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作者：龚慧宾天津医科大学

学位级别：硕士

目的1.探讨骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs)体外诱导分化为类肝细胞(Heatocyte-like cells, HLCs)的可行性及方法。*** MSCs及HLCs分别与刀豆蛋白A (concanavalin A, ConA)刺激后的脾淋巴细胞(Lymphocyte, LYM)共培养,观察LYM增殖及转化生长因子β1(Transforming Growth Factor β1, TGF-β1)及白细胞介素6(Interleukin-6, IL-6)的表达情况。3.建立大鼠80%肝切除模型,通过门静脉BM MSCs移植,研究BM MSCs对大鼠自体80%肝切除残肝肝再生及修复作用的实验研究。方法1.采用密度梯度离心联合贴壁筛选法分离、纯化、鉴定BM MSCs,运用改良体外肝分化培养体系诱导BM MSCs向HLCs分化。诱导后4周,观察细胞形态的变化;采用EILSA法检测诱导分化后HLCs上清液中白蛋白(Albumin, ALB)及尿素的分泌;RT-PCR检测肝细胞标志性基因甲胎蛋白(Alpha-Fetal Protein, AFP)、ALB和细胞角蛋白18(Cytokeratin18, CK18) mRNA的表达。2.采用梯度密度离心法提取Lewis大鼠脾LYM,取分离纯化的第3代Wistar大鼠来源的BMMSCs及HLCs分别与ConA刺激后的Lewis大鼠来源的脾LYM共培养36h及72h。收集共培养后细胞培养液上清,MTT法检测LYM增殖情况;ELISA法检测BM MSCs和HLCs与脾LYM共培养后上清液中TGF-β1和IL-6的水平;流式细胞仪检测各组LYM S期细胞所占细胞周期的百分比。3.建立大鼠80%肝切除模型：取6-8周龄,体重200～220g的Wistar大鼠,分为实验组16只(术后立即经门静脉注射BM MSCs)和对照组20只(注射等量生理盐水),采用生物化学方法检测肝功能,流式细胞仪和免疫组化检测肝细胞周期和增殖细胞核抗原(Proliferation Cell Nuclear Antigens, PCNA)。结果1.体外成功分离培养、扩增、纯化BM MSCs.2. BM MSCs体外诱导分化为HLCs及特性的研究：在向HLCs诱导分化培养体系的培养下,BMMSCs细胞形态由长梭形逐渐转化成为多角形或类圆形,并且表达AFP、CK-18、 ALB mRNA,诱导组HLCs培养上清液中检测到ALB及尿素的分泌。HLCs+LYM+ConA组与LYM+ConA组相比,TGF-β1表达水平明显升高,差异具有显著的统计学意义(P<0.01);IL-6表达的水平显著降低,差异具有显著的统计学意义(P<0.01)。MTT法检测共培养后LYM OD值：HLCs+淋巴细胞+ConA组OD值明显小于LYM+CorA组,差异具有显著的统计学意义(P<0.01)。HLCs+LYM+CojA组与BM MSCs+LYM+ConA组相比,TGF-β1及IL-6水平差异均无显著的统计学意义,两组OD值差异亦无显著的统计学意义。流式细胞仪检测提示：LYM+ConA组S期细胞比例为31.20%±2.36%,BM MSCs+LYM+ConA组S期细胞比例为3.45%±1.87%,HLCs+LYM+ConA组S期细胞比率为6.27%±0.62%, HLCs+LYM+ConA组与LYM+ConA组相比,差异具有显著的统计学意义(P<0.01)。*** MSCs对自体80%肝切除残肝再生及修复的研究：术后生存率：实验组术后生存率为93.7%,对照组为75%;实验组肝组织HE染色显示：肝细胞坏死及炎性细胞增生、细胞水肿、气球样变与对照组相比明显减轻;实验组术后1d、3d、7d,肝功能丙氨酸氨基转移酶(AlanineAminotransferase, ALT)%口门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate Aminotransferase,AST)水平降低明显优于对照组,差异有显著的统计学意义(P<0.05);实验组肝细胞周期中S期细胞比例与对照组相比明显增高(P<0.05);残肝免疫组化：实验组PCNA表达水平明显高于对照组(P<0.05)。结论*** MSCs具有向HLCs分化的潜能。***与BM MSCs同样具有促进TGF-β1分泌并抑制IL-6分泌的作用,都具有抑制ConA刺激后的异种属LYM增殖的作用,证实BM MSCs和分化后的HLCs具有低免疫原性。3.经门静脉注射BM MSCs可以促进大鼠80%肝切除后残余肝脏细胞的再生及修复,可以显著提高80%肝切除后大鼠生存率,证实BM MSCs具有促进肝细胞增殖和修复的作用。

关键词：骨髓间充质干细胞肝切除大鼠再生修复 HLCs 诱导分化抑制淋巴细胞增殖

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间充质干细胞移植对大鼠移植肝脏缺血再灌注损伤的影响

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中华普通外科杂志 2010年第2期25卷 110-114页

作者：沈中阳宋晓静宋红丽郑卫萍龚慧宾天津市第一中心医院器官移植中心 300192

目的研究骨髓间充质干细胞（bone malrrow mesenchymal stem cells，BMSCs）移植促进大鼠减体积肝移植术后肝脏缺血再灌注损伤修复及再生的作用。方法本研究①取同龄健康Wistar大鼠骨髓进行BMSCs体外培养，用第3代细胞制备悬液。②建立... 详细信息

目的研究骨髓间充质干细胞（bone malrrow mesenchymal stem cells，BMSCs）移植促进大鼠减体积肝移植术后肝脏缺血再灌注损伤修复及再生的作用。方法本研究①取同龄健康Wistar大鼠骨髓进行BMSCs体外培养，用第3代细胞制备悬液。②建立同龄健康Wistar大鼠50％减体积肝移植模型，分为实验组（BMSCs经门静脉植入）和对照组（生理盐水经门静脉注射）观察大鼠术后生存状态，术后不同时间留取血清和肝组织标本，采用免疫组化、流式细胞等方法进行检测。结果成功体外分离培养BMSCs和建立50％减体积肝移植模型；大鼠肝移植术后2h，自由活动和饮水。实验组丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）不同时间点与相应的对照组相比差异有统计学意义（均P〈0．05）。实验组细胞周期：术后第2、3天时肝组织的G0／G1期细胞比例显著低于对照组（分别F=22．061，44．572，均P〈0．01）。增殖细胞核抗原（PCNA）阳性细胞数增高，术后第2、3和7天时比较，差异有统计学意义（分别F=30．716，28．281，8．975，均P〈0．05）。结论移植肝局部植入BMSCs后，可以促进大鼠肝细胞增殖和加快减体积肝移植术后缺血再灌注损伤的修复。

关键词：间质干细胞移植再灌注损伤肝移植肝再生

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直肠癌术后吻合口漏相关因素分析

直肠癌术后吻合口漏相关因素分析

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2013年浙江省外科学学术年会

作者：俞宏斌戴闯朱炜龚慧宾浙江省湖州市第一人民医院

目的吻合口漏目前仍是直肠癌前切除术后最主要的并发症之一。我们研究就是想探讨在直肠癌低位前切除术中吻合口漏的发生率及相关危险因素。方法对我院2009年1月至2012年12月期间372例施行直肠癌前切除或低位前切除的临床资料进行回顾性...

目的吻合口漏目前仍是直肠癌前切除术后最主要的并发症之一。我们研究就是想探讨在直肠癌低位前切除术中吻合口漏的发生率及相关危险因素。方法对我院2009年1月至2012年12月期间372例施行直肠癌前切除或低位前切除的临床资料进行回顾性研究,并对包括:年龄、性别、烟酒史、肥胖、糖尿病、术前肠梗阻、术前放疗、TNM分期、术者、术中出血量、合并脏器切除、吻合口高度、预防性造口、肛管放置、J-储袋吻合等独立因素与发生吻合口漏的关系做多因素Logistic回归分析。结果所有病例平均吻合口高度为5.25cm(1～13cm)。总体372例的单因素分析显示与吻合口漏可疑相关的因素(P<0.2):糖尿病(P=0.19),肛管放置(P=0.16),术中出血量(P=0.08)和吻合口高度(P=0.04);多因素分析只有吻合口高度作为漏发生的独立相关因素选入。在270例低位吻合病例单因素分析可疑相关的因素为:糖尿病(P=0.20)、预防性造口(P=0.06)和吻合口高度(P=0.1 6);经多因素logistic回归分析显示只有预防性造口作为漏发生的独立相关因素选入。结论我们认为吻合口高度低于6cm的低位直肠癌前切除应行预防性造口,可以明显降低高危人群发生吻合口漏的风险,减轻漏的严重层度。

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脾切除术后结肠腔内异位脾种植一例报道

脾切除术后结肠腔内异位脾种植一例报道

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2014年浙江省外科学学术年会

作者：龚慧宾戴闯俞宏斌陈秋强湖州师范学院第一附属医院

异位脾种植是指由于脾外伤或脾切除术所引起的自体种植,1937年Shaw和Shafi首次报道了1例发生于胸腔的异位脾种植,其中多数没有临床症状,由术中病理或尸检发现,仅少部分病例出现腹部症状如腹痛,肠梗阻等,脾种植可发生于腹腔内的任何部位...

异位脾种植是指由于脾外伤或脾切除术所引起的自体种植,1937年Shaw和Shafi首次报道了1例发生于胸腔的异位脾种植,其中多数没有临床症状,由术中病理或尸检发现,仅少部分病例出现腹部症状如腹痛,肠梗阻等,脾种植可发生于腹腔内的任何部位,但多发生于肠浆膜,肠系膜、大网膜,横膈膜、盆腔,肝组织,发生于肠腔内种植罕见,容易误诊为肠道肿瘤疾病,明确肠腔内种植特点,对改疾病的诊断与治疗具有重要意义。

关键词：

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重组牛碱性成纤维细胞生长因子联合上肢弹力绷带包扎法治疗腋下术后淋巴漏临床相关研究

重组牛碱性成纤维细胞生长因子联合上肢弹力绷带包扎法治疗腋下术...

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2013年浙江省外科学学术年会

作者：龚慧宾冯文明姚利琴孙鑫荣湖州市第一人民医院普通外科

目的研究重组牛碱性成纤维细胞生长因子(融合蛋白)联合上肢弹力绷带包扎法治疗腋下术后淋巴漏临床研究,探讨腋下术后淋巴漏治疗选择。方法临床资料1.一般资料:诊断淋巴漏的依据是术后3～5 d腋下引流管的引流液不减少或者减少后增加,且... 详细信息

目的研究重组牛碱性成纤维细胞生长因子(融合蛋白)联合上肢弹力绷带包扎法治疗腋下术后淋巴漏临床研究,探讨腋下术后淋巴漏治疗选择。方法临床资料1.一般资料:诊断淋巴漏的依据是术后3～5 d腋下引流管的引流液不减少或者减少后增加,且颜色从淡血性转变为黄色。选取本院近5年来乳腺癌术后发生的淋巴漏采用常规组、包扎组及联合组各30例,其中常规组:年龄50～70岁,平均为(63±7)岁,确诊时的引流量为(35±15)ml/d。施行包扎组30例,年龄49～71岁,平均(64±6)岁,确诊时的引流量为(48±17)ml/d。选取近5年来施行联合组30例,年龄(52～72)岁,平均(64±6)岁,比较常规组、联合组及包扎组三组在引流量及治愈时间及切口感染率的差别。结果常规组中,粗略痊愈时间为25.8±5.0,日淋巴液丢失量为47.6±7.3 ml,精确痊愈时间(d)为20.2±3.8,切口感染率为0.156,包扎组粗略痊愈时间为15.3±4.7,日淋巴液丢失量为31.8±9.1ml,精确痊愈时间(d)为11.5±2.2,切口感染率为0.10,联合组粗略痊愈时间为8.6±2.4,日淋巴液丢失量为18.5±4.7ml,精确痊愈时间(d)为5.6±1.8。切口感染率为0.066。结论重组牛碱性成纤维细胞生长因子(融合蛋白)联合上肢弹力绷带包扎法能明显减少腋下术后引流量及淋巴漏愈合时间。减少切口感染率。

关键词：腋下手术重组牛碱性成纤维细胞生长因子淋巴漏

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类肝细胞的研究进展

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天津医科大学学报 2011年第2期17卷 275-278页

作者：龚慧宾张全胜沈中阳宋红丽天津市第一中心医院器官移植中心天津300192

肝脏是体内最重要、最复杂的器官之一,既是机体物质代谢的核心,还具有生物转化、排泄胆汁和免疫等重要功能;肝脏同时也是一个极易受损伤的器官,代谢途径的障碍、病毒感染、毒性物质及肿瘤会导致肝脏功能的不可代偿性缺损甚至累及生命。

关键词：肝样细胞细胞分化细胞移植

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骨髓间充质干细胞促进大鼠80%肝切除后残肝再生及修复作用的研究

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天津医药 2011年第2期39卷 149-152,194页

作者：龚慧宾沈中阳宋红丽郑卫萍董冲宋晓静张静天津医科大学一中心临床学院 300192 天津市第一中心医院器官移植中心

目的:观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大鼠自体80%肝切除后残余肝脏再生及修复的作用。方法:采用密度梯度离心联合贴壁筛选法分离纯化鉴定BMSCs,取6～8周体质量200～220g的大鼠,建立大鼠80%肝切除模型,实验组16只,术后即刻经门静脉注射BM... 详细信息

目的:观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大鼠自体80%肝切除后残余肝脏再生及修复的作用。方法:采用密度梯度离心联合贴壁筛选法分离纯化鉴定BMSCs,取6～8周体质量200～220g的大鼠,建立大鼠80%肝切除模型,实验组16只,术后即刻经门静脉注射BMSCs;对照组20只,注射等量生理盐水。采用生物化学方法检测肝功能,流式细胞仪和免疫组化检测肝细胞周期和增殖细胞核抗原(PCNA)。结果:体外成功分离培养、扩增BMSCs;实验组术后生存15只,死亡1只,对照组生存15只,死亡5只;肝脏组织显示,实验组术后1、3和7d时肝窦轻度扩张,较少的炎性细胞浸润,少见坏死,坏死程度明显轻于对照组,术后3d差异尤为明显;实验组术后1、3和7d时血ALT和AST水平较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);实验组术后1、3和7d时肝细胞周期中S期细胞比例与对照组相比均明显增高(P<0.05);残肝免疫组化显示实验组PCNA表达水平明显高于对照组(P<0.05)。结论:BMSCs可以促进大鼠80%肝切除后残余肝脏细胞的再生及修复。

关键词：骨髓间质干细胞移植肝切除术肝再生细胞周期增殖细胞核抗原大鼠,Wistar

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微创治疗联合腹膜透析治疗重症急性胰腺炎

微创治疗联合腹膜透析治疗重症急性胰腺炎

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2014年微创外科学术年会

作者：陶玉龙冯文明唐成武费卯云鲍鹰龚慧宾张良湖州师范学院附属湖州第一人民医院普外科

目的观察微创治疗联合腹膜透析治疗重症急性胰腺炎(SAP)的临床疗效。方法 2010年6月至2014年6月我院对收治的47例SAP病人入院后在实施内科药物治疗同时,行超声导引或腹腔镜下置管于胰腺上下缘及盆腔,采用1.25%葡萄糖乳酸钠透析持续腹腔... 详细信息

目的观察微创治疗联合腹膜透析治疗重症急性胰腺炎(SAP)的临床疗效。方法 2010年6月至2014年6月我院对收治的47例SAP病人入院后在实施内科药物治疗同时,行超声导引或腹腔镜下置管于胰腺上下缘及盆腔,采用1.25%葡萄糖乳酸钠透析持续腹腔冲洗;合并梗阻性胆管炎者同时行经皮经肝胆囊造瘘或经Oddi括约肌切开取石术(EST)及鼻胆管引流(ENBD)。结果经微创置管冲洗引流3天后,SAP病人PACHEII评分、腹腔引流液淀粉酶、血和尿淀粉酶及血白细胞等显著下降。45病人治愈,治愈率95.74%;病死率为4.26%,均死于多器官功能衰竭。结论微创治疗联合腹膜透析治疗重症急性胰腺炎疗效显著,值得临床推广应用。

关键词：重症急性胰腺炎微创腹膜透析

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微创治疗联合腹膜透析治疗重症急性胰腺炎

微创治疗联合腹膜透析治疗重症急性胰腺炎

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2014年浙江省外科学学术年会

作者：陶玉龙冯文明唐成武费卯云鲍鹰龚慧宾张良湖州师范学院附属湖州第一人民医院普外科

关键词：重症急性胰腺炎微创腹膜透析

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手术联合介入化疗治疗侵犯十二指肠结肠肝曲癌临床疗效观察

手术联合介入化疗治疗侵犯十二指肠结肠肝曲癌临床疗效观察

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2014年浙江省外科学学术年会

作者：陶玉龙冯文明唐成武鲍鹰费卯云龚慧宾张良湖州市第一人民医院肝胆胰外科

目的手术联合介入化疗治疗侵犯十二指肠的结肠肝曲癌临床疗效观察。方法:对18例侵犯十二指肠结肠肝曲癌手术治疗联合介入化疗的临床资料进行回顾性分析。结果:本组18例均行手术治疗,根据结肠肝曲癌对十二指肠侵犯的程度不同,行不同手术... 详细信息

目的手术联合介入化疗治疗侵犯十二指肠的结肠肝曲癌临床疗效观察。方法:对18例侵犯十二指肠结肠肝曲癌手术治疗联合介入化疗的临床资料进行回顾性分析。结果:本组18例均行手术治疗,根据结肠肝曲癌对十二指肠侵犯的程度不同,行不同手术方式。10例局部浸润侵犯浆肌层,行右半结肠切除连同十二指肠浸润灶局部切除,十二指肠间断缝合修补。5例广泛浸润侵犯,行右半结肠切除联合胰十二指肠切除术。3例侵犯形成内瘘,行右半结肠切除连同十二指肠节段性切除。本组无梗阻,无围手术期死亡。其中胆肠瘘,切口感染2例。术后予介入、静脉化疗及口服卡培他宾片化疗。结论:十二指肠是结肠肝曲癌容易侵犯的器官。联合切除手术应根据患者状况及侵犯十二指肠的不同程度。采取积极合理的根治性手术及对十二指肠的处理是有助于改善病情及减少并发症的发生。术后联合介入、静脉及口服化疗,明显提高患者的生存率。

关键词：结肠肿瘤肿瘤浸润介入化疗

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