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作者：龙禹哲遵义医科大学

学位级别：硕士

研究背景:缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IR)可以造成各种组织器官内细胞结构和功能上的改变,引起细胞的死亡。其中,心肌细胞凋亡是缺血再灌注损伤引起细胞死亡的主要原因。骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal Stem cells... 详细信息

研究背景:缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IR)可以造成各种组织器官内细胞结构和功能上的改变,引起细胞的死亡。其中,心肌细胞凋亡是缺血再灌注损伤引起细胞死亡的主要原因。骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal Stem cells,BMSCs)是一种可显著修复梗死心肌、改善心肌重构和心功能的干细胞。现在骨髓间充质干细胞广泛的用于基础研究中,这主要是因为它具有高的增殖活性、容易获得、抗炎症作用以及很小的免疫排斥反应。MSCs的移植治疗心肌梗死中,可以改善心室重塑以及心功能。其发挥主要作用的是细胞的旁分泌机制,而外泌体(exosome,Exo)是干细胞旁分泌效应中发挥主要作用的因子。外泌体是细胞来源的微泡结构,通过传递蛋白与遗传物质来发挥细胞信息传递作用。在缺血再灌注损伤时内源性的干细胞会分泌外泌体至损伤部位修复心肌。既往有关心肌缺氧复氧(Hypoxia reoxygenation,HR)病理生理的研究大多关注于氧自由基、钙超载、炎症反应、线粒体损伤、细胞凋亡、细胞自噬等方面。其中细胞自噬和线粒体自噬被认为在心肌HR中发挥着非常重要的作用。细胞自噬是将受损、变性、衰老的长寿命蛋白及细胞器等底物运输到溶酶体内进行酶解消化,将底物还原为其组成成分并供细胞再利用的过程。线粒体自噬的发生主要是在活性氧物质(Reactive oxygen species,ROS)产生、线粒体受损加重。细胞内的线粒体发生去极化出现损伤,损伤的线粒体被特异性地被包裹进自噬体中并与溶酶体融合,从而完成降解,维持细胞内环境的稳定。氧化应激既可激活线粒体自噬,又可通过破坏自噬调节通路而抑制自噬的发生。体内和体外实验均已证实在缺血再灌注损伤过程中,缺氧阶段,自噬水平适度升高可减轻缺氧所引起的损伤作用,当缺血的心肌组织恢复营养和氧气的供应后,ROS大量聚积,可见自噬显著上调,随着自噬水平的过度增高,通常伴随有心肌自噬性死亡和心肌细胞凋亡的加剧。目前,关于骨髓间充质干细胞源外泌体通过自噬和线粒体自噬调控缺氧复氧(HR)所诱导的心肌细胞凋亡的研究未见报道。本研究拟利用在HR诱导H9c2心肌细胞凋亡的基础上,观察骨髓间充质干细胞源外泌体对H9c2凋亡、自噬及线粒体自噬的影响。探讨外泌体对损伤组织微环境的相互调节机制,为干细胞的非细胞治疗提供新的治疗靶向与策略。第一部分骨髓间充质干细胞源外泌体改善大鼠心肌梗死后心脏功能的体内研究目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)源外泌体对大鼠急性心肌梗死后心功能的影响。方法:(1)采用骨髓差速离心法培养实验所需的大鼠MSCs。利用流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)鉴定生长至P3-P6代的MSCs表面标记抗原(CD29和CD90和CD45);(2)采用超速离心法(UC)分别提取MSCs的细胞培养液的外泌体(Exo);Western Blot检测所提取的外泌体表面标记性的跨膜蛋白CD9、CD63及Alix的表达;透射电镜(TEM)观察外泌体形态学特征;纳米颗粒追踪分析(NTA)分析Exo的内径大小、内径分布范围;(3)将SD大鼠24只随机分为4组:SHAM组、MI组、PBS组、EXO组,每组6只,通过结扎冠状动脉左前降支建立大鼠心梗模型,心肌梗死周边区域注射外泌体、PBS;(4)观察心肌梗死后28天大鼠的心功能的改善情况;(5)心肌梗死14天进行HE染色、MASSON染色以观察心肌组织、纤维蛋白原的变化;(6)心肌梗死第3天提取心肌蛋白观察心肌组织中自噬蛋白的变化;(7)心肌梗死第14天提取心脏组织蛋白测定凋亡蛋白水平的变化。结果:(1)体外分离培养的骨髓间充质干细胞,培养48h后可见部分细胞开始贴壁生长,P3-P6代时细胞呈鱼群状及漩涡状生长,FCM检测表面细胞结果显示:间充质干细胞的阳性表面标记物CD29及CD90分别表高达96.91%和97.66%,阴性标记物CD45表达为1.45%(P<0.05)。(2)采用超速离心法(UC)提取出骨髓间充质干细胞源外泌体,蛋白电泳法结果检测显示:Exosome表面标志性蛋白CD9、CD63及Alix均呈阳性表达(P<0.05);通过TEM可观察到大小不一、典型的茶托盘状、双层膜结构;NTA结果显示:Exosome平均粒径大小为87.5nm;(3)心电图结果显示结扎冠脉后Ⅱ导联ST抬高,TTC结果可见结扎冠脉后心脏变白;(4)心肌梗死后28天检测大鼠心动图结果显示:与MI组相比,EXO组大鼠心功能的射血分数由30.32%±7.21%,上升到了55.31%±8.33%(P<0.05);(5)心肌梗死后14天,取心脏组织行HE染色、MASSON染色,HE染色结果显示MI组心肌组织排列无序,部分心肌细胞已经消失,出现了大量纤维组织的形成,EXO组的心肌组织的完整性较MI有所好转,且纤维瘢痕组织较少。MASSON染色结果显示:EXO组比较于

关键词：缺氧复氧间充质干细胞外泌体心肌细胞 miRNA 自噬

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人参皂苷Rg_3对大鼠颈动脉损伤后内膜增生及平滑肌细胞凋亡的影响

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中草药 2018年第13期49卷 3082-3086页

作者：陈文明赵永超刘围围龙禹哲张赟石蓓遵义医学院附属医院心血管内科贵州遵义563099

目的研究人参皂苷Rg_3对大鼠颈动脉损伤后新生内膜增生及平滑肌细胞凋亡的影响。方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和人参皂苷Rg_3低、高剂量(5、10 mg/kg)组,各10只,用球囊制备大鼠颈动脉损伤模型,术后次日ig给药,假手术组和模... 详细信息

目的研究人参皂苷Rg_3对大鼠颈动脉损伤后新生内膜增生及平滑肌细胞凋亡的影响。方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和人参皂苷Rg_3低、高剂量(5、10 mg/kg)组,各10只,用球囊制备大鼠颈动脉损伤模型,术后次日ig给药,假手术组和模型组给予等量的生理盐水;14 d后取损伤的颈总动脉血管,用苏木精-伊红(HE)染色观察新生内膜组织形态学改变;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记(TUNEL)法检测平滑肌细胞凋亡;Western blotting和qRT-PCR法检测损伤血管凋亡基因Fas、抗凋亡基因Bcl-2的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血管新生内膜明显增厚,内膜与中膜面积比明显增加,新生内膜区平滑肌细胞凋亡率显著增加,Fas、Bcl-2基因表达明显增加;与模型组比较,人参皂苷Rg_3低、高剂量组血管内膜增生明显减轻,内膜与中膜面积比明显下降,新生内膜区平滑肌细胞凋亡率明显增加,损伤血管Fas基因表达水平明显升高,Bcl-2基因表达水平明显降低。结论人参皂苷Rg_3可能通过促进平滑肌细胞的凋亡,从而减轻球囊损伤后血管内膜的增生。

关键词：人参皂苷Rg3 内膜增生平滑肌细胞细胞凋亡颈动脉损伤

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骨髓间充质干细胞源外泌体对大鼠颈动脉球囊损伤后lncRNAs表达的影响

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第三军医大学学报 2020年第23期42卷 2320-2329页

作者：龙禹哲郭鸿浩杨双亚陈文明邓文文石蓓遵义医科大学附属医院心内科贵州遵义563000

目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)源外泌体(exosomes)对大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生的调控作用及其长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)表达的影响。方法采用差速超速离心法提取大鼠BMSC... 详细信息

目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)源外泌体(exosomes)对大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生的调控作用及其长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)表达的影响。方法采用差速超速离心法提取大鼠BMSCs源外泌体,并通过Western blot和透射电镜对其进行鉴定。SD大鼠分为3组:(1)假手术组(只分离左颈总动脉血管);(2)损伤组(左颈总动脉采用球囊损伤);(3)外泌体组(建立大鼠颈动脉球囊损伤模型后原位注射0.25μg/μL外泌体400μL),14 d后采用HE染色观测颈动脉内膜/中膜面积比(intima/media,I/M)、免疫组化检测PCNA表达、Western blot检测血管内膜增殖及表型转化相关指标的变化。采用lncRNA-mRNA共表达谱芯片表达变化及其生物信息学分析筛查假手术组和损伤组大鼠颈动脉组织中差异表达的lncRNAs和mRNAs,对其潜在分子机制进行探讨。采用qRT-PCR检测各组颈动脉组织中候选lncRNAs的表达。结果电镜结果显示BMSCs源外泌体呈现"茶杯垫样"改变,Western blot结果显示所提取的外泌体中CD63、Alix、HSP70蛋白表达阳性。与损伤组相比,经BMSCs源外泌体处理后大鼠颈动脉I/M显著减少(P2.0,P<0.05)。GO和KEGG通路分析结果显示,多条lncRNAs与mRNAs相互关联,通过调控相应的靶mRNAs,参与血管平滑肌收缩、肌动蛋白细胞骨架调节和细胞周期等多种生物学过程,与球囊损伤后血管再狭窄的机制有关。结合生物信息学分析,采用qRT-PCR检测3组大鼠颈动脉组织中上述差异性表达最为显著的7个lncRNAs,结果表明,与损伤组相比,外泌体组XR593268上调(P<0.05),XR602080、XR602012、XR591017均下调(P<0.05)。结论BMSCs源外泌体抑制大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生,其潜在机制可能与XR602080、XR591017通过Gsk3b、Cdkn2b、Ccna2等分子调控平滑肌细胞周期变化有关。

关键词：骨髓间充质干细胞外泌体颈动脉损伤长链非编码RNA

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过表达LncRNA LOC100360491对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞凋亡的影响

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第三军医大学学报 2020年第18期42卷 1795-1802页

作者：郭鸿浩邓文文龙禹哲杨双亚赵永超石蓓遵义医科大学附属医院心内科贵州遵义563000

目的观测长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)LOC100360491(后简称LOC100360491)对缺氧复氧诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响,探讨其潜在作用机制。方法(1)通过慢病毒转染大鼠H9c2心肌细胞构建过表达及抑制LOC100360491的心肌细胞系... 详细信息

目的观测长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)LOC100360491(后简称LOC100360491)对缺氧复氧诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响,探讨其潜在作用机制。方法(1)通过慢病毒转染大鼠H9c2心肌细胞构建过表达及抑制LOC100360491的心肌细胞系,分为4组:空白对照组、过表达LOC100360491组、抑制LOC100360491组及空载体组,qRT-PCR检测各组LOC100360491的表达。(2)将慢病毒转染的大鼠H9c2心肌细胞进行缺氧24 h复氧6 h处理以观察LOC100360491对该细胞凋亡的影响,分为5组:空白对照组、缺氧复氧组、过表达LOC100360491组、抑制LOC100360491组及空载体组。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡早期磷脂酰丝氨酸外翻与凋亡中期线粒体活性氧释放情况;Western blot检测各组细胞中凋亡效应蛋白procaspase3、cleaved-caspase3、促凋亡蛋白Bax及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。(3)采用qRT-PCR检测各组PAK3及CNNM2基因的表达以探讨LOC100360491的潜在调控机制。结果(1)qRT-PCR结果显示:与空载体组相比,过表达LOC100360491组LOC100360491表达显著上调(P0.05)。抑制LOC100360491组PAK3及CNNM2表达显著下降(P<0.05)。结论LOC100360491可通过线粒体活性氧途径抑制缺氧复氧诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的发生,可能与其在转录水平上调控PAK3的表达有关。

关键词：长链非编码RNA LncRNA LOC100360491 心肌细胞缺氧复氧细胞凋亡

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Toll样受体4通过PI3K/Akt信号通路调节骨髓间充质干细胞凋亡

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遵义医学院学报 2017年第6期40卷 617-621页

作者：陈文明蹇明辉赵永超龙禹哲刘围围龙仙萍石蓓遵义医学院附属医院心血管内科贵州遵义563099

目的研究Toll样受体4(TLR4)对骨髓间充质干细胞(MSCs)凋亡的影响及其可能的机制。方法本实验运用脂多糖(LPS)作用于的大鼠MSCs,应用流式细胞术鉴定MSCs;实验分成4组:对照组、LPS组、TLR4阻断剂+LPS组、LY294002+LPS组,缺氧处理6h后,用We... 详细信息

目的研究Toll样受体4(TLR4)对骨髓间充质干细胞(MSCs)凋亡的影响及其可能的机制。方法本实验运用脂多糖(LPS)作用于的大鼠MSCs,应用流式细胞术鉴定MSCs;实验分成4组:对照组、LPS组、TLR4阻断剂+LPS组、LY294002+LPS组,缺氧处理6h后,用Western blot法检测TLR4、p-Akt、Akt、Bax、Bcl2、Caspase-3蛋白的表达变化;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果与对照组比较,LPS作用后TLR4的表达明显上调(P<0.01),p-Akt表达增加,Bax表达降低,Bcl-2的表达上升,Caspase-3表达减少,且MSCs的凋亡率也减少(P<0.05);TLR4阻断剂处理后p-Akt较LPS组减少,Bax表达上调,Bcl-2的表达下降,Caspase-3表达增加,MSCs的凋亡率也增加(P<0.01),LY294002预处理后p-Akt表达较LPS组明显降低,Bax表达显著上调,Bcl-2的表达下降,Caspase-3表达明显增加,且MSCs的凋亡率也增加(P<0.01)。结论 TLR4对MSCs的凋亡具有抑制作用,其作用机制可能与激活IP3K/Akt信号通路,继而抑制Caspase-3活性有关。

关键词： Toll样受体4 PI3K/Akt信号通路骨髓间充质干细胞细胞凋亡

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绿色金融能助力产业结构升级吗——以河北省为例

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西部金融 2024年第3期 63-69页

作者：龙禹昂河北金融学院

基于2007-2022年河北省的11个地级市绿色金融的面板数据，文章运用固定效应模型，就绿色金融与河北省产业结构绿色化转型升级影响关系，进行实证检验回归分析。研究表明：（1）绿色金融的发展能够助力河北省城市产业结构优化升级；（2... 详细信息

基于2007-2022年河北省的11个地级市绿色金融的面板数据，文章运用固定效应模型，就绿色金融与河北省产业结构绿色化转型升级影响关系，进行实证检验回归分析。研究表明：（1）绿色金融的发展能够助力河北省城市产业结构优化升级；（2）就城市规模来看，绿色金融对推动中等规模的城市产业结构升级的积极作用远远小于对河北省小型或者大型城市产业结构优化升级的积极作用；（3）就区域位置来看，无论南部城市还是北部城市，绿色金融对于产业结构优化升级都具有明显的促进作用，但对于北部城市的促进作用会更加显著。最后基于研究结论，提出助力河北省绿色金融发展和产业结构升级的相关策略与建议。

关键词：绿色金融产业结构升级河北省地级市固定效应模型

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绿色金融发展对河北省产业结构升级的影响研究

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中文科技期刊数据库（全文版）经济管理 2024年第6期 0158-0163页

作者：龙禹昂河北金融学院河北保定017000

基于2007-2022年河北省的11个地级市绿色金融的面板数据,文章运用固定效应模型,就绿色金融与河北省产业结构绿色化转型升级影响关系,进行实证检验回归分析。研究表明:(1)绿色金融的发展能够助力河北省城市产业结构优化升级;(2)就城市规... 详细信息

基于2007-2022年河北省的11个地级市绿色金融的面板数据,文章运用固定效应模型,就绿色金融与河北省产业结构绿色化转型升级影响关系,进行实证检验回归分析。研究表明:(1)绿色金融的发展能够助力河北省城市产业结构优化升级;(2)就城市规模来看,绿色金融对推动中等规模的城市产业结构升级的积极作用远小于对河北省小型或大型城市产业结构优化升级的积极作用(3)就区域位置来看,无论南部城市还是北部城市,绿色金融对于产业结构优化升级都有明显的促进作用,但对于北部城市的促进作用会更加显著。最后基于研究结论,提出助力河北省绿色金融发展和产业结构升级的相关建议。

关键词：绿色金融产业结构升级河北省地级市固定效应模型

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光激发下水体系的超快动力学

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物理学报 2024年第8期73卷 22-44页

作者：贾韫哲孟胜中国科学院物理研究所北京凝聚态物理国家研究中心北京100190 中国科学院大学物理科学学院北京100049 松山湖材料实验室东莞523808

近年来,实验技术和理论计算在实现超快时间尺度的分辨以及对于原子尺度微观细节的解析上都有了突破性进展,对于水体系的超快微观动力学也带来了更多新的认识.本文将视角集中于水分子、水团簇以及液态水在不同强度的光激发下产生的电离... 详细信息

近年来,实验技术和理论计算在实现超快时间尺度的分辨以及对于原子尺度微观细节的解析上都有了突破性进展,对于水体系的超快微观动力学也带来了更多新的认识.本文将视角集中于水分子、水团簇以及液态水在不同强度的光激发下产生的电离、解离甚至等离子体化的过程,总结了人们在前沿工作中获得的有关水体系原子尺度超快动力学的知识.特别地,围绕光电离实验探讨了阿秒尺度的电离延迟以及水分子Feshbach共振理论分析;围绕液态水的解离过程探讨了水合电子产生、空穴的定域化等重要过程,补足了液态水解离完整过程的微观图像;围绕水的等离子体化介绍了通过含时密度泛函等方法计算得到的水在强激光脉冲作用下转变为等离子体状态的过程与机制,总结了在极高电子温度下水的特殊电子结构的相关知识.这些讨论将给出当前人们看待水的激发态的相对全面的视角.

关键词：光激发水超快动力学激发态

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干细胞治疗淋巴水肿的基础及临床应用研究进展

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中国修复重建外科杂志 2024年第1期38卷 99-106页

作者：陈君哲邓呈亮遵义医科大学附属医院烧伤整形外科贵州遵义563003 组织损伤修复与再生医学省部共建协同创新中心贵州遵义563003

目的综述不同类型干细胞及其联合疗法治疗淋巴水肿的基础和临床研究进展。方法广泛查阅国内外近年干细胞治疗淋巴水肿有关文献,对不同类型干细胞治疗淋巴水肿的动物实验和临床研究进行总结。结果动物实验和临床研究均显示各类干细胞治... 详细信息

目的综述不同类型干细胞及其联合疗法治疗淋巴水肿的基础和临床研究进展。方法广泛查阅国内外近年干细胞治疗淋巴水肿有关文献,对不同类型干细胞治疗淋巴水肿的动物实验和临床研究进行总结。结果动物实验和临床研究均显示各类干细胞治疗淋巴水肿有一定效果,主要通过局部分化为淋巴内皮细胞和旁分泌不同功能的细胞因子发挥作用。目前研究集中于脂肪来源干细胞和BMSCs两种细胞类型,两者各有优缺点,主要体现在干细胞治疗效果、获取难度和体内含量等方面。此外,干细胞还能联合其他治疗方式发挥协同作用,例如保守治疗、手术干预、细胞因子、生物支架等。但目前仍局限于基础研究阶段,仅少量研究完成了临床试验。结论干细胞治疗淋巴水肿具有较大临床转化潜力,但目前在细胞类型选择、移植细胞量、移植时机等方面尚缺乏统一标准。

关键词：干细胞淋巴水肿淋巴管再生组织工程再生医学

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基于电子顺磁共振谱的残磁测量应用及进展

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光谱学与光谱分析 2024年第1期44卷 22-28页

作者：张全哲邹升张红北京航空航天大学仪器科学与光电工程学院北京100191 北京量子信息科学研究院北京100193

电子顺磁共振类似于核磁共振,是一种基于电子磁矩在外磁场中的顺磁性及塞曼分裂的方法,该方法与物质中未成对电子和外磁场相联系,通过获取和分析物质的电子顺磁共振谱,能够得到物质的结构信息或环境的磁场信息,因此其常被用来分析物质... 详细信息

电子顺磁共振类似于核磁共振,是一种基于电子磁矩在外磁场中的顺磁性及塞曼分裂的方法,该方法与物质中未成对电子和外磁场相联系,通过获取和分析物质的电子顺磁共振谱,能够得到物质的结构信息或环境的磁场信息,因此其常被用来分析物质结构、探测磁场等。极弱磁场通常指nT或以下量级的磁场,目前一些科学研究的进行常常要求在极弱磁环境下进行,例如基础物理研究、心脑磁探测等,因此稳定可靠的磁屏蔽常被用来创建所需的极弱磁环境。磁屏蔽包括被动磁屏蔽和主动磁补偿,被动磁屏蔽指利用磁屏蔽室屏蔽外界磁场,其内部往往有一定量的残余磁场,因此为方便进一步主动磁补偿,探测屏蔽后的残余磁场是有必要的。目前屏蔽室内残余磁场的测量手段主要分为商用化磁强计测量和装置原位测量,商用化磁强计测量方法简单,但精度低、噪声大,且不利于小型化,利用装置原位测量能够减少噪声,是目前主要的研究方法。由于碱金属原子最外层含有一个未成对电子,其成为电子顺磁共振实验的理想样品。而随着激光和光泵技术的发展,利用法拉第旋光效应作为光学手段探测气体原子的电子顺磁共振谱已经成为了可能。通过测量碱金属原子气体的电子顺磁共振谱进行残余磁场的原位测量效果好、精度高,具有极大的应用前景。通常基于电子顺磁共振的残磁测量系统包括残磁环境和样品模块、光学探头模块、信号调制模块、环境监测模块以及信号收集与处理模块,核心是光学探头模块,决定了磁场测量的灵敏度。简要描述了电子顺磁共振技术的原理,以光泵磁力计为主介绍了基于该技术的典型磁力计和目前的发展,重点概述了基于电子顺磁共振谱的残磁测量系统、各个组成模块以及相关技术近年来的发展现状。

关键词：电子顺磁共振磁场传感磁屏蔽极弱磁环境

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