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运用细胞和分子细胞遗传学技术对5例特殊染色体病患者的诊断和产前诊断

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运用细胞和分子细胞遗传学技术对5例特殊染色体病患者的诊断和产...

作者：龙志高中南大学

学位级别：硕士

背景:以染色体显带为基础的常规细胞遗传学技术,包括染色体G显带、高分辨及其它显带技术(R、Q、N、C、G11、X小体、Y小体、SCE),在染色体研究中发挥了很重要的作用,并发现了许多染色体综合征。然而,这些技术也有其自身的局限性,如它们... 详细信息

背景:以染色体显带为基础的常规细胞遗传学技术,包括染色体G显带、高分辨及其它显带技术(R、Q、N、C、G11、X小体、Y小体、SCE),在染色体研究中发挥了很重要的作用,并发现了许多染色体综合征。然而,这些技术也有其自身的局限性,如它们一般只适用于中期染色体而不适用于间期有核细胞,分辨率仅能达到3000kb,无法确定许多标记染色体的来源等。目的:为了克服上述局限性,本研究旨在应用一套以荧光原位杂交(FISH)技术为基础的分子细胞遗传学技术,结合细胞遗传学对染色体微小异常进行检测与定位,探讨染色体末端结构异常和染色体数目异常的一些可能形成机制,为进一步诊断和预防染色体异常提供依据。方法:采用常规G带、高分辨、N带以及FISH技术对5例常规染色体分析疑有染色体异常的患者的外周血淋巴细胞、羊水细胞进行相应染色体异常的检测。结果:常规染色体分析和FISH检测结果显示:患者1诊断为11号与22号染色体相互易位携带者,其同源22号染色体随体增加,其核型为46,XX,t(11;22)(q25;q13)dn,22ps+***(11;22)(RP11-232E17+;RP11-232E17+)。排除了22号同源染色体平衡易位。患者2核型为46,XX,del(4)(p15.2 p16.1)dn。患者3核型为45,X[73]/46,X,r(X)(p22q22)[26],患者4核型为45,X[71]/46,X,r(X)(p11q21)[29]。患者5核型为45,X[29]/46,X,idic(Y)(q10)[31].ish(X)(p11.21)(RP11-292J24+),ishidic(Y)(q10)(RP11-115H13×2)(SRY+)。结论:***技术拓展了细胞遗传学的检测范围,提高了细胞遗传学识别异常的能力。精确定位了一例过度生长并伴有智力低下患者;准确鉴定了两例X染色体为环状染色体异常的病人,并明确区分一例标记染色体为Y染色体异常病例,为临床诊断与治疗提供了依据。***技术虽有优点但也有一定的局限性,只有在常规核型分析提供的线索指引下,恰当的选用相应的探针进行FISH检测,才能进一步明确染色体异常的性质。本研究即通过高分辨联合FISH技术,成功地纠正了一外院错诊病例,并挽救了一例正常胎儿。***技术只是常规核型分析技术的必要补充,不可能完全代替常规染色体核型分析。

关键词：荧光原位杂交染色体异常细胞遗传学产前诊断

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一种快速高效的人类淋巴母细胞建株方法

遗传 1995年第2期17卷 34-36页

作者：戴和平夏家辉潘乾龙志高李麓芸湖南医科大学医学遗传学国家重点实验室长沙410078

遗传多样性及其资源保存的研究,是全球性生物多样性研究的重要组成部分。人类突变细胞的保存,不但是研究人类生物学特征的资源,也是在细胞和分子水平上开展遗传病基础研究的材料。本文应用浓缩的 EBV(Epstein-Barr Virus)液转化外周血 B... 详细信息

遗传多样性及其资源保存的研究,是全球性生物多样性研究的重要组成部分。人类突变细胞的保存,不但是研究人类生物学特征的资源,也是在细胞和分子水平上开展遗传病基础研究的材料。本文应用浓缩的 EBV(Epstein-Barr Virus)液转化外周血 B 淋巴细胞,同时加入环孢霉素(Cyclosporine)抑制 T 淋巴细胞,整个建株过程不需 CO_2孵育箱,建株成功时间在20天左右,且成功率达95—100%,为人类突变细胞的收集、永久保存及其在基因定位、基因克隆等方面的应用创造了条件。

关键词：淋巴母细胞建株实验技术医学遗传学

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直接消化法分离单克隆贴壁细胞

湖南医科大学学报 2002年第6期27卷 553-555页

作者：赵迪诚龙志高郑多戴和平夏昆中南大学医学遗传学国家重点实验室长沙410078

目的 :建立一种高效的贴壁细胞单克隆分离法。方法 :将细胞悬液稀释成 4个密度梯度后接种于分隔开的血纤维蛋白膜层的皿上生长 ,克隆形成后吸 0 .2 5 %的胰酶消化 ,用移液器头直接挑取。结果 :永生细胞系和正常二倍体细胞在 10·cm- 2 ,... 详细信息

目的 :建立一种高效的贴壁细胞单克隆分离法。方法 :将细胞悬液稀释成 4个密度梯度后接种于分隔开的血纤维蛋白膜层的皿上生长 ,克隆形成后吸 0 .2 5 %的胰酶消化 ,用移液器头直接挑取。结果 :永生细胞系和正常二倍体细胞在 10·cm- 2 ,5·cm- 2 两种接种密度时可分离到较多的单克隆 ,分离的单克隆永生细胞培养 1个月左右 ,细胞总数可达 10 6 个 ;但分离的正常二倍体细胞需培养 1个半月左右 ,细胞总数才达 10 6 个。结论 :细胞接种于被分隔成不同区域的血纤维蛋白膜层的皿上 ,采用直接消化法可有效获得单细胞克隆 ,接种密度以 10·cm- 2 ,5·cm- 2

关键词：贴壁细胞单克隆分离血纤维蛋白膜层直接消化挑取法细胞培养

遗传性脊髓小脑型共济失调患者 SCA_1 基因突变检测分析

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中华神经科杂志 1997年第2期30卷 110-113页

作者：唐北沙刘春宇夏家辉潘乾龙志高湖南医科大学湘雅医院神经内科湖南医科大学中国医学遗传学国家重点实验室

检测中国人遗传性脊髓小脑型共济失调（ＳＣＡ）患者的ＳＣＡ１基因突变［（ＣＡＧ）ｎ］。方法应用聚合酶链（ＰＣＲ）技术，检测了２７个ＳＣＡ家系中４４例ＳＣＡ患者的ＳＣＡ１（ＣＡＧ）ｎ。结果首次发现１个家系２例患者及１位“... 详细信息

检测中国人遗传性脊髓小脑型共济失调（ＳＣＡ）患者的ＳＣＡ１基因突变［（ＣＡＧ）ｎ］。方法应用聚合酶链（ＰＣＲ）技术，检测了２７个ＳＣＡ家系中４４例ＳＣＡ患者的ＳＣＡ１（ＣＡＧ）ｎ。结果首次发现１个家系２例患者及１位“正常者”均有１个ＳＣＡ１异常等位基因扩增片段。患者Ⅲ５与其１位兄弟（“正常者”）的异常等位基因扩增片段，长度为２７２ｂｐ，三核苷酸ＣＡＧ重复数为５３次，患者Ⅲ２的异常等位基因扩增片段，长度为２９９ｂｐ，ＣＡＧ重复数为６２次，均超出正常范围。另２６个家系４２例患者的等位基因扩增片段长度范围在１６４～２１８ｂｐ之间，ＣＡＧ重复数在１７～３５次间，属于正常范围。结论来自１家系２例ＳＣＡ患者的基因分型为ＳＣＡ１型，“正常者”可能是未到发病年龄的无症状ＳＣＡ１患者，余２６个家系４２例患者不是ＳＣＡ１型。

关键词：遗传性共济失调脊髓小脑型基因诊断

TGF-β1刺激对人腹膜间皮细胞内Smad信号转导通路的影响

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中南大学学报（医学版） 2004年第2期29卷 142-147页

作者：张浩刘伏友刘映红龙志高吴鼎文敖翔陈仙花中南大学湘雅三医院肾内科长沙410013 中南大学湘雅二医院肾内科长沙410011 中南大学遗传学国家重点实验室长沙410078

目的 :探讨人腹膜间皮细胞内Smad信号转导通路在TGF β1致腹膜纤维化过程中是否发挥作用。方法 :取健康成年人大网膜进行人腹膜间皮细胞原代培养 ,经鉴定 95 %以上为人腹膜间皮细胞。用 5ng/mlTGF β1刺激第三代培养细胞 ,采用免疫组织... 详细信息

目的 :探讨人腹膜间皮细胞内Smad信号转导通路在TGF β1致腹膜纤维化过程中是否发挥作用。方法 :取健康成年人大网膜进行人腹膜间皮细胞原代培养 ,经鉴定 95 %以上为人腹膜间皮细胞。用 5ng/mlTGF β1刺激第三代培养细胞 ,采用免疫组织化学染色、Westernblotting ,ELISA以及RT PCR等方法 ,分别观察人腹膜间皮细胞内磷酸化Smad2 / 3(p Smad2 / 3)的蛋白表达以及在细胞内的迁移 ;细胞内Smad7的蛋白和mRNA表达 ;细胞外纤维连接蛋白 (FN)的蛋白、细胞内FN的mRNA以及细胞内I型胶原 (COL1 )的蛋白和mRNA表达。结果 :人腹膜间皮细胞内 p Smad2 / 3的蛋白表达在TGF β1刺激后 1 5min即开始显著增加 ,此时p Smad2 / 3的阳性细胞率为 2 9% ,细胞着色主要分散在细胞质中 ,30min阳性细胞率 81 %至 1h阳性细胞率 84 %增加最明显 ,细胞着色加深且集中在细胞核及周边 ,2h蛋白表达明显回落 ,此时阳性细胞率为 37% ,细胞着色转淡并又分散至细胞质中 ;细胞内Smad7的蛋白表达在TGF β1刺激后 2 4h明显增加 ,4 8h时达高峰 ,mRNA表达呈时间依从性增强 ;细胞外FN的蛋白、细胞内FN的mRNA以及细胞内COL1的蛋白和mRNA表达从TGF β1刺激后 2 4h起均明显增加 ,且均显示一定的时间依从性。结论 :人腹膜间皮细胞内Smad信号转导通路能?

关键词： TGF-β1 腹膜纤维化间皮细胞免疫组织化学 Smad7蛋白信号转导细胞外基质腹膜透析

老年痴呆症相关基因Nicastrin的转录调控(英文)

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生物化学与生物物理进展 2009年第8期36卷 994-1002页

作者：杨眉蔡芳潘乾龙志高夏家辉夏昆张灼华医学遗传学国家重点实验室中南大学长沙410078 生物科学与技术学院中南大学长沙410078

APP蛋白经过降解,形成老年痴呆症患者脑内老年斑的主要成分.由PS(早老素),NCT,PEN-2和APH-14种膜蛋白组成的γ分泌酶催化该降解过程.为了了解人类nicastrin(NCT)基因的转录调控机制,确定了其在人脑中的转录起始位点以及其编码区上游大... 详细信息

APP蛋白经过降解,形成老年痴呆症患者脑内老年斑的主要成分.由PS(早老素),NCT,PEN-2和APH-14种膜蛋白组成的γ分泌酶催化该降解过程.为了了解人类nicastrin(NCT)基因的转录调控机制,确定了其在人脑中的转录起始位点以及其编码区上游大小不等片段的转录起始活性.EMSA分析证实NCT启动子区的4个AP-1结合位点和2个NFAT结合位点能够与相应的转录因子结合,能够改变转录因子调控能力的定点突变和PDTC诱导使得NCT启动子在HeLa细胞和大鼠皮质神经元中的启动活性都有所改变.以上结果说明:AP-1和NFAT确实参与了人类NCT基因的转录调控.

关键词：老年痴呆症 Nicastrin 启动子转录调控 AP-1 NFAT

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人皮肤成纤维细胞的分离和体外培养

湖南医科大学学报 2002年第5期27卷 477-478页

作者：陈勇戴和平龙志高潘乾郑多夏昆夏家辉中南大学中国医学遗传学国家重点实验室长沙410078

基因治疗方式可分为间接体内法（ex vivo）和直接体内法（in vivo0。离体基因治疗方法亦称间接法是将患者的某种组织或细胞取出体外，在短期培养的条件下转入目的基因，进行筛选和富集整合有外源基因的阳性细胞，然后再回输到患者体内。

关键词：皮肤成纤维细胞分离体外培养基因治疗

一例45,XX,-13/46,XX,r(13)/46,XX,r(13;13)/47,XX,2r(13)(p13q32.3)患者及其表型定位研究

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中华医学遗传学杂志 2004年第4期21卷 392-394页

作者：梁德生邬玲仟龙志高潘乾戴和平夏家辉中南大学医学遗传学国家重点实验室长沙410078

目的　通过对 1例 13号环状染色体综合征患者的染色体分析、表型定位研究和相关文献复习比较 ,探索染色体区带与表型的关系。方法　应用染色体G带、C带、N带、高分辨显带技术、表型定位和文献复习比较分析方法 ,对 1例 13号环状染色体... 详细信息

目的　通过对 1例 13号环状染色体综合征患者的染色体分析、表型定位研究和相关文献复习比较 ,探索染色体区带与表型的关系。方法　应用染色体G带、C带、N带、高分辨显带技术、表型定位和文献复习比较分析方法 ,对 1例 13号环状染色体综合征患者进行了研究。结果　患儿双亲核型正常 ,患儿核型为 45 ,XX ,-13 /4 6,XX ,r( 13 ) /4 6,XX ,r( 13 ;13 ) /4 7,XX ,2r( 13 ) ( p13q3 2 .3 ) ;典型的 13号环状染色体综合征与 13q3 4的缺失相关 ;13号环状染色体综合征患者的手足、肾脏、骨骼、外生殖器异常及心脏杂音与 13 q3 2 q3 2 .2片段的缺失有关 ,缩颌与 13q3 2 .3 q3 3片段的缺失相关 ,肛门闭锁与 13 q2 2 q3 2的缺失相关 ,无脑畸形与 13 q13 q2 2片段的缺失相关。结论　新的环状染色体断裂重接点在 13 p13和 13q3 2 .3 ;13号环状染色体综合征患者临床特征的差异与染色体区带缺失部位的不同密切相关。

关键词：患者综合征表型染色体环状文献复习定位研究显带技术核型片段

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细胞遗传学产前诊断技术与规范

中国实用妇科与产科杂志 2015年第9期31卷 811-814页

作者：龙志高邢恩鸿王玉琢中南大学生命科学学院医学遗传学国家重点实验室湖南家辉遗传专科医院中南大学湘雅医院产前诊断中心湖南长沙410000 承德医学院附属医院河北承德067000 沧州市人民医院河北沧州061000

通过对羊水、脐血或绒毛进行细胞培养,对其进行特殊的制片与染色体显带,在光学显微镜下进行染色体数目和结构的分析检测,观察其是否存在数目或结构的异常,是细胞遗传学在产前诊断中的主要技术手段。文章主要介绍细胞遗传学在产前诊断中... 详细信息

通过对羊水、脐血或绒毛进行细胞培养,对其进行特殊的制片与染色体显带,在光学显微镜下进行染色体数目和结构的分析检测,观察其是否存在数目或结构的异常,是细胞遗传学在产前诊断中的主要技术手段。文章主要介绍细胞遗传学在产前诊断中的应用与规范。

关键词：细胞遗传学产前诊断染色体规范