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Expression and function analysis of the metallo-thionein-like (MT-like) gene from Festuca rubra in Chlamydomonas reinhardtii chloroplast

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Science china(Life Sciences) 2008年第12期51卷 1076-1081页

作者： HAN SiHai1,2, HU ZhangLi1 & LEI AnPing1 1 institute of Eco-Environment, College of Life Science, Shenzhen university, Shenzhen 518060, china 2 research center for analytical instrumentation, state key lab of industrial control technology, institute of cyber-systems and control, zhejiang university, hangzhou 310058, china 1. institute of Eco-Environment College of Life Science Shenzhen University Shenzhen 518060 China 2. research center for analytical instrumentation State Key Lab of Industrial Control Technology Institute of Cyber-Systems and Control Zhejiang University Hangzhou 310058 China

The cDNA of the metallothionein-like (MT-like) gene from Festuca rubra cv. Merlin was optimized with bias codon of Chlamydomonous reinhardtii chloroplast genome. The optimized MT-like gene was de-livered into C. reinhardtii chloroplast and the transgenic strains expressing MT-like gene was obtained. PCR-Southern blot and RT-PCR-Southern blot analysis demonstrated that the MT-like gene was inte-grated into chloroplast genome of C. reinhardtii and expressed at the transcriptional level. The cad-mium binding capacity of the transgenic C. reinhardtii was determined by hydride generation-atomic fluorescence spectrometry (HG-AFS) and the binding properties were analyzed. Results showed that the transgenic C. reinhardtii expressing the MT-like gene exhibited remarkably higher Cd2+ binding capacity and grew to higher densities at toxic Cd2+ concentrations (40-100 μmol/L) than the wild type strain, and that the IC50 of Cd2+ (3-d treating ) to algal cell growth of transgenic strain was 55.43% higher than that of the wild type strain, indicating that the Cd2+ binding capacity and Cd2+ tolerance of C. reinhardtii was enhanced through the expression of the foreign MT-like gene in chloroplast.

关键词： Chlamydomonas reinhardtii chloroplast metallothionein-like (MT-like) gene cadmium binding properties

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基于双酶切级联信号放大的核酸检测方法

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高等学校化学学报 2018年第7期39卷 1427-1433页

作者：廉翔吴望华范宏亮张勇张涛山西大学化学化工学院太原030006 浙江大学工业控制技术国家重点实验室智能系统与控制研究所分析仪器研究中心杭州310027 浙江省医学科学院卫生学研究所杭州310013

利用茎环结构定位探针构建了一个基于双酶切反应的级联信号放大体系,并将其用于核酸的检测.在该体系中,茎环结构定位探针首先是内切酶Tth EndonucleaseⅣ的作用底物,被剪切后又作为定位探针介导切口酶*** NBI对分子信标实施剪切,将这2... 详细信息

利用茎环结构定位探针构建了一个基于双酶切反应的级联信号放大体系,并将其用于核酸的检测.在该体系中,茎环结构定位探针首先是内切酶Tth EndonucleaseⅣ的作用底物,被剪切后又作为定位探针介导切口酶*** NBI对分子信标实施剪切,将这2步剪切反应结合起来可有效克服切口酶对于目标核酸中特定识别序列的依赖,同时进一步提高了检测灵敏度.实验结果表明,荧光信号与目标DNA浓度的对数值呈线性相关,响应范围为1 pmol/L～1 nmol/L,并且具有良好的识别单碱基变异的能力.此外,本方法序列设计简单,通用性强,仅改变定位探针的部分序列即可实现对不同目标DNA的检测.对掺杂于血清中的目标DNA的检测结果验证了本方法在实际样品检测中的应用潜力.

关键词：级联信号放大分子信标切口酶定位探针核酸检测

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