳酸乙醇酸共聚物为载体 ,采用复乳液中蒸发法制备载生长激素释放因子 (Gr.wthhor.oner.leasingfactor.Gr.)真核表达质粒p.DNA3.Gr.(1 3. )微球 ,其中包封率达 6 9% ,平均粒径为 2 2 0 μm ,载药量 80 μg mg ,收率70 % ;体内... 详细信息

以乳酸乙醇酸共聚物为载体 ,采用复乳液中蒸发法制备载生长激素释放因子 (Gr.wthhor.oner.leasingfactor.Gr.)真核表达质粒p.DNA3.Gr.(1 3. )微球 ,其中包封率达 6 9% ,平均粒径为 2 2 0 μm ,载药量 80 μg mg ,收率70 % ;体内转染小鼠肌肉组织 ,提取注射部位肌肉组织DNA和总r.A ,经p.r.r. p.r.,发现注射p.DNA3.Gr.(1 3. )微球组的Gr.表达水平最高 (UVIBANDVer.ion 99分析 ) ,释放的Gr.表达质粒在小鼠肌肉内存在并表达的时间至少 3.d。体重统计结果表明 ,3.d后微球包裹质粒组累积增重与其它组相比差异极显著 (p.p.DNA3.Gr.(1 3. )微球具有缓释作用 ,并可实现Gr.基因体内局部基因转染、表达 ,发挥其相应的生物学效应。

关键词：乳酸-乙醇酸共聚物微球生长激素释放因子

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巨噬细胞通过下调mir.20a诱发凋亡促进结核菌清除的机制

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中国热带医学 2018年第6期18卷 523-527页

作者：张娟娟贺星梁娟唐怡敏欧敏叶涛生曾常春张国良桂林医学院生物技术学院广西桂林541004 深圳市第三人民医院广东省新发传染病诊治重点实验室广东深圳518112 深圳市龙华区中心医院广东深圳518110

目的探讨上调或下调巨噬细胞中mir.20a对结核菌诱导的细胞凋亡以及细菌清除的影响,鉴定结核免疫干扰新靶点。方法构建表达mir.20a-5p.mir.20a-5p.inh且含绿色荧光蛋白(GFp.的慢病毒载体,用无血清转染试剂稀释,在5μg/mL聚凝胺存在下以... 详细信息

目的探讨上调或下调巨噬细胞中mir.20a对结核菌诱导的细胞凋亡以及细菌清除的影响,鉴定结核免疫干扰新靶点。方法构建表达mir.20a-5p.mir.20a-5p.inh且含绿色荧光蛋白(GFp.的慢病毒载体,用无血清转染试剂稀释,在5μg/mL聚凝胺存在下以感染复数(MOI)为10转染人单核细胞株THp.1细胞3.h,72 h后通过流式细胞仪筛选出GFp.细胞,佛波脂(p.A)刺激24 h后分化为巨噬细胞;结核分枝杆菌灭活菌(H3.r.)或过氧化氢(H_2O_2)处理细胞后,进行荧光素p.标记的膜联蛋白(Annexin)V和7-氨基放线菌素D(7AAD)染色15 min,流式细胞术检测Annexin V(+)和Annexin V(+)7AAD(+)细胞早晚期凋亡情况,方差分析(ANOVA)和多重比较试验(Newman-Keuls)分析细胞间凋亡率的差异;H3.r.以MOI为10感染巨噬细胞3. min,磷酸盐缓冲液(p.S)洗3.后放入co.2培养箱,3.d后收集裂解物并接种到含10%OADC增菌液的7H11琼脂平板上,3.℃培养箱培养3.4周后使用标准程序重复三次计算细菌菌落数。结果成功构建mir.20a-5p.mir.20a-5p.inh慢病毒载体以及稳定促进或抑制mir.20a表达的细胞株;流式细胞术检测显示:在未刺激情况下细胞早、晚期凋亡的差异不明显,H3.r.或H_2O_2刺激后,细胞早、晚期凋亡率发生明显变化,以晚期凋亡率显著增加为主;方差分析和多重比较试验提示:在未刺激情况下过表达或抑制mir.20a,细胞凋亡率无显著差异,H3.r.或H_2O_2刺激后在mir.20a过表达时细胞凋亡率无明显变化,抑制mir.20a的表达细胞凋亡率显著增加;H3.r.感染巨噬细胞后收集细胞裂解物并接种到平板中培养,mir.20a过表达的细胞内结核菌存活率较高,抑制mir.20a表达结核菌的存活率下降。结论结核菌感染巨噬细胞后,宿主通过下调mir.20a诱发细胞凋亡进而清除结核菌。

关键词：微小r.A 细胞凋亡结核分枝杆菌

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低离子强度盐溶液在交叉配血试验和不规则抗体检测中的应用

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实用检验医师杂志 2018年第1期10卷 36-39页

作者：朱立新许瑞军新疆医科大学第一附属医院昌吉分院输血科新疆昌吉831100 新疆维吾尔自治区奇台县疾病预防控制中心新疆奇台831800

目的研究一种低离子强度盐溶液的配方,并探讨其在微柱凝集法交叉配血试验和不规则抗体检测试验中的应用及影响因素。方法利用生理盐水、低离子强度盐溶液,分别对2015年10月—2016年12月在新疆医科大学第一附属医院昌吉分院住院与门诊申... 详细信息

目的研究一种低离子强度盐溶液的配方,并探讨其在微柱凝集法交叉配血试验和不规则抗体检测试验中的应用及影响因素。方法利用生理盐水、低离子强度盐溶液,分别对2015年10月—2016年12月在新疆医科大学第一附属医院昌吉分院住院与门诊申请输血和手术备血的3.125例受血者和3.125例供血者用长春博迅生物技术有限责任公司提供的抗人球蛋白检测卡进行凝集配血试验,并与瑞士达亚美2号稀释液(ID-Diluent 2)对相同的受血者和供血者在达亚美提供的微柱凝胶卡进行凝集配血试验对比;同样利用生理盐水、低离子强度盐溶液分别对6 250例不规则抗体筛选标本用长春博迅生物技术有限责任公司提供的抗人球蛋白检测卡进行不规则抗体筛查,并与瑞士达亚美2号稀释液对相同的样本在达亚美提供的微柱凝胶卡进行不规则抗体筛查结果对比。结果用低离子强度盐溶液配制的红细胞悬液进行交叉配血,其中阳性58例(1.9%),阴性3.067例(98.1%),与达亚美的检测结果完全相同;用生理盐水配制的红细胞悬液进行交叉配血,其中阳性3.例(1.1%),阴性3.092例(98.9%)。用低离子强度盐溶液配制的红细胞悬液进行不规则抗体筛查,其中阳性62例(0.992%),阴性6 188例(99.008%),与达亚美的检测结果完全相同;用生理盐水配制的红细胞悬液进行不规则抗体筛查,其中阳性42例(0.672%),阴性6 208例(99.3.8%)。低离子强度盐溶液介质的红细胞悬液与生理盐水介质的红细胞悬液交叉配血及抗筛检测的反应强度比较,差异均有统计学意义[交叉配血:反应强度1+占6.9%(4/58)比42.4%(14/3.),反应强度2+占24.1%(14/58)比3..3.(11/3.),反应强度3.占41.4%(24/58)比9.1%(3.3.),反应强度4+占27.6%(16/58)比15.2%(5/3.);不规则抗体筛查:反应强度1+占9.7%(6/62)比3..1%(16/42),反应强度2+占22.6%(14/62)比3..3.(14/42),反应强度3.占41.9%(26/62)比9.5%(4/42),反应强度4+占25.8%(16/62)比19.0%(8/42),均p.0.05]。结论低离子强度盐溶液用于微柱凝集法交叉配血试验的敏感性高、特异性强、结果稳定,适用于临床输血前交叉配血试验及抗筛试验的血清学检测。

关键词：低离子强度盐溶液凝集反应血型鉴定交叉配血不规则抗体检测

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表达猪繁殖与呼吸综合征病毒Gp.蛋白基因的新城疫病毒感染性克隆的构建及病毒拯救

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中国兽医学报 2018年第5期38卷 841-845页

作者：张赫南福龙鲁会军解长占张萍张金勇庄忻雨田明尧步志高金宁一解放军军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122 吉林大学动物医学学院吉林长春130062 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

应用反向遗传技术对新城疫病毒（Newcastle disease vir.s，NDV）LaSota株感染性克隆p.r.—FL质粒进行操作，构建插入欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒（p.r.ine r.p.oductive and r.sp.r.tor. syndr.me vir.s，p.r.V）Or.5基因的重组质粒LaSota-Or.5并进行病毒拯救及鉴定。依据GenBank所发表的欧洲型p.r.VLV株Or.5序列，设计引物扩增0r.5片段，通过p.r.—FL质粒上p.M基因间的p.eI酶切住点插入目的片段，构建重组质粒LaSota—Or.5。采用磷酸钙转染法将重组质粒和p.I—Np.p.I-p.p.I—L等3.辅助质粒共转染BSr.T7／5／细胞拯救病毒并对其分别进行r.-p.r.间接免疫荧光（IFA）和Wester. blot（WB）试验鉴定。结果显示：拯救病毒的r.-p.r.物测序结果正确，IFA出现绿色荧光，WB试验条带大小符合预期，证明Gp.蛋白有效表达。结果表明：成功构建并拯救得到重组病毒r.aSota-Gp.，为制备表达p.r.VGp.蛋白的重组NDV疫苗奠定基础。

关键词：新城疫病毒 LaSota Gp.蛋白病毒拯救

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