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嵌合内含子对抗bFGF抗体基因在293T细胞中表达的影响

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中国生物工程杂志 2010年第3期30卷 9-14页

作者：龚义平陶俊王宏宋其芳唐勇向军俭邓宁暨南大学抗体工程中心广州510632

目的:构建含嵌合内含子和抗bFGF抗体基因的真核表达载体并在293T细胞中表达,探讨嵌合内含子对抗体表达的影响。方法:设计引物分别从载体pCl-neo和pComb3-Fab25中扩增出内含子和抗体Fd段、κ链基因序列,按不同组合构建到含人免疫球蛋白I... 详细信息

目的:构建含嵌合内含子和抗bFGF抗体基因的真核表达载体并在293T细胞中表达,探讨嵌合内含子对抗体表达的影响。方法:设计引物分别从载体pCl-neo和pComb3-Fab25中扩增出内含子和抗体Fd段、κ链基因序列,按不同组合构建到含人免疫球蛋白IgG1恒定区Fc段基因的表达载体pIgG中。重组质粒经脂质体PEI转染293T细胞,荧光显微镜观察质粒转染情况,采用夹心ELISA和Western blot检测细胞上清中抗体的表达。结果:DNA测序和酶切分析表明,内含子和抗体基因成功插入pIgG,获得了重组质粒pIgG-Fd-κ、pIgG-Fd-intron-κ、pIgG-Fd-κ-intron和pIgG-Fd-intron-κ-intron。倒置荧光显微镜下可观察EGFP大量表达,Western blot分析上清中有抗体的表达,夹心ELISA检测pIgG-Fd-κ、pIgG-Fd-intron-κ、pIgG-Fd-κ-intron和pIgG-Fd-intron-κ-intron抗体表达量分别为1.21mg/L、0.468mg/L、7.39mg/L、0.601mg/L。结论:成功构建了含嵌合内含子和抗体基因的真核表达载体并在293T细胞中得到表达。嵌合内含子插入κ链基因5′端可提高抗体的表达,插入Fd段5′端则抑制抗体的表达。

关键词：嵌合内含子抗体基因 bFGF 293T细胞表达

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从一道备考试题认识“真核生物基因”

中学生物教学 2016年第1期 90-91页

作者：龚义平广东省东莞市麻涌中学

“基因”是高中生物教学中常用到的基本概念之一。高三学生对基因的认识往往停留在定义层面，对基因的结构、本质和转录等知识常存有疑惑。由一道备考试题入手，对真核生物的基因结构、mRNA结构及RNA的剪接方式做一些简单的拓展，加深... 详细信息

“基因”是高中生物教学中常用到的基本概念之一。高三学生对基因的认识往往停留在定义层面，对基因的结构、本质和转录等知识常存有疑惑。由一道备考试题入手，对真核生物的基因结构、mRNA结构及RNA的剪接方式做一些简单的拓展，加深学生对“基因”的理解。

关键词：备考试题基因结构 mRNA结构 RNA剪接

人源性抗体在HEK293T细胞中瞬时表达条件的优化

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生物技术通报 2010年第11期26卷 137-141页

作者：陶俊向军俭王宏龚义平邓宁暨南大学生命科学技术学院抗体工程中心广州510632

以HEK293T细胞为宿主对抗体基因的转染和表达条件进行优化。以GFP(green fluorescence protein)和人源性抗b FGF抗体1A2为报告基因,考察了3种转染试剂磷酸钙,PEI,FuGene HD的转染效率,确定FuGene HD的转染效率最高后,对DNA∶FuGene HD... 详细信息

以HEK293T细胞为宿主对抗体基因的转染和表达条件进行优化。以GFP(green fluorescence protein)和人源性抗b FGF抗体1A2为报告基因,考察了3种转染试剂磷酸钙,PEI,FuGene HD的转染效率,确定FuGene HD的转染效率最高后,对DNA∶FuGene HD的比例,加入氯喹的浓度,转染后的孵育时间,最佳的低温培养温度以及加入组蛋白抑制剂的浓度进行了优化。结果显示,FuGene HD的转染效率最高,达到56.7%。当转染的DNA=2μg/4×106细胞时,DNA∶FuGene HD的最佳比例为1∶4(W/V);加入氯喹能够增强FuGene HD的转染效率,最佳浓度为100μmol/L,转染后的最佳孵育时间为6h;低温诱导能够提高293T细胞表达抗体的能力,最佳的温度为33℃;加入组蛋白抑制剂丁酸钠或丙戊酸能够明显提高抗体的表达量,丙戊酸的效果优于丁酸钠。通过对转染试剂,转染方法,培养温度,组蛋白抑制剂的加入等条件进行优化使人源性抗bFGF抗体的表达量从1.5mg/L提高到了15.1mg/L。

关键词：人源性抗体瞬时表达优化 HEK293T

抗bFGF人源性抗体的瞬时表达、纯化及鉴定

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中国免疫学杂志 2010年第10期26卷 876-880页

作者：陶俊李丹邓宁王宏龚义平向军俭暨南大学生命科学技术学院抗体工程中心广州510632

目的:将一株人源性中和性抗bFGF单链抗体基因转入真核表达载体,进行真核瞬时表达,通过细胞试验进一步验证其中和活性。方法:将1AscFv抗体基因克隆到真核表达载体pIgG中(编码全长人源性IgG1类抗体),T4连接酶连接后,转化大肠杆菌DH5α,挑... 详细信息

目的:将一株人源性中和性抗bFGF单链抗体基因转入真核表达载体,进行真核瞬时表达,通过细胞试验进一步验证其中和活性。方法:将1AscFv抗体基因克隆到真核表达载体pIgG中(编码全长人源性IgG1类抗体),T4连接酶连接后,转化大肠杆菌DH5α,挑取4个克隆,经测序其中有一株含有正确的scFv序列,命名为pIgG-1A2,将pIgG-1A2转染真核细胞HEK293T进行瞬时表达,表达产物经蛋白G纯化后,SDS-PAGE检测纯化抗体的纯度;ELISA和Western blot检测抗体的特异性;MTT法检测纯化抗体对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)和人神经胶质瘤细胞株U87MG增殖的影响。结果:经酶切鉴定和测序发现pIgG-1A2含有正确的抗体轻重链基因,经293T细胞瞬时表达,表达产物经蛋白G亲和层析柱纯化后经SDS-PAGE鉴定,获得纯度为95%的电泳纯抗体,产量可以达到每升细胞培养上清10mg,交叉反应显示表达的抗体特异性针对bFGF,体外实验证实1A2能够抑制bFGF诱导的人脐静脉血管内皮细胞的增殖,同时还能抑制神经胶质瘤细胞株U87MG的增殖。结论:通过真核细胞成功地表达了抗bFGF人源性抗体,纯化后获得了高纯度的抗体,对HUVEC和神经胶质瘤细胞株U87MG具有抑制作用,为抗bFGF人源性抗体抗肿瘤研究奠定基础。

关键词： bFGF 人源性抗体瞬时表达中和活性

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安徽霍山药百合组织培养的研究

安徽农学通报 2009年第14期15卷 39-42页

作者：储俊许娜龚义平喻树林安徽科技学院生命科学院安徽凤阳233100

本试验主要研究了药百合同一鳞片的不同取材部位与生芽间的关系及不同浓度的IBA、6-BA对药百合组织培养的影响。结果显示:药百合鳞片不同的部位均能诱导出芽,其能力从强到弱依次是下部、中部、上部。诱导芽分化的最适培养基为MS+1.0mg/L... 详细信息

本试验主要研究了药百合同一鳞片的不同取材部位与生芽间的关系及不同浓度的IBA、6-BA对药百合组织培养的影响。结果显示:药百合鳞片不同的部位均能诱导出芽,其能力从强到弱依次是下部、中部、上部。诱导芽分化的最适培养基为MS+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LIBA;芽增殖的最佳培养基为MS+0.8mg/L6-BA+0.1mg/LNAA;诱导生根最佳培养基为1/2MS+0.4-0.5mg/LIBA。

关键词：药百合鳞片分化 IBA 6-BA NAA

木屑与低密度聚乙烯两段式共热解制备液体芳烃研究

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燃料化学学报(中英文) 2024年

作者：龚桐荻蔡勤杰张素平华东理工大学华东理工大学生物质能源与材料研究中心华东理工大学含碳废弃物资源化零碳利用教育部工程研究中心华东理工大学煤液化气化及高效低碳利用全国重点实验室浙江理工大学全省复杂流动与流体工程装备重点实验室

将塑料与生物质进行共热解有望利用塑料的富氢特性改善生物质热解液体产物的品质。本研究设计了两段式的热解过程，以松木木屑和低密度聚乙烯（LDPE）协同转化制备液体芳烃。催化热解过程所得液体产物自然分层为有机相和水相，当使用两... 详细信息

将塑料与生物质进行共热解有望利用塑料的富氢特性改善生物质热解液体产物的品质。本研究设计了两段式的热解过程，以松木木屑和低密度聚乙烯（LDPE）协同转化制备液体芳烃。催化热解过程所得液体产物自然分层为有机相和水相，当使用两段式热解体系时，其有机相产率比传统单段热解提高11.4%。通过木屑与LDPE单独热解与共热解对比，发现木屑与LDPE共热解过程中存在基于氢转移的协同作用，能够促进液体芳烃的形成，且该协同作用在两段式过程中更显著。原料中LDPE所占比例会影响协同效应强度；在木屑和LDPE质量比为1∶1时协同效应最显著，所得有机相产率达到47.2%，其中芳烃含量为93.8%。提高两段温度可以促进木屑和LDPE挥发分的析出并强化芳构化反应，但过高的温度会促进气体生成；当初步热解段温度在600℃，协同转化段温度在500℃时，共热解芳烃产率最高。碱性氧化物MgO可以促进木屑与LDPE的初步热解，使用MgO作为初步热解段催化剂对比ZrO2有机相产率提高5.2%，对协同转化段HZSM-5催化剂通过Ga2O3进行负载能够进一步提升协同转化效果，最终有机相产率达到51.5%，其中芳烃含量达到98.9%。

关键词：木屑低密度聚乙烯两段式热解转化芳烃

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强电场下压电驱动器对拉索结构的振动控制

机械制造 2024年第9期62卷 44-49,84页

作者：龚义迪宁波大学机械工程与力学学院宁波315211

压电驱动器可以用于对拉索结构进行振动控制。在一些振动控制中,施加在压电驱动器上的电压较大,会造成强电场下压电材料的非线性行为。对强电场下压电驱动器对拉索结构的振动控制进行研究。首先设计一种通过模糊控制器对滑模控制中的切... 详细信息

压电驱动器可以用于对拉索结构进行振动控制。在一些振动控制中,施加在压电驱动器上的电压较大,会造成强电场下压电材料的非线性行为。对强电场下压电驱动器对拉索结构的振动控制进行研究。首先设计一种通过模糊控制器对滑模控制中的切换增益进行自适应调节的自适应滑模控制。然后对滑模控制器中的隶属函数通过自适应神经网络进行优化,选取200组训练样本,训练100次,检验误差为0.04137。最后对强电场下拉索结构模型进行有限元分析,验证强电场对压电材料非线性行为的影响。不断调整外部扰动,观测面对不同程度外部扰动时强电场下拉索结构振动的变化及最终的控制效果。研究结果表明,在采用自适应模糊滑模控制后,拉索结构振动的峰峰值可以衰减72%左右。当外部扰动干扰幅度在1%以内时,对拉索结构振动情况的影响不大。当外部扰动干扰幅度达到20%时,采用自适应模糊滑模控制后,拉索结构振动的峰峰值依然可以衰减约35.8%,具有一定的快速性和自适应性。

关键词：拉索结构强电场压电驱动器振动控制

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培育优良种苗对林业产业的重要性及措施

新农民 2024年第23期 105-107页

作者：龚义玲利辛县自然资源和规划局城北所

林业产业不仅包括森林资源，也包括了林下的种植养殖、旅游服务和加工制造等方面，属于绿色经济发展模式。优良种苗是指经过科学选育和培育，具有较强生长力、抗逆性和抗病虫害能力的林木种苗。优良种苗在生长初期就能展现出较高的生长... 详细信息

林业产业不仅包括森林资源，也包括了林下的种植养殖、旅游服务和加工制造等方面，属于绿色经济发展模式。优良种苗是指经过科学选育和培育，具有较强生长力、抗逆性和抗病虫害能力的林木种苗。优良种苗在生长初期就能展现出较高的生长速度和生长潜力，为林木种植产业的产量和产品品质量提供了有力保障。林木种植产业作为一项重要的生态和经济产业，对于国家环境生态保护及经济的可持续发展具有重要意义。所以，优良种苗的选择和培育至关重要的。本文深入探讨了优良种苗的特点及其在林木种植产业中的重要作用，提出了优良种苗选育方法。

关键词：种苗培育优良种苗产业化林业建设

"逐步法"矫正尿道下裂阴茎下弯策略的观念转变及研究进展

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中华小儿外科杂志 2024年第9期45卷 851-856页

作者：李佳义宋宏程孙宁张潍平国家儿童医学中心首都医科大学附属北京儿童医院泌尿外科北京100045

尿道下裂是小儿泌尿生殖系统常见的先天性畸形,其手术治疗主要包括阴茎下弯矫正、尿道成形以及阴茎外观成形,其中阴茎下弯矫正作为治疗的第一步,对后续尿道成形方式起到了决定性的作用,也成为近10年来国内外学者关注的焦点。阴茎下弯通... 详细信息

尿道下裂是小儿泌尿生殖系统常见的先天性畸形,其手术治疗主要包括阴茎下弯矫正、尿道成形以及阴茎外观成形,其中阴茎下弯矫正作为治疗的第一步,对后续尿道成形方式起到了决定性的作用,也成为近10年来国内外学者关注的焦点。阴茎下弯通常是多个致病因素共同作用的结果,在阴茎下弯矫正的过程中,合理、有效地纠正导致阴茎下弯的病因是减少术后复发腹侧弯曲的关键。随着人们对尿道下裂研究的不断深入,"逐步法"矫正阴茎下弯的策略应运而生,为尿道下裂阴茎下弯矫正的规范化治疗建立了良好的开端。近10年里,研究者们发现阴茎长度是影响患儿青春期时满意度的重要因素。人们逐渐摒弃了游离尿道板技术,更多采用横断尿道板的方式纠正尿道板发育挛缩;在纠正阴茎海绵体白膜发育不对称时,人们更倾向于使用腹侧延长术,背侧白膜紧缩技术的使用也相应减少。基于近10年的循证医学证据,研究者在原有基础上对"逐步法"进行了优化与更新。本文就"逐步法"矫正阴茎下弯的观念转变、研究进展及现有争议进行综述,以期加深对尿道下裂阴茎下弯矫正的认知与理解。

关键词：尿道下裂阴茎下弯并发症