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绵羊NDRG1基因表达和干扰载体的构建及验证

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中国畜牧杂志 2022年第11期58卷 200-206页

作者：龙德智孙楠祯郝科兴陈慧慧王静胡广东石河子大学动物科技学院新疆石河子832000

为研究NDRG1基因在绵羊生长繁殖中的功能,本实验通过克隆NDRG1基因编码区并分别构建过表达和干扰载体,在细胞水平对其功能进行验证。利用RT-PCR扩增绵羊NDRG1基因CDs区,将其克隆至pcDNA3.1(+)载体构建重组表达载体,设计并构建针对NDRG1... 详细信息

为研究NDRG1基因在绵羊生长繁殖中的功能,本实验通过克隆NDRG1基因编码区并分别构建过表达和干扰载体,在细胞水平对其功能进行验证。利用RT-PCR扩增绵羊NDRG1基因CDs区,将其克隆至pcDNA3.1(+)载体构建重组表达载体,设计并构建针对NDRG1CDs区干扰载体,利用内切酶消化法对相关质粒进行鉴定。将构建成功的重组载体转染到HEK293T细胞中,分别利用RT-qPCR和Western Blot方法检测其mRNA和蛋白表达量,确认载体功能。结果显示,NDRG1基因克隆片段为1378 bp,与已发布预测的绵羊NDRG1基因进行比对显示在第1031核苷酸位点发生了G-A突变,氨基酸比对结果显示其同源性为100%。酶切鉴定结果显示,NDRG1表达载体和干扰载体构建成功。RT-qPCR与WesternBlot结果表明,构建的重组载体可介导NDRG1基因在HEK 293T细胞中极显著增高,构建的干扰载体可显著降低NDRG1基因表达水平,其中NDRG1-shRNA3干扰效果极显著且高达90%。本实验成功克隆绵羊NDRG1基因,构建针对该基因的表达载体和干扰载体,并在细胞水平验证其功能,为深入研究NDRG1基因在绵羊细胞中的功能提供基础。

关键词： NDRG1基因表达载体干扰载体绵羊

过表达NDRG1对绵羊原代子宫内膜上皮细胞生物功能的影响

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农业生物技术学报 2023年第11期31卷 2304-2312页

作者：龙德智郝科兴陈慧慧胡广东王静石河子大学动物科技学院

子宫内膜上皮细胞作为子宫内重要的细胞之一，其生物功能的改变影响着雌性动物妊娠的发生。为了探究N-myc下游调节基因1 (N-myc downstream regulated gene 1, NDRG1)的过表达对绵羊(Ovis aries)原代子宫内膜上皮细胞的生物功能的影响... 详细信息

子宫内膜上皮细胞作为子宫内重要的细胞之一，其生物功能的改变影响着雌性动物妊娠的发生。为了探究N-myc下游调节基因1 (N-myc downstream regulated gene 1, NDRG1)的过表达对绵羊(Ovis aries)原代子宫内膜上皮细胞的生物功能的影响，本研究纯化原代绵羊子宫内膜上皮细胞，用瞬时转染的方法将NDRG1过表达载体导入原代子宫内膜上皮细胞，qRT-PCR和Western blot检测瞬时细胞模型的构建；用qRT-PCR检测细胞周期蛋白D1基因(cyclin D1, CCND1)、CCNB1和CCNA1、上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)相关基因的表达；CCK-8法检测细胞的增殖能力，划痕实验检测细胞迁移能力。结果表明，pcDNA3.1-NDRG1组NDRG1基因及其蛋白的表达量极显著增高(P<0.01);CCND1表达量极显著下降(P<0.01);E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达量极显著增高(P<0.01)，波形蛋白基因(Vimentin)表达量极显著降低(P<0.01);CCK-8结果显示，pcDNA3.1-NDRG1组增殖能力被抑制；划痕实验结果显示，pcDNA3.1-NDRG1组抑制细胞迁移能力。综上表明，NDRG1的过表达抑制了细胞的增殖，阻断了细胞周期G1/S的转变，抑制了其迁移能力，提示这与EMT过程相关。本研究为促进绵羊早期妊娠成功提供研究材料。

关键词： N-myc下游调节基因1 (NDRG1) 原代子宫内膜上皮细胞绵羊

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中国—新西兰自由贸易区研究

中国—新西兰自由贸易区研究

作者：龙德智湘潭大学

学位级别：硕士

随着世界经济全球化、一体化的进程不断加快，区域性经济一体化也在不断发展深入。而以区域性贸易协定为基础的双边及多边贸易也在全球范围内不断兴起。作为发展中国家的代表之一，中国也在不断的尝试和融入这个发展潮流当中。在继中国... 详细信息

随着世界经济全球化、一体化的进程不断加快，区域性经济一体化也在不断发展深入。而以区域性贸易协定为基础的双边及多边贸易也在全球范围内不断兴起。作为发展中国家的代表之一，中国也在不断的尝试和融入这个发展潮流当中。在继中国-智利、中国-巴基斯坦自由贸易协定签订之后，中国也从2004年开始经过3年15轮的谈判和协商，终于和新西兰达成了中国-新西兰自由贸易协定。此协定具有里程碑式的意义，协定的签订和实施结束了中国与发达国家之间没有贸易协定的尴尬历史。这种实质性的突破，也是中国经济全球化目标的重要一笔。本文从自由贸易理论的基础开始对中国、新西兰之间建立自由贸易区的必然性进行了理论分析，且对中国、新西兰签订自由贸易协定的现实政治背景、国际形势、及经贸往来进行了细致分析。以此为根据，研究和分析中国-新西兰自由贸易区的经济、政治及战略效应，并寻找缔约国间自贸协定存在的问题。通过分析影响中新自贸区发展的各种负面因素后，本文会给出对中新较为适合的解决策略。本文还就中新自由贸易区的广阔前景进行了细致深入的分析并以此映射中国和其他各国建立双边及多边自由贸易区的必要性。

关键词：区域经济一体化自由贸易协定（区）中新自贸区乳业

哈萨克羊胎盘原代滋养层细胞的分离、纯化与基本特征鉴定

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畜牧与兽医 2022年第11期54卷 5-11页

作者：陈慧慧郝科兴龙德智宋美君海思妤王静胡广东石河子大学动物科技学院新疆石河子832000

为了获得纯度较高的哈萨克羊胎盘原代滋养层细胞,采用组织块培养法、胰酶消化法和胰酶+组织块法分离原代滋养层细胞,通过胰酶差时消化法对细胞进行纯化,显微镜下观察滋养层细胞的形态学特点和生长特性,利用免疫细胞化学染色法对滋养层... 详细信息

为了获得纯度较高的哈萨克羊胎盘原代滋养层细胞,采用组织块培养法、胰酶消化法和胰酶+组织块法分离原代滋养层细胞,通过胰酶差时消化法对细胞进行纯化,显微镜下观察滋养层细胞的形态学特点和生长特性,利用免疫细胞化学染色法对滋养层细胞的特异性表达角蛋白7(cytokeratin 7,CK7)进行鉴定,通过RT-PCR对滋养层细胞标志基因干扰素-τ(IFN-τ)进行检测,同时使用孕酮(P_(4))、雌二醇(E_(2))或P_(4)、E_(2)和IFN-τ处理滋养层细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胚胎附植相关基因的转录水平。结果显示,与其他方法相比,利用胰酶+组织块法细胞生长周期较短,第2天有细胞从组织块中迁出,5~6 d细胞呈单层铺开,细胞均呈上皮样生长。免疫细胞化学染色显示,细胞CK7染色阳性结果大于95%。RT-PCR检测到分离的滋养层细胞可正常表达IFN-τ。此外,通过P_(4)、E_(2)和IFN-τ处理后,胚胎附植相关基因ISG15、CXCL10、RSAD2、CTSL、SPP1和MUC1在滋养层细胞中的表达水平显著上调。本研究通过胰酶+组织块培养法结合胰酶差时消化法成功分离和纯化哈萨克羊胎盘原代滋养层细胞,为哈萨克羊胚胎附植相关调控机制的研究奠定了基础。

关键词：哈萨克羊滋养层细胞胰酶+组织块培养

绵羊子宫内膜上皮细胞和基质细胞的分离与鉴定

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畜牧与兽医 2021年第7期53卷 64-68页

作者：凌芳郝科兴陈慧慧龙德智王静胡广东石河子大学动物科技学院新疆石河子832000

为了有效分离纯化绵羊子宫内膜上皮细胞和基质细胞,为绵羊早期胚胎附植相关研究提供可靠的体外细胞模型,本试验采用组织块培养法分离培养子宫内膜上皮和基质细胞,利用胰酶差时消化法对2种细胞进行纯化,通过免疫荧光法对上皮细胞和基质... 详细信息

为了有效分离纯化绵羊子宫内膜上皮细胞和基质细胞,为绵羊早期胚胎附植相关研究提供可靠的体外细胞模型,本试验采用组织块培养法分离培养子宫内膜上皮和基质细胞,利用胰酶差时消化法对2种细胞进行纯化,通过免疫荧光法对上皮细胞和基质细胞的特异性表达蛋白角蛋白18(CK18)和波形蛋白分别进行鉴定。结果显示,利用组织块法第3天开始有细胞从组织块中爬出,5~6 d单层细胞铺开,显微镜下观察细胞形态呈梭形和铺路石状,2种细胞交织在一起生长。使用0.25%胰蛋白酶消化细胞时,基质细胞约90 s变圆有脱落,而上皮细胞则需要6 min变圆有脱落。免疫荧光鉴定结果显示上皮细胞呈角蛋白阳性,波形蛋白染色阴性,阳性率大于95%。基质细胞呈波形蛋白阳性,角蛋白阴性,阳性率大于95%。研究结果表明,采用组织块培养法结合胰酶差时消化法可成功分离得到纯度较高的绵羊子宫内膜上皮细胞和基质细胞,为绵羊胚胎附植过程中子宫内膜细胞的相关生物学功能研究奠定基础。

关键词：绵羊子宫内膜细胞组织块培养差时消化

Notch通路对绵羊滋养层细胞生物学特性的影响

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Notch通路对绵羊滋养层细胞生物学特性的影响

中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第二十次学术研讨会

作者：陈慧慧郝科兴龙德智王静胡广东新疆石河子大学动物科技学院

引言Notch信号途径是通过细胞间相互作用来调节生物体生长发育的一个高度保守的信号通路,能够影响胚胎发育过程中的细胞分化、增殖、侵袭以及凋亡,是决定细胞分化命运、影响器官形成和形态发生的重要通路之一。滋养层细胞是构成胎盘屏...

引言Notch信号途径是通过细胞间相互作用来调节生物体生长发育的一个高度保守的信号通路,能够影响胚胎发育过程中的细胞分化、增殖、侵袭以及凋亡,是决定细胞分化命运、影响器官形成和形态发生的重要通路之一。滋养层细胞是构成胎盘屏障的主要组织结构,对胚胎的植入过程起重要的调节作用,滋养层细胞还具有重要的内分泌功能。

关键词：

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绵羊多核绒毛膜滋养层细胞的分离培养与鉴定

绵羊多核绒毛膜滋养层细胞的分离培养与鉴定

绵羊子宫内膜上皮细胞和基质细胞的分离纯化培养与鉴定

中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第二十次学术研讨会

作者：龙德智郝科兴陈慧慧凌芳王静胡广东石河子大学动物科技学院

引言绵羊绒毛膜滋养层细胞是绵羊胎盘细胞的一部分,存在于胎盘合体滋养层,是构成胎盘屏障的主要组织结构,滋养层细胞在胚胎的植入过程中扮演重要角色,其增殖和功能调节的异常与多种胎盘发育相关疾病的发生发展密切相关。目前,绵羊滋养...

引言绵羊绒毛膜滋养层细胞是绵羊胎盘细胞的一部分,存在于胎盘合体滋养层,是构成胎盘屏障的主要组织结构,滋养层细胞在胚胎的植入过程中扮演重要角色,其增殖和功能调节的异常与多种胎盘发育相关疾病的发生发展密切相关。目前,绵羊滋养层细胞的研究报道较少,而滋养层细胞是研究绵羊胚胎附植相关机理的主要体外模型,因此建立稳定可传代的滋养层细胞系非常重要。

关键词：

来源： cnki会议评论

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绵羊子宫内膜上皮细胞和基质细胞的分离纯化培养与鉴定

中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第二十次学术研讨会

作者：凌芳郝科兴陈慧慧龙德智王静胡广东石河子大学动物科技学院

引言胚胎着床是妊娠成功的关键步骤,在胚胎着床前,子宫内膜经过类固醇激素诱导而发生结构和功能的改变,即子宫内膜的蜕膜化,在细胞水平上主要表现为子宫内膜上皮细胞和基质细胞的增殖和凋亡过程。为了更好地研究胚胎附植过程中子宫内膜...

引言胚胎着床是妊娠成功的关键步骤,在胚胎着床前,子宫内膜经过类固醇激素诱导而发生结构和功能的改变,即子宫内膜的蜕膜化,在细胞水平上主要表现为子宫内膜上皮细胞和基质细胞的增殖和凋亡过程。为了更好地研究胚胎附植过程中子宫内膜复杂的结构和功能,分离子宫内膜上皮细胞和基质细胞,在体外进行原代细胞培养,建立体外研究子宫内膜的细胞模型。

关键词：

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深度学习的三维模型识别研究综述

计算机科学与探索 2024年第4期18卷 916-929页

作者：周燕李文俊党兆龙曾凡智叶德旺佛山科学技术学院电子信息工程学院广东佛山528000 华南理工大学计算机科学与工程学院广州510641

随着三维扫描仪、LiDAR等三维视觉感知设备的快速发展,三维模型识别方向正逐渐引起越来越多的研究者的关注。该领域的核心任务是三维模型的分类与检索。深度学习技术在二维视觉任务方面已经取得显著的成就,将这一技术引入三维视觉领域... 详细信息

随着三维扫描仪、LiDAR等三维视觉感知设备的快速发展,三维模型识别方向正逐渐引起越来越多的研究者的关注。该领域的核心任务是三维模型的分类与检索。深度学习技术在二维视觉任务方面已经取得显著的成就,将这一技术引入三维视觉领域不仅突破了传统方法的限制,还在自动驾驶、智能机器人等领域取得了引人瞩目的进展。然而,将深度学习技术应用于三维模型识别任务仍然面临着多项挑战。鉴于此,对深度学习在三维模型识别任务中的应用进行综述。首先,论述了常用的评价指标和公开数据集,介绍每个数据集的相关信息和来源。接着,从多个角度出发,包括点云、视图、体素以及多模态融合等,详细介绍现有具有代表性的方法,并梳理了近年来的相关研究工作。通过在数据集上对这些方法的性能进行对比,分析各个方法的优势和局限性。最后,基于各类方法的利弊,总结当前亟待解决的三维模型识别任务中的挑战,并展望了未来在该领域的发展趋势。

关键词：三维视觉深度学习点云视图体素多模态