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甘油/正丁醇联合妥布霉素杀灭金黄色葡萄球菌的机制探究

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甘油/正丁醇联合妥布霉素杀灭金黄色葡萄球菌的机制探究

作者：黄雪冰福建师范大学

学位级别：硕士

细菌耐药已经发展成为全球性公共卫生问题。抗生素增效减毒是应对细菌耐药危机的重要策略。本课题组前期研究发现,甘油和正丁醇都可以增强氨基糖苷类抗生素杀灭金黄色葡萄球菌,但各自的杀菌机制尚未清楚。从遗传学角度寻找参与甘油/正... 详细信息

细菌耐药已经发展成为全球性公共卫生问题。抗生素增效减毒是应对细菌耐药危机的重要策略。本课题组前期研究发现,甘油和正丁醇都可以增强氨基糖苷类抗生素杀灭金黄色葡萄球菌,但各自的杀菌机制尚未清楚。从遗传学角度寻找参与甘油/正丁醇增效杀菌的关键基因,并揭示关键基因在甘油/正丁醇联合妥布霉素杀灭金黄色葡萄球菌中的作用机理,可为今后实际应用提供理论依据,也可根据作用机理发掘更适合的抗生素佐剂,因而具有重要的研究价值。本研究采用独特的常压室温等离子体(ARTP)诱变技术,创建金黄色葡萄球菌突变文库,经过3轮筛选富集获得对甘油/正丁醇联合妥布霉素处理耐受的突变株,对耐受菌株进行全基因组测序并与野生型菌株全基因组序列进行比对,获得与甘油联合妥布霉素处理耐受相关的突变基因glpK,以及与正丁醇联合妥布霉素处理耐受相关的突变基因adhP。通过同源重组技术分别构建金黄色葡萄球菌的glpK与adhP单基因敲除菌株,测试甘油/正丁醇联合妥布霉素处理的杀菌效果,结果显示,与野生型相比,△glpK对甘油联合妥布霉素处理更耐受,而△adhP对正丁醇联合妥布霉素处理更耐受。而回补及过表达Glp K或Adh P能够观察到菌株对联合处理敏感性的恢复或增加。另外,也发现大肠杆菌glpK或adhP敲除株比野生型大肠杆菌更耐受联合处理,大肠杆菌过表达Glp K/Adh P后对联合处理更敏感,与金黄色葡萄球菌的观察结果一致。这些结果表明,glpK是参与甘油增强妥布霉素杀菌的关键基因,adhP是参与正丁醇增强妥布霉素杀菌的关键基因。进一步的研究表明,△glpK与ARTP诱变获得的glpK诱变株(ARTP-2A)降低甘油联合处理时的金黄色葡萄球菌对妥布霉素的摄取,△adhP与ARTP诱变获得的adhP诱变株(N-10H)降低了正丁醇联合处理时妥布霉素的摄取。探究抗生素摄取与细胞膜的流动性的关系时发现,甘油/正丁醇能够增强金黄色葡萄球菌的细胞膜流动性,而敲除株△glpK/△adhP与野生型相比细胞膜流动性减弱。另外在探究甘油代谢与能量之间的关系时发现,甘油处理能够提高金黄色葡萄球菌的ATP与质子动力势(PMF)水平,但对敲除株△glpK没有效果。故认为正丁醇增强妥布霉素摄取与细胞膜流动性有关,而甘油增强妥布霉素摄取与细胞膜流动性及ATP与PMF水平都有关。另外,本研究还测试了甘油联合处理对临床耐药金黄色葡萄球菌的杀菌效果,结果显示甘油联合氨基糖苷类抗生素对大部分临床耐药金黄色葡萄球菌也保持良好的杀菌效果。综上所述,本研究以金黄色葡萄球菌为研究对象,基于ARTP诱变技术结合定向筛选以及分子生物学手段,证明了glpK是参与甘油增强妥布霉素杀菌的关键基因,而adhP是参与正丁醇增强妥布霉素杀菌的关键基因。另外还发现甘油/正丁醇增强妥布霉素摄取与细胞膜流动性有关,且甘油可以通过代谢提高ATP与PMF水平促进妥布霉素的摄取。

关键词： ARTP诱变抗生素佐剂金黄色葡萄球菌 glpK adhP

热应激和LPS对鸭卵泡颗粒细胞体外增殖和分泌的影响

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热应激和LPS对鸭卵泡颗粒细胞体外增殖和分泌的影响

作者：黄雪冰仲恺农业工程学院

学位级别：硕士

广东省作为我国的水禽大省,蛋鸭的养殖数量在近年得到快速增长,但是南方高温高湿气候促使环境中的有害细菌繁殖能力增强,其中热应激和LPS浓度升高导致蛋鸭产蛋性能下降。家禽的产蛋性能由卵泡发育决定,而在卵泡发育过程中颗粒细胞起着... 详细信息

广东省作为我国的水禽大省,蛋鸭的养殖数量在近年得到快速增长,但是南方高温高湿气候促使环境中的有害细菌繁殖能力增强,其中热应激和LPS浓度升高导致蛋鸭产蛋性能下降。家禽的产蛋性能由卵泡发育决定,而在卵泡发育过程中颗粒细胞起着重要的作用。推测热应激和LPS可能影响颗粒细胞的功能进而影响蛋鸭的繁殖性能。为探讨热应激及LPS对颗粒细胞影响的机制,本研究在建立体外培养山麻鸭卵泡颗粒细胞模型基础上,分别探讨热应激、LPS以及热应激联合LPS对山麻鸭卵泡颗粒细胞体外增殖和分泌的影响。试验一:热应激对鸭卵泡颗粒细胞体外增殖和分泌的影响。试验设立对照组(39°C)和高温组(41°C、43°C),处理24 h后收集细胞和培养液,利用流式细胞术检测细胞周期、qRT-PCR检测增殖与繁殖相关基因的相对表达量、ELISA检测相关激素的分泌水平。结果显示,热应激致使颗粒细胞阻滞在G1期,下调IGF2、IGFBP2、CyclinD1、CDK6 mRNA的表达量;热应激能促进颗粒细胞P4、E2、ACV的分泌,抑制INH的分泌,同时上调StAR、3β-HSD mRNA的表达量,下调INHβA的表达水平。试验二:LPS对鸭卵泡颗粒细胞体外增殖和分泌的影响。试验设立对照组(不添加LPS)和LPS处理组(浓度分别为250 ng/mL、500 ng/mL、1000 ng/mL、2000 ng/mL),处理24 h后收集细胞和培养液,利用流式细胞术检测细胞周期、qRT-PCR检测增殖与繁殖相关基因的相对表达量、ELISA检测相关激素的分泌水平。结果发现,LPS促使颗粒细胞阻滞在G1期的比例增多,下调IGF2、IGFBP2、CyclinD1、CDK6 mRNA的表达量,上调p27 mRNA的表达量;LPS能促进颗粒细胞P4、E2、ACV的分泌,抑制INH的分泌,且LPS处理组间激素的分泌均呈现剂量依赖性,同时不同程度上调FSHR、3β-HSD mRNA的表达量,下调GnIHR mRNA的表达水平。试验三:热应激联合LPS对鸭卵泡颗粒细胞体外增殖和分泌的影响。试验设立对照组(39°C+0 ng/mL LPS)、LPS组(39°C+2000 ng/mL LPS)、热应激组(43°C+0 ng/mL LPS)及热应激联合LPS组(43°C+2000ng/mL LPS),分别处理12 h和24 h后收集细胞和培养液,利用流式细胞术检测细胞周期、qRT-PCR检测增殖与繁殖相关基因的相对表达量、ELISA检测相关激素的分泌水平、Western Blot检测MAPK信号通路蛋白和繁殖相关蛋白。结果证明,相比单因子处理,联合处理对颗粒细胞体外增殖和分泌都能产生叠加效应。联合处理促使颗粒细胞停滞在G1期的比例相比单因子处理更高,下调IGF2、IGFBP2、CyclinD1、CDK6 mRNA的表达量,上调p27 mRNA的表达量,同时,联合组ERK及p-ERK蛋白的表达水平下降。热应激联合LPS能促进颗粒细胞P4、E2、ACV的分泌,抑制INH的分泌,上调FSHR、StAR、3β-HSD mRNA的表达量,下调CYP19A1 mRNA及蛋白的表达量。热应激、LPS以及热应激联合LPS都能抑制颗粒细胞增殖,其作用机制可能与改变CyclinD1、p27等增殖相关基因的表达水平和MAPK信号通路中ERK蛋白及磷酸化水平有关;都能促进P4、E2、ACV的分泌,抑制INH的分泌,其作用机制可能与改变StAR、3β-HSD、CYP19A1等繁殖相关基因及蛋白的表达水平有关。试验结果不仅为相关科学研究提供了借鉴和参考,还为养鸭生产中防控热应激和LPS危害的技术研发提供了思路和科学依据。

关键词：热应激 LPS 颗粒细胞增殖分泌

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理想收敛的若干研究和推广

理想收敛的若干研究和推广

作者：黄雪冰华侨大学

学位级别：硕士

理想收敛是统计收敛理论中重要的研究内容,本文的主要内容是研究理想I可加性(additive property,缩写为AP)的等价刻画、I-A-统计收敛的刻画以及B(Q,∑)上算子的分解.Kostyrko, Salat和Wilczynski给出了I-收敛与I*-收敛之间的关系与差异... 详细信息

理想收敛是统计收敛理论中重要的研究内容,本文的主要内容是研究理想I可加性(additive property,缩写为AP)的等价刻画、I-A-统计收敛的刻画以及B(Q,∑)上算子的分解.Kostyrko, Salat和Wilczynski给出了I-收敛与I*-收敛之间的关系与差异,并指出,当理想I具有可加性时,二者等价.本文中,我们先在Banach空间X中利用序列的I-收敛与I*收敛给出理想I具有可加性的等价刻画.我们证明了：I-收敛与I*收敛的等价性也意味着理想I具有可加性,以及,I的可加性也等价于I*收敛关于一致收敛运算是封闭的;我们也研究了w-I-收敛、w-I*-收敛与一致w-I*-收敛之间,以及w-I-收敛与收敛之间的关系.对具有可分对偶的Banach空间X,我们证明了,X中有界序列的w-I-收敛与致w-I*-收敛是相互等价的(第二章).接着我们定义了一种新的统计收敛：I-A-统计收敛,并利用l∞上连续凸函数的次微分映射给出其等价的描述;以及研究I-A-统计收敛与I-A-可和性之间的相互关系：对Banach空间中的有界序列{χn},我们证明了,{χn}的I-A-统计收敛等价于I-A-可和性(第三章).最后我们利用向量测度与算子的一一对应关系,首先给出可列可加测度的算子特征：m是有界的有限可加向量测度,U是其对应的算子,则m是可列可加的当且仅当U是w*-范序列连续的;然后由推广的Yosida-Hewitt定理,证明了定义在B(Ω,∑)=span{XA,A∈∑}上的取值于自反空间X的算子可唯一分解成w*-范序列连续算子与纯连续算子之和(第四章).

关键词： I-收敛 AP I-A-统计收敛向量测度

纳米Al_2O_3溶胶复合水性聚苯胺环氧树脂涂层的制备及性能

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高分子材料科学与工程 2018年第11期34卷 130-136页

作者：郭浩杭建忠孙小英金鹿江黄雪冰上海大学纳米科学与技术研究中心上海200444

以γ-缩水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷(GPTMS)为改性剂,对纳米氧化铝溶胶进行改性处理,随后将其分散于聚苯胺/水性环氧树脂中,再经固化剂固化,制成纳米氧化铝溶胶复合涂层。利用电化学交流阻抗、动电位极化曲线等手段分别对水性环氧涂层(e... 详细信息

以γ-缩水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷(GPTMS)为改性剂,对纳米氧化铝溶胶进行改性处理,随后将其分散于聚苯胺/水性环氧树脂中,再经固化剂固化,制成纳米氧化铝溶胶复合涂层。利用电化学交流阻抗、动电位极化曲线等手段分别对水性环氧涂层(epoxy)、纳米氧化铝溶胶改性水性环氧涂层(Al_2O_3/epoxy)、聚苯胺复合水性环氧涂层(PANI/epoxy)以及纳米氧化铝溶胶复合聚苯胺/水性环氧涂层(Al_2O_3/PANI/epoxy)的耐腐蚀性能和力学性能进行了研究。结果表明,Al_2O_3/PANI/epoxy涂层在3.5%NaCl溶液中浸泡15 d后的交流阻抗值为2.87×10~7Ω·cm^2,比epoxy涂层提高了3个数量级,防腐能力最强。该涂层的附着力为0级,硬度为6H,均高于其他涂层。另外,Al_2O_3/PANI/epoxy涂层的SEM照片显示,纳米Al_2O_3粒子与聚苯胺及环氧树脂粘连紧密,无明显的团聚。并发现在涂层与金属界面间出现了致密钝化层。

关键词：纳米Al2O3溶胶聚苯胺水性环氧树脂涂层

L-色氨酸改性氧化石墨烯复合水性环氧树脂涂层的制备及性能

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高分子材料科学与工程 2019年第10期35卷 144-151页

作者：黄雪冰杭建忠孙小英金鹿江郑闪闪上海大学纳米科学与技术研究中心

采用L-色氨酸(L-Trp)为改性剂,对氧化石墨烯(GO)进行改性处理,随后将改性的氧化石墨烯分散于水性环氧树脂中,再经聚酰胺固化剂固化,制得L-色氨酸改性氧化石墨烯复合水性环氧树脂涂层。利用电化学交流阻抗、动电位极化曲线等测试手段分... 详细信息

采用L-色氨酸(L-Trp)为改性剂,对氧化石墨烯(GO)进行改性处理,随后将改性的氧化石墨烯分散于水性环氧树脂中,再经聚酰胺固化剂固化,制得L-色氨酸改性氧化石墨烯复合水性环氧树脂涂层。利用电化学交流阻抗、动电位极化曲线等测试手段分别对水性环氧树脂涂层、氧化石墨烯复合水性环氧树脂涂层以及L-色氨酸改性氧化石墨烯复合水性环氧树脂涂层(L-Trp/GO/epoxy)的耐腐蚀性能进行了研究。结果表明,L-Trp/GO/epoxy涂层在3.5%NaCl溶液中浸泡15 d后的交流阻抗值为2.16×10^7Ω·cm^2,比环氧树脂涂层提高了近103倍,耐腐蚀性能最强。另外,从L-色氨酸改性氧化石墨烯的透射电镜照片发现,经L-Trp改性的GO从多层被剥离为更薄的片材,并均匀分散于水溶液中。L-Trp/GO/epoxy涂层的扫描电镜照片显示,涂层表面平整光滑致密,GO片材与基体树脂粘连紧密,无明显团聚现象。

关键词： L-色氨酸氧化石墨烯水性环氧树脂

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向量测度的算子分解

华侨大学学报（自然科学版） 2014年第2期35卷 238-240页

作者：黄雪冰施慧华华侨大学数学科学学院福建泉州362021

利用向量测度与算子的一一对应关系,给出可列可加测度的算子表示,并进一步由推广的YosidaHewitt定理证明定义在B(Ω,Σ)=span{χA,A∈Σ}上的取值于自反空间X的算子,可唯一分解成w*-范序列连续算子与纯连续算子之和.

关键词： ω*-范序列连续算子纯连续算子向量测度 Yosida-Hewitt定理

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面向市场　立足资源优势培育主导产业

新疆社会科学 1997年第6期 30-35页

作者：吴筠程一航黄雪冰新疆维吾尔自治区统计局

耐高温双酚芴改性有机硅环氧树脂的合成与表征

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高分子材料科学与工程 2014年第11期30卷 26-30页

作者：钟元伟彭锦雯覃洁黄雪冰邓卫星桂林理工大学有色金属及材料加工新技术教育部重点实验室材料科学与工程学院广西桂林541004

通过双酚芴与二氯硅烷交替共聚,以环氧基团封端,制备含芴有机硅环氧树脂(EGF),并研究不同原料配比、催化剂浓度及反应时间等条件对环氧值的影响。采用红外、核磁、凝胶色谱、差示扫描量热、热重及盐酸-丙酮滴定等方法进行结构表征和性... 详细信息

通过双酚芴与二氯硅烷交替共聚,以环氧基团封端,制备含芴有机硅环氧树脂(EGF),并研究不同原料配比、催化剂浓度及反应时间等条件对环氧值的影响。采用红外、核磁、凝胶色谱、差示扫描量热、热重及盐酸-丙酮滴定等方法进行结构表征和性能测试。结果表明,当双酚芴与环氧氯丙烷的摩尔比为2∶10,NaOH质量分数为50%,开闭环反应时间为4h时,合成工艺最佳。按此工艺合成EGF,其数均、重均相对分子质量分别为2237和2760,多分散系数为1.23;EGF熔点为186.6℃;其初始分解温度为363.8℃,比双酚A环氧E-51高90.3℃,比双酚芴环氧(DGEBF)高45.4℃,较两者表现出更为优异的耐热性能;EGF较E-51具有更好的耐吸湿性能。

关键词：双酚芴有机硅环氧树脂耐高温树脂

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西安居民文化需求调研分析

中国统计 2012年第10期27卷 24-26页

作者：李利民田禾黄雪冰西安市统计局

文化产业是西安的特色主导产业。为深入了解西安居民当前的文化需求，繁荣西安文化消费市场，促进西安文化产业快速发展，市统计局近期利用计算机辅助电话访问系统，开展了文化产品及服务需求状况和公共文化设施需求状况的系列调查。

关键词：文化需求西安调研分析居民特色主导产业文化消费市场公共文化设施文化产业