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HepG2细胞胰岛素抵抗模型建立及盐酸小檗碱改善胰岛素抵抗的实验研究

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中国药理学通报 2016年第12期32卷 1750-1754页

作者：龚菂李芬邹欣王定坤陆付耳王开富华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合研究所湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院实验医学研究中心湖北武汉430030

目的建立HepG2(人肝胚胎瘤细胞)胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)细胞模型,并在该模型上研究小檗碱改善IR的效应。方法用25 mmol·L^(-1)高糖,并分别用10^(-9)、10^(-8)、10^(-7)、10^(-6)、10^(-5)、10^(-4)mol·L^(-1)胰岛素处理,诱导HepG2细胞产生IR;对2-NBDG(荧光素标记葡萄糖)与Hep G2细胞孵育浓度设定为:50、100、200、400、600、800μmol·L^(-1)、孵育时间设定为:20、40、60、80、100 min,拟筛选最佳胰岛素处理浓度、2-NBDG与HepG2最佳孵育浓度和最佳孵育时间,通过检测细胞培养液中葡萄糖的消耗量及细胞对葡萄糖的摄取量作为判定模型成功的标志;用二甲双胍、盐酸小檗碱干预模型细胞,研究盐酸小檗碱在细胞水平上改善IR的效应。结果 6种浓度的胰岛素均可不同程度诱导HepG2产生IR,虽然10^(-5)、10^(-4)mol·L^(-1)剂量最明显,但细胞死亡较多,以10-6mol·L^(-1)剂量制模有效且细胞成活率高,与正常组比较差异具有统计学意义;当2-NBDG与HepG2细胞孵育浓度大于100μmol·L^(-1)时,细胞荧光强度与正常组差异有显著性,孵育时间超过20 min荧光强度与正常组比较有明显差异,超过100 min,细胞内荧光有明显淬灭衰减现象;盐酸小檗碱、二甲双胍能明显增加细胞培养上清液中葡萄糖的消耗及细胞对葡萄糖的摄取,与模型组比较差异具有统计学意义。结论用HepG2制作IR细胞模型时,选择10^(-6)mol·L^(-1)剂量的胰岛素;2-NBDG孵育浓度选择为200μmol·L^(-1)、2-NBDG孵育时间选择为80min较为适宜,盐酸小檗碱及二甲双胍对HepG2细胞IR具有明显的改善作用。

关键词：盐酸小檗碱 HepG2细胞胰岛素抵抗细胞模型葡萄糖摄取实验研究

补肾通脉方对伴胰岛素抵抗的多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗及排卵障碍的影响

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中国中西医结合杂志 2009年第8期29卷 733-736页

作者：李琼黄冬梅陆付耳谢阳徐丽君邹欣龚菂华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合研究所武汉430030

目的建立由硫酸普拉睾酮钠联合高脂饮食诱导的伴胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)的大鼠模型,并观察补肾通脉方对模型大鼠IR和排卵障碍的影响。方法23日龄雌性SD大鼠皮下注射硫酸... 详细信息

目的建立由硫酸普拉睾酮钠联合高脂饮食诱导的伴胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)的大鼠模型,并观察补肾通脉方对模型大鼠IR和排卵障碍的影响。方法23日龄雌性SD大鼠皮下注射硫酸普拉睾酮钠每天9mg/100g,共20天,联合高脂饮食喂养80天,建立伴IR的PCOS大鼠模型,成模大鼠随机分为模型组和治疗组。治疗组大鼠以补肾通脉方进行干预。另设15只同龄大鼠为正常组。HE染色观察大鼠卵巢的组织学改变及排卵情况;葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖(FBG);放射免疫法测定空腹血清胰岛素(FINS)、睾酮(T)、雌二醇(E2)、孕酮(P)、促卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)的含量。结果与正常组比较,模型组大鼠平均排卵数、排卵率、胰岛素敏感指数(ISI)及FSH均明显降低(均P<0.01),FBG、FINS、T、E2和LH浓度均显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,治疗组大鼠平均排卵数及排卵率均明显增加(均P<0.01),ISI、FSH显著升高(P<0.01),FINS、T和E2浓度均显著降低(P<0.01)。结论硫酸普拉睾酮钠联合高脂饮食能成功建立伴IR的PCOS大鼠模型,补肾通脉方对模型大鼠的IR有改善作用,并可促进其排卵。

关键词：多囊卵巢综合征胰岛素抵抗排卵障碍补肾通脉方

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对计算机课程混合式教学满意度的现状调查

计算机教育 2019年第2期 95-98页

作者：蔡进龚菂湖北第二师范学院计算机学院湖北武汉430205 华中师范大学国家数字化学习工程技术研究中心湖北武汉430079

提出并分析某地方高校计算机专业的214名本科生对计算机专业课程混合学习的满意度,阐述学生总体上对混合学习的接纳态度及后续开展混合式教学面临的问题和挑战,提出相应的建议。

关键词：高校教学混合式教学学习满意度问卷调查

Effects of Bushen Tongmai Recipe(补肾通脉方) on Protein Kinase Bα Expression in Polycystic Ovary Rats with Insulin Resistance

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Chinese Journal of Integrative Medicine 2010年第4期16卷 324-330页

作者：李琼黄冬梅陆付耳谢阳徐丽君邹欣龚菂王增四 Institute of Integrated Traditional and Western Medicine Affiliated to Tongji HospitalTongji Medical CollegeHuazhong University of Sciences and Technology

Objective： To observe the effects of Bushen Tongmai Recipe （补肾通脉方, BSTMR） on mRNA and protein expressions of protein kinase B alpha （PKB α） in hepatic, adipose, muscular, and ovarian tissues of polycystic ovary（PCO） rats with insulin resistance （IR） and to explore the possible molecular mechanism of BSTMR in treating IR and ovulation dysfunction. Methods： Female 22-day-old SD rats were injected subcutaneously with sodium prasterone sulfate （9 mg.100g^-1.d^-1） for 20 days and fed with high-fat diet for 80 days to induce PCO rats with IR. Then, the PCO rats were randomly divided into the model group （n=23） and the treated group （n=21）. The treated group was administered with BSTMR for 2 weeks. Meanwhile, a group with 15 rats of the same age was used as the control group. The histological changes in the ovaries were examined. Fasting blood glucose （FBG） was determined by the glucose oxidase method. Serum fasting insulin （Fins） was determined by radioimmunoassay （RIA）. The mRNA level of PKB ~ was measured by reverse transcription polymerase chain reaction （RT-PCR）. Immunohistochemistry staining and Western blot analysis were employed to detect the protein expression in target tissues. Results： Compared with the control group, the ovaries in the model group showed multiple follicular cysts, levels of FBG and Fins in the model group increased markedly （P〈0.05 or P〈0.01, respectively）, and the insulin sensitive index （ISI） decreased obviously （P〈0.01）. The mRNA and protein expressions of PKB e in target tissues in the model group were dramatically lower than those in the control group （P〈0.05 or P〈0.01）. Compared with the model group, the stratum granulosum of the ovarian follicle in the treated group increased markedly, the level of Fins in the treated group decreased obviously （P〈0.01）, ISI in the treated group improved markedly （P〈0.01）, and the mRNA and protein expressions of PKBα in target tissues of the treated rats were elevated significantly （P〈0.05 or P〈0.01）. Co

关键词： polycystic ovary insulin resistance Bushen Tongmai Recipe protein kinase Bα

李时珍医药文化——中华传统文化的继承和发扬

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中西医结合研究 2009年第2期1卷 98-99页

作者：黄光英龚菂华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合研究所武汉430030

中国明代伟大的医药学家李时珍,竭尽毕生精力,博采众家之长完成的不朽巨著,被世界誉为'绿色圣经',不仅总结了16世纪以前的药学研究及临床实践的多方面成果,纠正了历代本草的不少错误,为后世医药学的发展做出了重大贡献,而且将医药学与... 详细信息

中国明代伟大的医药学家李时珍,竭尽毕生精力,博采众家之长完成的不朽巨著,被世界誉为'绿色圣经',不仅总结了16世纪以前的药学研究及临床实践的多方面成果,纠正了历代本草的不少错误,为后世医药学的发展做出了重大贡献,而且将医药学与文学、哲学、史学、天文学、地理学、生物学、采矿学、化学乃至民俗学、语言学等内容融会贯通,使其不仅包含了丰富的科学知识,还具备了很强的文学性、艺术性,充分反映了我们祖国医学与传统文化的血脉关系,是中华传统文化的继承与发扬.

关键词：李时珍传统文化医药文化医药学家中华《本草纲目》临床实践历代本草

补肾通脉方对伴胰岛素抵抗的多囊卵巢综合征大鼠IRS-1表达的影响

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华中科技大学学报（医学版） 2010年第2期39卷 165-170页

作者：谢阳黄冬梅李琼陆付耳徐丽君邹欣龚菂邬姗华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合研究所武汉430030

目的观察补肾通脉方对伴胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syn-drome,PCOS)大鼠胰岛素靶器官中胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)表达的影响,探讨补肾通脉方改善伴IR的PCOS的机制。方法23日龄雌性SD大鼠皮下注射硫酸普拉睾酮钠9 mg/(100 g.d)共20 d,联合高脂饮食喂养80 d建立IR的PCOS大鼠模型。成模大鼠随机分为模型组(27只)和中药组(23只),另设13只正常组。中药组以补肾通脉方干预。各组大鼠动情后期于门静脉推注胰岛素前后各处死一部分。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测各组大鼠肝脏、脂肪组织IRS-1 mRNA表达,免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠肝脏、脂肪组织中IRS-1蛋白表达,免疫组化检测卵巢组织IRS-1蛋白表达。结果模型组IRS-1在肝脏、脂肪组织中mRNA及蛋白表达,以及卵巢中蛋白表达,均明显低于正常组(均P<0.05),中药组均显著高于模型组(均P<0.05)。各组IRS-1的表达在胰岛素刺激后均较刺激前明显增多(均P<0.05)。结论补肾通脉方可提高伴IR的PCOS大鼠肝脏、脂肪和卵巢中IRS-1的表达,这可能是其改善IR和促进排卵的机制之一。

关键词：多囊卵巢综合征胰岛素抵抗补肾通脉方胰岛素受体底物-1

盐酸小檗碱改善胰岛素抵抗与α7烟碱型乙酰胆碱受体相关性研究

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华中科技大学学报（医学版） 2015年第5期44卷 528-532页

作者：邹欣王定坤李芬龚菂陆付耳王开富华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合研究所武汉430030 华中科技大学化学与化工学院武汉430074

目的观察盐酸小檗碱对α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)的影响,进一步探讨盐酸小檗碱通过抗炎通路改善胰岛素抵抗的分子机制。方法以3T3-L1脂肪细胞为研究对象,采用高糖加胰岛素诱导的方法建立胰岛素抵抗的细胞模型,分别给予广谱nAChR... 详细信息

目的观察盐酸小檗碱对α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)的影响,进一步探讨盐酸小檗碱通过抗炎通路改善胰岛素抵抗的分子机制。方法以3T3-L1脂肪细胞为研究对象,采用高糖加胰岛素诱导的方法建立胰岛素抵抗的细胞模型,分别给予广谱nAChR激动剂尼古丁(烟碱)、特异性α7nAChR激动剂氯化胆碱、炎症激活物内毒素(LPS)和抗炎中药盐酸小檗碱及抗炎西药阿斯匹林处理,并设立相应的空白对照组,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测成熟脂肪细胞中α7nAChR mRNA的表达,用放射免疫方法检测细胞上清液中炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6的水平,并用免疫组织化学的方法检测α7nAChR的蛋白表达。结果经烟碱和氯化胆碱干预成熟脂肪细胞后,细胞中α7nAChR mRNA表达水平与LPS、模型组比较均明显增加(均P<0.05),纯中药盐酸小檗碱干预后成熟脂肪细胞中α7nAChR mRNA表达也明显增加,与LPS、模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05);西药阿斯匹林也促进细胞中α7nAChR mRNA的表达;上述4组α7nAChR蛋白表达呈不同程度的增加,TNF-α、IL-1、IL-6等炎性细胞因子受到明显的抑制,与LPS、模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论两种激动剂、抗炎西药阿司匹林和抗炎中药盐酸小檗碱均能上调α7nAChR mRNA和蛋白的表达,明显抑制炎性细胞因子分泌;盐酸小檗碱可能通过抗炎机制改善胰岛素抵抗。

关键词：盐酸小檗碱烟碱 α7烟碱型乙酰胆碱受体胰岛素抵抗胆碱能抗炎通路

补肾通脉方对多囊卵巢综合征胰岛素抵抗的大鼠磷脂酰肌醇-3激酶表达的影响

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中国中药杂志 2010年第13期35卷 1735-1739页

作者：黄冬梅李琼陆付耳谢阳徐丽君邹欣龚菂华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合研究所湖北武汉430030

目的:观察补肾通脉方对多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的大鼠肝脏、脂肪、肌肉和卵巢组织中磷脂酰肌醇-3激酶(PI-3K)p85α亚基的mRNA及蛋白表达的影响。方法:23日龄雌性SD大鼠皮... 详细信息

目的:观察补肾通脉方对多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的大鼠肝脏、脂肪、肌肉和卵巢组织中磷脂酰肌醇-3激酶(PI-3K)p85α亚基的mRNA及蛋白表达的影响。方法:23日龄雌性SD大鼠皮下注射硫酸普拉睾酮钠90 ***-1.d-1,共20 d,联合高脂饮食喂养80 d建立IR的PCOS大鼠模型,成模大鼠随机分为模型组和治疗组,另设15只正常对照组。治疗组大鼠以补肾通脉方进行干预。光镜下观察大鼠排卵情况;葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖(FBG);放射免疫法测定空腹血清胰岛素(Fins);RT-PCR检测PI-3K p85α的mRNA表达;免疫组化检测卵巢PI-3K p85α的蛋白表达。结果:与模型组比较,治疗组平均排卵数及排卵率明显增加(P<0.01),Fins浓度显著降低(P<0.01)。治疗组靶组织PI-3K p85α的mRNA和蛋白表达水平均较模型组明显增加(P<0.01或P<0.05)。结论:补肾通脉方具有改善IR和排卵障碍的作用,其机制可能与其上调伴IR的PCOS大鼠靶组织PI-3K p85α的mRNA和蛋白表达有关。

关键词：多囊卵巢综合征胰岛素抵抗补肾通脉方磷脂酰肌醇-3激酶

玄芷镇痛片对硝酸甘油致偏头痛大鼠血液流变学、脑血流量的影响

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中国医院药学杂志 2011年第19期31卷 1603-1605页

作者：徐丽君王开富邹欣龚菂黄光英华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合研究所湖北武汉430030

目的:通过观察玄芷镇痛片对硝酸甘油致偏头痛大鼠血液流变学、脑血流量的影响,以探讨其治疗偏头痛的作用机理。方法:大鼠皮下注射硝酸甘油造偏头痛模型,玄芷镇痛片高、中、低剂量进行干预,正天丸为阳性对照药物,用多谱勒激光探头(407)... 详细信息

目的:通过观察玄芷镇痛片对硝酸甘油致偏头痛大鼠血液流变学、脑血流量的影响,以探讨其治疗偏头痛的作用机理。方法:大鼠皮下注射硝酸甘油造偏头痛模型,玄芷镇痛片高、中、低剂量进行干预,正天丸为阳性对照药物,用多谱勒激光探头(407)测试大鼠头部脑血流量;用SA5600自动血流变仪测定各项血液变学指标。结果:玄芷镇痛片能明显改善偏头痛大鼠的脑血流量,其治疗效果优于阳性对照组(P<0.05);玄芷镇痛片高、中、低剂量组均降低模型大鼠血液粘度和红细胞聚集指数,高剂量组效果更明显,且优于阳性对照组(P<0.05)。结论:玄芷镇痛片能有效改善偏头痛大鼠的脑血流量和异常血液流变学指标是其治疗偏头痛的作用机理之一。

关键词：玄芷镇痛片偏头痛血液流变学脑血流量