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基于核酸侵入反应偶联PCR的粪便样本基因甲基化定量分析方法及用于结直肠癌无创筛查

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分析化学 2018年第10期46卷 1552-1559页

作者：刘琳琳齐谢敏邹秉杰宋沁馨周国华中国药科大学药物质量与安全预警教育部重点实验室南京军区南京总医院药理科

从粪便中检测BMP3基因甲基化水平可实现对结直肠癌的无创筛查,但对检测方法的灵敏度与特异性要求很高。本研究将核酸侵入反应与实时荧光聚合酶链式反应(PCR)偶联,建立了BMP3基因甲基化检测方法,以ACTB基因作为参比基因,通过优化反应体... 详细信息

从粪便中检测BMP3基因甲基化水平可实现对结直肠癌的无创筛查,但对检测方法的灵敏度与特异性要求很高。本研究将核酸侵入反应与实时荧光聚合酶链式反应(PCR)偶联,建立了BMP3基因甲基化检测方法,以ACTB基因作为参比基因,通过优化反应体系中探针浓度、Flap核酸内切酶与Taq酶用量,提高BMP3目标基因与ACTB参比基因的扩增效率至接近100%,实现了利用ΔCT法进行BMP3基因甲基化水平的相对定量,可对低至10 copies的甲基化BMP3基因进行检测,并可从非甲基化模板中准确定量0.01%的甲基化模板,非甲基化模板不产生非特异性信号,表明本方法具有极高的灵敏度与良好的特异性。将本方法用于16例结直肠癌患者、7例结直肠腺瘤患者及19例健康人粪便样本中BMP3基因甲基化检测,结果表明,有5例结直肠癌患者的粪便样本检出BMP3基因甲基化,2例结直肠腺瘤患者的粪便样本检出BMP3甲基化,健康人的粪便样本均没有检出甲基化,表明本方法可用于检测粪便样本中基因的甲基化水平,为临床开展基于粪便中基因甲基化检测的无创结直肠癌筛查提供了新方法。

关键词： DNA甲基化实时荧光聚合酶链式反应核酸侵入反应结直肠癌粪便DNA

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单细胞蛋白定量检测方法研究进展

中国药科大学学报 2015年第5期46卷 521-531页

作者：沈燚昀齐谢敏宋沁馨周国华药物质量与安全预警教育部重点实验室(中国药科大学) 南京210009 中国药科大学药物分析教研室南京210009 南京军区南京总医院药理科南京210002

蛋白质的存在及表达水平差异可以阐明生物体的生理或病理变化机制,因此蛋白质的定量检测对疾病发生机制研究、疾病诊断和预后评价等具有重要意义。传统的组织水平上的蛋白定量检测反映的是细胞中蛋白质表达量的平均水平,它往往忽略了单... 详细信息

蛋白质的存在及表达水平差异可以阐明生物体的生理或病理变化机制,因此蛋白质的定量检测对疾病发生机制研究、疾病诊断和预后评价等具有重要意义。传统的组织水平上的蛋白定量检测反映的是细胞中蛋白质表达量的平均水平,它往往忽略了单个细胞之间存在的差异,而单细胞蛋白定量检测手段则更能真实地反映这种差异。近年来发展了一系列单细胞蛋白定量检测的方法,如微流控技术、微孔技术、光导纤维纳米生物传感器技术、基于活性的荧光探针技术和质谱法等,本文就这些方法的原理、优缺点等进行简要介绍。

关键词：单细胞蛋白质定量检测研究进展微流控技术微孔技术光导纤维纳米生物传感器荧光探针质谱法

液相色谱-串联质谱法快速测定人血浆中氯马斯汀及其药动学

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中国新药与临床杂志 2011年第2期30卷 156-160页

作者：齐谢敏杨靖云昌宏于勇丁黎文爱东杨林中国药科大学药学院药物分析教研室江苏南京210009 中国人民解放军第四军医大学第一附属医院陕西西安710032

目的建立人血浆中氯马斯汀的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)快速测定方法,并研究氯马斯汀注射液在健康中国人体内的单、多剂量药动学特征。方法血浆样品用氢氧化钠碱化并加甲醇沉淀蛋白后,以正己烷提取,采用LC-MS/MS法测定。以0.2%甲酸(含... 详细信息

目的建立人血浆中氯马斯汀的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)快速测定方法,并研究氯马斯汀注射液在健康中国人体内的单、多剂量药动学特征。方法血浆样品用氢氧化钠碱化并加甲醇沉淀蛋白后,以正己烷提取,采用LC-MS/MS法测定。以0.2%甲酸(含5 mmol·L^(-1)醋酸铵)-甲醇(30:70,V/V)为流动相。采用ESI源在MRM模式下用于定量分析的反应离子对分别为m/z344.2→215.1(氯马斯汀)和m/z275.1→230.1(内标氯苯那敏)。12名健康志愿者单次及多次肌内注射氯马斯汀2mg,评价其药动学特征。结果氯马斯汀在0.02～24μg·L^(-1)内线性良好。氯马斯汀单次给药及多次给药d3后主要药动学参数:ρ_(max)分别为(2.4±1.4),(5.5±0.7)μg·L^(-1);AUC_(0-96)分别为(65±16),(257±33)μg·h·L^(-1);t_(1/2)分别为(40±7),(47±19)h。结论本试验建立的测定方法快速灵敏。氯马斯汀注射液的人体药动学特征无性别差异,多次给药后在人体内存在蓄积现象。

关键词：氯马斯汀串联质谱法色谱法,高压液相

实时荧光聚合酶链式反应偶联高特异性核酸侵入反应检测单核苷酸多态性

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分析化学 2015年第7期43卷 1001-1008页

作者：郑梦琳齐谢敏童欢刘云龙邹秉杰宋沁馨周国华药物质量与安全预警教育部重点实验室中国药科大学南京军区南京总医院药理科

建立了实时荧光聚合酶链式反应(PCR)偶联高特性核酸侵入反应检测单核苷酸多态性(SNP)的方法。优化了体系中flap核酸内切酶1(FEN1酶)和野生型检测探针等用量,确定了最佳反应条件,即FEN1酶用量为1.5 U,野生型检测探针用量为0.125μmol/L,... 详细信息

建立了实时荧光聚合酶链式反应(PCR)偶联高特性核酸侵入反应检测单核苷酸多态性(SNP)的方法。优化了体系中flap核酸内切酶1(FEN1酶)和野生型检测探针等用量,确定了最佳反应条件,即FEN1酶用量为1.5 U,野生型检测探针用量为0.125μmol/L,0.5μmol/L Invader突变型检测探针,各0.25μmol/L通用野生型(VIC)和突变型(FAM)荧光共振转移发卡探针,显著降低了野生型样本和突变型样本背景信号,避免了背景信号对检测结果分型的干扰。采用本方法对编码乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因ALDH2*2位点21例样本、细胞色素P450 2C19基因CYP2C19*2和CYP2C19*3位点各19例样本进行分型检测,结果表明,ALDH2*2位点GG纯合10例,GA杂合8例,AA纯合3例;CYP2C19*2位点GG纯合9例,GA杂合8例,AA纯合2例;CYP2C19*3位点GG纯合18例,GA杂合1例。使用焦磷酸测序进行验证,两种方法检测结果一致。本方法特异性好、操作简便、耗时短、成本低,可实现对SNP单管闭管无污染的分型检测。

关键词：实时荧光PCR 核酸侵入反应单核苷酸多态性乙醛脱氢酶2基因细胞色素P450 2C19基因

棉花黄萎病菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

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生态学杂志 2015年第7期34卷 2058-2063页

作者：沈元劼齐谢敏刘标周国华李泰明中国药科大学生命科学与技术学院南京210009 南京大学医学院附属金陵医院南京210093 国家环保总局南京环境科学研究所南京210037

利用棉花黄萎病菌ITS区特异性引物建立了棉花黄萎病菌的实时荧光定量PCR检测方法。利用实时荧光PCR体系,以324 bp的PCR扩增产物构建了标准曲线并对该方法的灵敏度、特异性和重复性进行了评估。结果表明:该方法特异性良好,检测灵敏度为10... 详细信息

利用棉花黄萎病菌ITS区特异性引物建立了棉花黄萎病菌的实时荧光定量PCR检测方法。利用实时荧光PCR体系,以324 bp的PCR扩增产物构建了标准曲线并对该方法的灵敏度、特异性和重复性进行了评估。结果表明:该方法特异性良好,检测灵敏度为100 copies·μL-1,标准曲线的相关系数为0.994,扩增效率为91.5%。利用建立的检测方法对转基因棉田及常规棉田土壤样本进行检测,结果表明转基因棉田中棉花黄萎病菌数量显著高于常规棉田,与实际观测到的现象一致,也证明了本方法的可行性。因此,本研究建立的棉花黄萎病菌检测方法具有灵敏度高、重复性好等特点,为棉花的种植及病害防治提供了有效的检测手段。

关键词：棉花黄萎病菌实时荧光定量PCR 转基因棉

健康人群口服复方二甲双胍格列吡嗪片尿药排泄研究

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天津医药 2012年第1期40卷 7-11页

作者：佟若菲齐谢敏丁黎宋沁馨天津市儿童医院 300074 中国药科大学药物分析教研室药物质量与安全预警教育部重点实验室

目的:建立二甲双胍和格列吡嗪尿药浓度的测定方法,研究健康人群口服二甲双胍格列吡嗪片后二甲双胍和格列吡嗪的尿药排泄特征。方法:二甲双胍尿液样品用流动相稀释,经涡旋高速离心后,采用LichrospherODS色谱柱分离,流动相为乙腈-3mmol.L-... 详细信息

目的:建立二甲双胍和格列吡嗪尿药浓度的测定方法,研究健康人群口服二甲双胍格列吡嗪片后二甲双胍和格列吡嗪的尿药排泄特征。方法:二甲双胍尿液样品用流动相稀释,经涡旋高速离心后,采用LichrospherODS色谱柱分离,流动相为乙腈-3mmol.L-1十二烷基硫酸钠(25:75),用紫外检测器检测,波长为232nm。格列吡嗪尿液样品经盐酸酸化后用乙酸乙酯提取,采用LichrospherODS色谱柱分离,流动相为乙腈-0.1%的乙酸水溶液(55:45),质谱采用电喷雾离子源和选择性离子检测方式。10名健康受试者单次口服二甲双胍格列吡嗪片2片后,测定给药前及给药后0～2、2～4、4～6、6～8、8～10、10～12、12～16、16～24h各时间段的二甲双胍及格列吡嗪尿药浓度。结果:高、中、低浓度的批间与批内精密度(RSD)相对标准差均小于10%。10名健康受试者单次口服二甲双胍格列吡嗪片后,24h内尿液中二甲双胍及格列吡嗪的累积排泄量分别为(102.5±27.3)mg和(452.2±191.4)μg,平均累积排泄率分别为(26.27±7.00)%和(9.04±3.83)%。结论:建立的人尿样中格列吡嗪的高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)测定方法和二甲双胍的高效液相色谱(HPLC)测定方法准确、灵敏,适用于尿药排泄检测。

关键词：二甲双胍格列吡嗪复方合剂色谱法,液相质谱分析法

苯环喹溴铵对大鼠肝脏CYP450酶诱导作用的研究

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中国药学杂志 2013年第17期48卷 1454-1459页

作者：孙鲁宁丁黎严拯宇罗雪梅朱贺沙克亚齐谢敏刘筱雪陈小平南京医科大学第一附属医院南京210029 中国药科大学南京210009 北京世桥生物制药有限公司北京100131

目的研究苯环喹溴铵对大鼠肝脏CYP450酶是否有诱导作用。方法将SD大鼠,分为空白溶剂组、阳性对照组和苯环喹溴铵低中高剂量给药组(分别鼻腔给予苯环喹溴铵生理盐水溶液1,3或9 mg·kg-1),分别于连续给药后处死,取肝称重并制备微粒体。计... 详细信息

目的研究苯环喹溴铵对大鼠肝脏CYP450酶是否有诱导作用。方法将SD大鼠,分为空白溶剂组、阳性对照组和苯环喹溴铵低中高剂量给药组(分别鼻腔给予苯环喹溴铵生理盐水溶液1,3或9 mg·kg-1),分别于连续给药后处死,取肝称重并制备微粒体。计算大鼠肝脏脏器系数;测定大鼠肝脏微粒体CYP450蛋白含量;通过HPLC-MS/MS测定大鼠肝微粒体温孵体系中6β-羟基睾酮和对乙酰氨基酚的浓度;应用底物法测定大鼠肝微粒体CYP1A1/2和CYP3A1/2酶的活性。结果阳性对照组与空白溶剂组相比,在大鼠肝脏脏器系数、CYP450蛋白含量及CYP1A1/2和CYP3A1/2酶活性上均有增加,且具有显著性差异(P0.05);苯环喹溴铵低中高剂量给药组大鼠肝脏CYP3A1/2酶的活性未高于空白溶剂组。结论阳性对照组对大鼠肝脏CYP450酶有诱导作用,所建立的实验体系可用于诱导作用的评价;苯环喹溴铵低中高3个剂量组对大鼠肝脏CYP450酶均无诱导作用。

关键词：苯环喹溴铵大鼠肝微粒体诱导底物法细胞色素P450

T.S.艾略特与乔治·桑塔亚纳文学思想比较研究

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外国文学研究 2024年第1期46卷 128-141页

作者：谢敏敏湖南师范大学外国语学院

集哲学家、美学家和诗人多重身份于一体的乔治·桑塔亚纳是T.S.艾略特在哈佛求学时的老师,也是其早期文学创作的领路人之一。桑塔亚纳不仅启发艾略特摆脱了在本体论认知上的纠缠困境,还很好地促进了艾略特早期诗风的转变以及创作视野的... 详细信息

集哲学家、美学家和诗人多重身份于一体的乔治·桑塔亚纳是T.S.艾略特在哈佛求学时的老师,也是其早期文学创作的领路人之一。桑塔亚纳不仅启发艾略特摆脱了在本体论认知上的纠缠困境,还很好地促进了艾略特早期诗风的转变以及创作视野的成熟。艾略特继承了桑塔亚纳部分文学遗产,在诗歌哲学意蕴的生产、客体化诗学的成型以及对但丁诗歌艺术的借鉴上等方面都与自己的老师保持了诸多的一致性。与此同时,艾略特在借鉴、吸收这些桑塔亚纳文学理念的同时,亦进行了个性化转化和超越。简而言之,桑塔亚纳为艾略特走向现代主义运动的舞台中心发挥了重要却易被忽略的贡献。

关键词： T.S.艾略特乔治·桑塔亚纳哲学诗歌客体但丁

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长三角临港服务业的空间演进特征与影响因素

经济地理 2024年

作者：谢敏卢凌美浙江药科职业大学药商学院/医药数字化技术学院

根据临港服务业的分类，以物流服务业、运输服务业和金融与信息服务业三大临港服务业为研究对象，运用集聚度测算理论，从省域、市域以及临港服务业企业多尺度视角研究长三角临港服务业空间结构演进机理，探究区域内不同时期不同地域多... 详细信息

根据临港服务业的分类，以物流服务业、运输服务业和金融与信息服务业三大临港服务业为研究对象，运用集聚度测算理论，从省域、市域以及临港服务业企业多尺度视角研究长三角临港服务业空间结构演进机理，探究区域内不同时期不同地域多层次空间演进特征。研究发现：①长三角临港服务业的发展呈现出逐渐增强的趋势，其中上海的临港服务业影响力相对更强，浙江和江苏紧随其后。②临港服务业与港口城市的扩散结合在一起，临港服务业与港口城市互为支撑。市域的空间结构从单中心为主，再经双中心发展成为多中心的空间结构。临港服务业集聚的冷热点空间结构比较稳定，上海、苏州、杭州逐渐成为核心区域。长三角临港服务业的空间联系网络由简单网络演化成为四通八达的港口城市交流网，其中金融与信息服务业的空间联系演变成了以上海为核心的发散式空间联系网络。③城市化水平、知识溢出和滞后二期均有利于临港服务业的集聚，而信息化水平和政府规模明显抑制了长三角地区临港服务业的集聚。在临港物流服务业、临港运输服务业和临港金融与信息服务业中也基本类似。

关键词：临港服务业港口城市空间结构区位集聚产业关联