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聚乙二醇干扰素α-2a治疗慢性丙型肝炎患者程序性死亡受体-1和Toll样受体3与4的表达及其意义

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中华肝脏病杂志 2013年第3期21卷 196-201页

作者：张曼蒋永芳肖新强刘素芳彭米林刘丹龚国忠中南大学湘雅二医院感染科长沙410011 血液科实验室

目的观察聚乙二醇干扰素（Peg-IFN）α-2a联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎初治患者抗病毒治疗48周及停药后随访至72周外周血单个核细胞（PBMC）表面程序性死亡受体（PD）-1、Toll样受体（TLR）3、TLR4表达率的变化，探讨PBMC表面PD-1、TLR... 详细信息

目的观察聚乙二醇干扰素（Peg-IFN）α-2a联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎初治患者抗病毒治疗48周及停药后随访至72周外周血单个核细胞（PBMC）表面程序性死亡受体（PD）-1、Toll样受体（TLR）3、TLR4表达率的变化，探讨PBMC表面PD-1、TLR3、TLR4是否参与了宿主抗HCV固有免疫和获得性免疫过程，及其与持续病毒学应答的关系。方法收集慢性丙型肝炎初治患者23例及正常人10名，慢性丙型肝炎患者均接受48周Peg—IFNα-2a（180μg／周）联合利巴韦林口服（15μ·kg-1·d。）抗病毒治疗。分别在0、4、12、24、48、72周时，检测患者血清中ALT、HCVRNA变化；分离患者PBMC，流式细胞术检测不同时间点患者和正常人PBMC表面PD-1、TLR3、TLR4的表达率，分析持续病毒学应答（SVR）与非SVR患者上述指标的变化和差异。多组资料之间的比较采用onewayANOVA模块进行t检验；两组之间比较采用独立样本f检验。结果丙型肝炎患者基线时与正常人PBMC表面PD-1、TLR4、PDl／TLR4表达率分别为：45．44％±7．32％、57．74％士15．45％、35．42％±7．97％与16．82％±4．13％、21．09％±2．89％、14．12％±2．89％，丙型肝炎患者基线水平较正常人明显升高（t值分别为4．675，5．148，2．549，尸值均〈0．05）。正常人TLR3及PDl／TLR3表达率较丙型肝炎患者基线水平稍低，但差异无统计学意义（P〉0．05）。在Peg—IFNα-2a联合利巴韦林治疗期间，慢性丙型肝炎患者PBMC上PD-1及TLR4表达率逐渐下降，TLR3表达率逐渐升高；且SVR患者PBMC上PD-1和TLR3表达率的变化与非SVR患者的差异明显（P〈0．05）。结论慢性丙型肝炎患者PBMC上PD-1、TLR4、PDl／TLR4高表达，初治患者用Peg-IFNα-2a治疗可以使这些指标表达下降，TLR3的表达率升高；PBMC表面PD-1和TLR3的表达可能与患者出现SVR密切相关。

关键词：肝炎丙型慢性干扰素类程序性死亡受体-1 Toll样受体

前列地尔对慢性重型乙肝患者血清肿瘤坏死因子-α的影响

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中国新药杂志 2005年第8期14卷 1057-1058页

作者：蒋永芳许允张永红龚国忠中南大学湘雅二医院传染科长沙410011

目的:观察前列地尔脂微球载体注射液(Lipo-PGE1)对慢性乙型重型肝炎患者血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法:选择慢性乙型重型肝炎患者60例,随机分为试验组(n=30)及对照组(n=30),对照组用综合疗法,试验组在对照组治疗基础上加用Li... 详细信息

目的:观察前列地尔脂微球载体注射液(Lipo-PGE1)对慢性乙型重型肝炎患者血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法:选择慢性乙型重型肝炎患者60例,随机分为试验组(n=30)及对照组(n=30),对照组用综合疗法,试验组在对照组治疗基础上加用Lipo-PGE110μg加入250mL葡萄糖溶液静滴,qd,疗程4周。观察治疗前后血清TNF-α的变化。结果:试验组治疗后血清TNF-α水平为(164.47±10.89)pg·mL-1与治疗前(375.44±12.15)pg·mL-1相比显著下降(P<0.001);对照组治疗后血清TNF-α水平(263.39±10.85)pg·mL-1,与试验组比较差异有显著性(P<0.001)。结论:Lipo-PGE1注射液可降低慢性乙型重型肝炎患者血清TNF-α的水平,是其治疗慢性重型肝炎的作用机制之一。

关键词：前列地尔脂微球载体注射液肿瘤坏死因子慢性乙型重型肝炎

5-杂氮胞苷诱导人淋巴细胞系Molt4细胞PD-1基因启动子去甲基化及PD-1蛋白表达的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2011年第3期31卷 255-260页

作者：张旻肖新强梁云生彭敏源蒋永芳龚国忠中南大学湘雅二医院感染科长沙410001 中南大学湘雅二医院表观遗传学研究中心中南大学湘雅医院血液科实验室

目的以T淋巴细胞株Molt-4细胞为模型,探讨甲基化抑制剂5-杂氮胞苷（5-Zac）对淋巴细胞表面程序性死亡受体-1（PD-1）基因肩动子的去甲基化作用及其诱导的PD-1基因表达的改变,并进一步研究去甲基化作用与PD-1基因表达之间的关系.方法 ... 详细信息

目的以T淋巴细胞株Molt-4细胞为模型,探讨甲基化抑制剂5-杂氮胞苷（5-Zac）对淋巴细胞表面程序性死亡受体-1（PD-1）基因肩动子的去甲基化作用及其诱导的PD-1基因表达的改变,并进一步研究去甲基化作用与PD-1基因表达之间的关系.方法以不同浓度的5-Zac（0、5、10μmoL/L）作用于体外培养的Molt-4细胞72 h,流式细胞术（FCM）检测细胞表面表达PD-1的Molt-4细胞比例和细胞凋亡率;反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测5-Zac作用后PD-1基因mRNA的转录水平;亚硫酸氧钠处理各组Molt-4细胞DNA,PCR扩增与转录因子Brn-2结合的PD-1启动子基因片段,转化感受态大肠杆菌,挑克隆测序,检测扩增的PD-1启动子片段甲基化状态.结果 0、5、10μmol/L的5-Zac作用于Molt-4细胞72 h后,PD-1在细胞表面的表达率分别为1.13%4±0.01%、18.96%±1.87%、63.09%±6.25%,并呈现浓度依赖性（P〈0.05）;PD-1基因mRNA表达量显著增加;细胞凋亡检测结果显示与未处理组相比,5-Zac处理72 h后Molt-4细胞的凋亡率显著增加,3组凋亡率分别为1.9%4±0.06%、8.98%4±1.36%、24.5%4±3.68%,差异有统计学意义（P〈0.01）;3组DNA亚硫酸氢钠测序结果表明,5-Zac处理后,与转录因子Bin-2结合位置的CG点明显受到去基化影响,其去甲基化概率与周围其他CG点去甲基化概率比较差异有统计学意义（P〈0.05）.结论甲基化抑制剂5-Zac可导致体外培养的淋巴细胞系Molt-4细胞表面PD-1表达显著增加,PD-1基因mRNA表达增加,细胞凋亡率增高;PD-1基因活化和表达的增加可能与5-Zac降低PD-1基因启动子上与转录因子Bin-2结合位置的CG点甲基化水平,从而促进Brn-2与基因启动子结合,使转录表达增加有关.

关键词： 5-杂氮胞苷 PD-1表达细胞凋亡去甲基化

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两种化学氧化法测定血清胆红素的比较

现代医药卫生 2006年第21期22卷 3237-3240页

作者：蒋兴亮龚国忠川北医学院附属医院检验科四川南充637000 川北医学院2001级检验系四川南充637000

目的:比较钒酸盐氧化法和化学氧化法测定血清胆红素的性能。方法:用钒酸盐氧化法、化学氧化法分别测定血清中总胆红素(TBil)和直接胆红素(DBil),比较两种方法的精密度、线性范围、回收率和抗干扰能力,并计算两种方法测定结果的相关性。... 详细信息

目的:比较钒酸盐氧化法和化学氧化法测定血清胆红素的性能。方法:用钒酸盐氧化法、化学氧化法分别测定血清中总胆红素(TBil)和直接胆红素(DBil),比较两种方法的精密度、线性范围、回收率和抗干扰能力,并计算两种方法测定结果的相关性。结果:两种方法重复性实验批内变异和批间变异分别小于3.0%和5.0%;两种方法测定TBil的平均回收率分别为100.2%、101.1%;测定DBil的平均回收率分别为99.4%、98.4%。钒酸盐法测定TBil的线性范围为0～570μmol/L,化学氧化法测定TBil的线性范围为0～650μmol/L,钒酸盐法测定DBil的线性范围为0～312μmol/L,化学氧化法测定DBil的线性范围为0～213μmol/L。以钒酸盐方法为对比法(Y),对化学氧化法(X)进行评估,两种方法测定TBil回归方程为Y=0.995X+1.954,相关系数r2=0.999,(P>0.05),测定DBil的回归方程为Y=0.940X+0.731,r2=0.996,(P>0.05)。化学法抗溶血干扰能力较钒酸盐法强,而抗维生素C的干扰较钒酸盐法差,两种方法对TG的抗干扰能力相当。结论:钒酸盐氧化法和化学氧化法测定血清胆红素性能相当,两种方法的线性检测范围、精密度、回收率和抗干扰能力均符合临床常规使用要求。

关键词：总胆红素直接胆红素方法学比较

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鼠CD40配体基因的克隆及表达

世界华人消化杂志 2004年第6期12卷 1349-1352页

作者：蒋永芳苏先狮龚国忠何艳许允中南大学湘雅二医院肝病研究中心湖南省长沙市410011

目的:克隆和在真核细胞中表达鼠CD40配体(mCD40L)基因,为进一步研究打下基础. 方法:用RT-PCR法扩增mCD40L基因片段,定向插入真核表达载体pcDNA3.1+中,重组质粒用脂质体转染H22细胞,G418筛选抗性细胞,用RT-PCR检测目的基因的插入,间接免... 详细信息

目的:克隆和在真核细胞中表达鼠CD40配体(mCD40L)基因,为进一步研究打下基础. 方法:用RT-PCR法扩增mCD40L基因片段,定向插入真核表达载体pcDNA3.1+中,重组质粒用脂质体转染H22细胞,G418筛选抗性细胞,用RT-PCR检测目的基因的插入,间接免疫荧光检测目的基因的表达. 结果:含mCD40L,基因重组表达质粒用酶切分析和序列测定进行鉴定后,转染H22细胞经G418筛选获得抗性细胞, 经RT-PCR鉴定有含目的基因,间接免疫荧光鉴定有mCD40L的表达. 结论:成功克隆mCD40

关键词：鼠 CD40配体基因克隆基因表达真核细胞基因序列

拉米夫定治疗HBeAg阴性慢性乙型肝炎疗效观察

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湖南医学 2001年第4期18卷 308-309页

作者：朱映华龚国忠梁俊姚茂军中南大学湘雅二医院中国湖南长沙410011 湘西自治州凤凰县人民医院中国湖南凤凰416200

来,拉米夫定(LAM)作为新一类抗病毒药物用于治疗慢性乙型肝炎(CHB)已取得了一定疗效;治疗1年后,ALT的复常率为41%～72%,HBeAg/抗HBe血清转换同时HBV DNA阴转者为16%～17%[1].但有关LAM治疗HBeAg阴性/HBV DNA阳性(前C区变异)CHB患者鲜见... 详细信息

来,拉米夫定(LAM)作为新一类抗病毒药物用于治疗慢性乙型肝炎(CHB)已取得了一定疗效;治疗1年后,ALT的复常率为41%～72%,HBeAg/抗HBe血清转换同时HBV DNA阴转者为16%～17%[1].但有关LAM治疗HBeAg阴性/HBV DNA阳性(前C区变异)CHB患者鲜见报道,作者等对LAM治疗该类患者的疗效和不良反应作了观察,现报道如下.

关键词：慢性乙型肝炎药物疗法拉米决定治疗疗效 HBeAg 抗病毒药

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传染病学教学方法的改进

浙江医学教育 2004年第1期3卷 28-29页

作者：张永红龚国忠中南大学湘雅二医院湖南长沙410011

在传染病学教学中,采取看病人、讨论、临床实践紧密结合的方法,较好地解决了传统的教学模式难以使刚进入临床课的学生把病人与基础理论知识联系起来的问题,通过实验班与对照班的比较分析,说明这一教学方法上的改进有利于理论与实践的有... 详细信息

在传染病学教学中,采取看病人、讨论、临床实践紧密结合的方法,较好地解决了传统的教学模式难以使刚进入临床课的学生把病人与基础理论知识联系起来的问题,通过实验班与对照班的比较分析,说明这一教学方法上的改进有利于理论与实践的有机结合,使学生既掌握扎实的基础理论知识,又具有良好的临床分析能力。

关键词：教学方法传染病学

CD40配体基因对实验性肝细胞癌的治疗作用

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世界华人消化杂志 2005年第11期13卷 1287-1290页

作者：蒋永芳何艳张永红许允龚国忠中南大学湘雅二医院肝痛研究中心湖南省长沙市410011

目的:探讨鼠CD40配体基因体内抗肿瘤作用方法:转染和未转染质粒pcDNA3.1+-mCD40L的H22细胞(1×106)分别种植到同源Balb/c小鼠左侧腹皮下.荷瘤小鼠(瘤结节最大直径约10mm)瘤结节内直接注射pcDNA3.1+-mCD40L/脂质体复合物(治疗组)或者pcDN... 详细信息

目的:探讨鼠CD40配体基因体内抗肿瘤作用方法:转染和未转染质粒pcDNA3.1+-mCD40L的H22细胞(1×106)分别种植到同源Balb/c小鼠左侧腹皮下.荷瘤小鼠(瘤结节最大直径约10mm)瘤结节内直接注射pcDNA3.1+-mCD40L/脂质体复合物(治疗组)或者pcDNA3.1+、脂质体、培养基(对照组).每周测量各组小鼠皮下肿瘤结节的平均直径的大小,绘制肿瘤生长曲线.RT-PCR法检测治疗组肿瘤组织mCD40LmRNA的表达.常规组织HE染色观察治疗组肿瘤组织病理变化.结果:注射转染了质粒的H22细胞的Balb/c小鼠皮下一直未见瘤结节出现.治疗组荷瘤小鼠瘤结节生长受到明显的抑制,而对照组小鼠瘤结节生长没有抑制.用RT—PCR法从pcDNA3.1+-mCD40L治疗组的小鼠肿瘤组织中扩增出783bp大小片段产物.病理检查发现治疗组肿瘤组织中有明显淋巴细胞浸润、大量凋亡小体和片状坏死.结论:质粒pcDNA3.1+-mCD40L转染后使H22细胞致瘤性明显下降.直接瘤内注射pcDNA3.1+-mCD40L能使荷瘤Balb/c小鼠瘤结节生长明显抑制.质粒pcDNA3.1+-mCD40L治疗组肿瘤组织中有mCD40LmRNA的表达和明显的炎症反应以及肿瘤细胞凋亡、坏死明显增加.

关键词： CD40配体基因实验性肝细胞癌治疗作用 pcDNA3 荷瘤Balb/c小鼠 H22细胞 RT-PCR法肿瘤组织脂质体复合物 PCR法检测组织病理变化淋巴细胞浸润肿瘤细胞凋亡荷瘤小鼠 mRNA 治疗组直接注射作用方法平均直径皮下肿瘤

化学发光微粒子免疫法与电化学发光法测定促甲状腺激素的性能比较

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中国医学创新 2016年第18期13卷 61-64页

作者：范婵陈姝龚国忠四川省遂宁市中心医院四川遂宁629000

目的:比较化学发光微粒子免疫法(CMIA)与电化学发光法(ECLINA)测定血清促甲状腺激素的性能。方法:每天选取临床样本8份,包括门诊与住院患者,排除溶血、脂血及用药情况。分别用CMIA与ECLINA测定样本促甲状腺激素含量,连续测定7 d,记录检... 详细信息

目的:比较化学发光微粒子免疫法(CMIA)与电化学发光法(ECLINA)测定血清促甲状腺激素的性能。方法:每天选取临床样本8份,包括门诊与住院患者,排除溶血、脂血及用药情况。分别用CMIA与ECLINA测定样本促甲状腺激素含量,连续测定7 d,记录检验结果。去除离群点,以电化学发光法为对比方法作为X轴,化学发光微粒子法为实验方法为Y轴,计算化学发光微粒子免疫法与电化学发光法的线性方程和相关系数,进行偏差评估。结果:CMIA与ECLINA测定促甲状腺激素的线性回归方程为Y=0.7863X+0.0632,相关系数r2=0.9946,两种检测方法的测定值之间存在着高度相关关系(P<0.01)。两种实验方法均存在随着结果增高偏差增大现象,但均能满足临床要求。结论:ARCHITEC和ECLINA具有高度相关性,可以建立相关方程,在某一方法不能满足实验室而参考值又不能变换时可以用另一方法代替。

关键词：化学发光微粒子免疫法电化学发光法性能