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冰冻切片染色法观察重组狂犬病病毒对乳鼠脑的感染和定位

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中华实验和临床病毒学杂志 2010年第2期24卷 85-87页

作者：黄莹龚锴唐青中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所脑炎室北京100052 清华大学生命科学院生物膜与膜生物工程国家重点实验室

目的冰冻切片染色法观察重组狂犬病病毒对乳鼠脑的感染和定位。方法将本实验室构建并拯救成功的人用狂犬病疫苗株重组病毒（CTN—GFP）脑内接种1日龄乳鼠和4周龄成年鼠，待感染乳鼠发病后至濒死期，通过心内灌流方法固定并制作脑组织冰... 详细信息

目的冰冻切片染色法观察重组狂犬病病毒对乳鼠脑的感染和定位。方法将本实验室构建并拯救成功的人用狂犬病疫苗株重组病毒（CTN—GFP）脑内接种1日龄乳鼠和4周龄成年鼠，待感染乳鼠发病后至濒死期，通过心内灌流方法固定并制作脑组织冰冻切片，观察重组病毒在感染鼠的大脑海马组织中的绿色荧光蛋白的表达及分布。结果DAPI将所制作的冰冻切片中脑组织内细胞的胞核染成蓝色，在共聚焦显微镜下观察到受感染乳鼠的脑组织海马回位置有大量绿色荧光蛋白的表达。结论通过制作脑组织冰冻切片的方法可以清楚的观察到病毒的感染及其在海马回中的位置，同时为追踪病毒在体内的移行过程提供了一种新方法。

关键词：冷冻超薄切片术狂犬病病毒动物替代试验

联合移植嗅鞘细胞和神经干细胞治疗大鼠胸段脊髓损伤

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生物物理学报 2009年第S1期25卷 274-275页

作者：王干敖强龚锴公衍道张秀芳清华大学生物科学与技术系生物膜与膜生物工程国家重点实验室北京市100084 清华大学玉泉医院北京市100049

脊髓损伤是临床上常见的疾病,每年给家庭和社会带来了沉重的负担。细胞治疗对于补充损伤处细胞和促进功能恢复提供了可能性。

关键词：脊髓损伤嗅鞘细胞神经干细胞联合移植

表没食子儿茶素没食子酸酯通过抑制BACE1转录和翻译减少Aβ生成

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生物物理学报 2013年第7期29卷 486-495页

作者：闫玉芳龚锴马拓张秀芳公衍道清华大学生命科学学院生物膜与膜生物工程国家重点实验室北京100084

研究表明绿茶多酚的主要成分表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)可以改善阿尔茨海默症模型动物的认知功能障碍,但其作用机制尚不清楚。为探讨EGCG对淀粉样肽(amyloid-βpeptide,Aβ)代谢的影响及作用机制,用EGC... 详细信息

研究表明绿茶多酚的主要成分表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)可以改善阿尔茨海默症模型动物的认知功能障碍,但其作用机制尚不清楚。为探讨EGCG对淀粉样肽(amyloid-βpeptide,Aβ)代谢的影响及作用机制,用EGCG孵育N2a/Swe细胞24 h后,利用Western blot和ELISA方法检测淀粉样前体蛋白(amyloid precurson protein,APP)及其切割产物的水平。结果显示,EGCG能够显著降低Aβ的分泌水平,而对APP的蛋白表达水平没有明显影响。此外,EGCG显著降低了β分泌酶BACE1的mRNA水平、蛋白表达水平及BACE1剪切产物sAPPβ的水平。以上结果表明,EGCG能抑制BACE1的转录和翻译,降低其对APP的酶切活性,最终减少Aβ的生成,揭示了EGCG调控Aβ代谢的一个新的作用机制。

关键词：阿尔茨海默症淀粉样肽表没食子儿茶素没食子酸酯 β分泌酶

利用狂犬病病毒反向遗传系统表达铁蛋白的初步研究

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生物物理学报 2009年第S1期25卷 499-500页

作者：刘玲玲龚锴明平刚黄莹唐青公衍道生物膜与膜生物工程国家重点实验室清华大学生物科学与技术系北京海淀区10084 病毒基因工程国家重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所

核磁成像技术(MRI)可以实现活体检测和较高的分辨率,在医学生物学等领域得到了广泛的应用和发展。MRI的应用效果和范围与造影剂的发展密切相关。

关键词： MRI 造影剂铁蛋白狂犬病病毒反向遗传系统

EGCG对AD小鼠海马神经发生和突触密度影响

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东北农业大学学报 2013年第6期44卷 80-85,F0003页

作者：闫玉芳龚锴马拓公衍道清华大学生命科学学院生物膜与膜生物工程国家重点实验室北京100084

为探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对阿尔茨海默症(Alzheimer's disease,AD)模型动物认知功能缺陷、海马神经发生和突触功能损伤影响,6月龄APP/PS1双转基因小鼠和C57小鼠分别给予EGCG(***-1.d-1)或生理盐水腹腔注射,连续给药5周。利... 详细信息

为探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对阿尔茨海默症(Alzheimer's disease,AD)模型动物认知功能缺陷、海马神经发生和突触功能损伤影响,6月龄APP/PS1双转基因小鼠和C57小鼠分别给予EGCG(***-1.d-1)或生理盐水腹腔注射,连续给药5周。利用Morris水迷宫试验和新物体识别试验检测EGCG对AD模型小鼠空间学习记忆能力影响,免疫组织化学方法检测EGCG对AD模型小鼠海马新生神经干细胞数量、新生神经元数量以及突触密度影响。Morris水迷宫结果显示,EGCG能显著缩短AD模型小鼠逃避潜伏期和游泳路径,并显著增加其跨越平台次数(P<0.01)。新物体识别试验结果显示,EGCG能够显著增加AD模型小鼠新物体识别指数(P<0.05)。免疫组化结果显示,EGCG能够显著增加AD模型小鼠海马齿状回区域新生神经干细胞数量和新生神经元数量(P<0.01),同时EGCG也显著增加AD模型小鼠海马CA1区域突触密度(P<0.01)。表明EGCG可以促进AD模型小鼠海马神经发生、提高突触密度,从而提高学习记忆能力,为EGCG用于临床治疗AD及痴呆患者提供新分子机制和理论依据。

关键词：阿尔茨海默症 EGCG 海马神经发生突触密度

APP/APLP2基因双敲除小鼠突触结构的电子显微观察

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电子显微学报 2003年第5期22卷 363-366页

作者：杨光龚锴蒋五玲公衍道张秀芳赵南明清华大学生物科学与技术系生物膜与膜生物工程国家重点实验室北京100084

阿尔茨海默氏病(Alzheimer'sDisease,AD)是老年痴呆的最常见原因。临床表现为认知功能的进行性下降,病理表现为在大脑中出现淀粉样斑,神经纤维缠结以及突触和神经元缺失。淀粉样肽前体蛋白(APP)基因突变导致家族性AD,但到目前还没有对AP... 详细信息

阿尔茨海默氏病(Alzheimer'sDisease,AD)是老年痴呆的最常见原因。临床表现为认知功能的进行性下降,病理表现为在大脑中出现淀粉样斑,神经纤维缠结以及突触和神经元缺失。淀粉样肽前体蛋白(APP)基因突变导致家族性AD,但到目前还没有对APP家族蛋白正常功能的清楚认识。采用APP及其同源基因APLP2双敲除的小鼠作为模型体系,对颌下神经节突触的超微结构进行观察,未见明显异常。研究表明APP不是突触形成的必要因素。

关键词：小鼠突触结构 APP 敲除神经节颌下进行性显微观察同源基因前体蛋白

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小鼠颌下神经节突触发育的超微结构观察

电子显微学报 2004年第6期23卷 626-629页

作者：龚锴杨光蒋五玲张秀芳赵南明公衍道清华大学生物科学与技术系生物膜与膜生物工程国家重点实验室北京100084

应用电镜技术观察刚出生和一年龄小鼠颌下神经节的超微结构。观察到二者在神经节前轴突、神经节细胞胞体、雪旺细胞中超微结构的差异。

关键词：神经节观察颌下超微结构小鼠突触雪旺细胞发育前轴电镜技术

壳聚糖/鞣花酸/红细胞膜脂止血复合海绵的制备与评价

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中国组织工程研究 2013年第12期17卷 2172-2176页

作者：贺庆敖强王臻刘伟强龚锴公衍道张秀芳清华大学生命科学学院生物膜与膜生物工程国家重点实验室北京市100084 清华大学玉泉医院神经外科北京市100049 深圳清华大学研究院深圳市生物医用材料及植入器械重点实验室广东省深圳市518057

背景:部分文献报道壳聚糖对严重创伤的止血效果有限,因此以壳聚糖为基础止血剂的促凝血活性还有待进一步增强。目的:制备一种新型的壳聚糖/鞣花酸/红细胞膜脂复合海绵,评价其促凝血活性和细胞毒性。方法:通过冻干法制备壳聚糖海绵和壳... 详细信息

背景:部分文献报道壳聚糖对严重创伤的止血效果有限,因此以壳聚糖为基础止血剂的促凝血活性还有待进一步增强。目的:制备一种新型的壳聚糖/鞣花酸/红细胞膜脂复合海绵,评价其促凝血活性和细胞毒性。方法:通过冻干法制备壳聚糖海绵和壳聚糖乙酸盐海绵,然后再通过静电吸附法制备壳聚糖/鞣花酸/红细胞膜脂复合海绵。血浆复钙时间法观察3种海绵的促凝血活性,并检测3种海绵对SD大鼠肝脏的止血效果及对L929细胞的毒性。结果与结论:壳聚糖/鞣花酸/红细胞膜脂复合海绵组的血浆复钙时间、出血时间、失血量均显著少于壳聚糖海绵组和壳聚糖乙酸盐海绵组(P<0.01)。细胞实验显示壳聚糖/鞣花酸/红细胞膜脂复合海绵无细胞毒性。说明壳聚糖/鞣花酸/红细胞膜脂复合海绵具有良好的促凝血活性且无细胞毒性。

关键词：生物材料壳聚糖鞣花酸红细胞膜脂海绵止血国家自然科学基金

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氨丁三醇在阿尔茨海默病治疗中的作用

实用医学杂志 2009年第10期25卷 1575-1577页

作者：牛颖宋波龚锴张秀芳赵南明公衍道生物膜与膜生物工程国家重点实验室清华大学生物科学与技术系北京市100084 清华大学医学院北京市100084

目的:探讨淀粉样蛋白β的通道抑制剂氨丁三醇在阿尔茨海默病治疗中的可能作用。方法:分别以过量表达swedish突变的淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)的N2a细胞和转入swedish突变APP和Presenilin 1的转基因小鼠为模型,在体... 详细信息

目的:探讨淀粉样蛋白β的通道抑制剂氨丁三醇在阿尔茨海默病治疗中的可能作用。方法:分别以过量表达swedish突变的淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)的N2a细胞和转入swedish突变APP和Presenilin 1的转基因小鼠为模型,在体内和体外水平对氨丁三醇对凋亡相关指标的作用进行了研究。结果:低浓度的氨丁三醇未改变细胞的存活,但降低了细胞内活性氧的水平,与此同时,线粒体膜电位没有明显变化。体内的数据显示,氨丁三醇对转基因小鼠神经元的生长无显著影响,但可以升高双转小鼠皮层内磷酸化erk1/2的水平。结论:氨丁三醇对抑制淀粉样蛋白β引起的部分凋亡相关指标变化有一定作用,其在临床中的应用有待进一步探讨。

关键词：阿尔茨海默病氨丁三醇淀粉样蛋白β