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胚胎干细胞源性表皮干细胞在腹腔微环境中分化潜能的初步研究

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中山大学学报（医学科学版） 2004年第3期25卷 204-207页

作者：程树军黄锦桃李海标中山大学基础医学院组胚教研室广东广州510080

【目的】探讨胚胎干细胞源性的表皮干细胞在腹腔微环境中的分化情况,为研究其在不同微环境中的分化稳定性和全能性及寻找新的皮肤工程种子细胞奠定基础?【方法】小鼠ES E14细胞与人羊膜共培养4～5 d,定向诱导其分化为表皮样干细胞克隆... 详细信息

【目的】探讨胚胎干细胞源性的表皮干细胞在腹腔微环境中的分化情况,为研究其在不同微环境中的分化稳定性和全能性及寻找新的皮肤工程种子细胞奠定基础?【方法】小鼠ES E14细胞与人羊膜共培养4～5 d,定向诱导其分化为表皮样干细胞克隆,它们呈β1整合素?CK15和CK19阳性,移植入裸鼠腹腔?对移植后细胞的分化情况进行形态学和CEA?CK10?CK18?CK19免疫组织化学观察?【结果】小鼠胚胎干细胞源性表皮样干细胞在裸鼠腹腔内1～4周,细胞分化为由单层或复层上皮样细胞构成的管状和泡状结构?种植5周后,除上述结构外,可见角化复层扁平上皮?毛囊样?汗腺样及皮脂腺样等结构?免疫组化表明汗腺样结构分别呈CEA和CK18阳性,而角化复层扁平上皮的基底层细胞分别呈CK19和CK10阳性?【结论】初步结果表明小鼠胚胎干细胞源性表皮样干细胞在腹腔微环境下同样具有分化为角化复层上皮?毛囊样?汗腺样和皮脂腺样结构的潜能?

关键词：胚胎干细胞表皮干细胞腹腔微环境细胞分化组织工程细胞形态学

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人原始生殖细胞分离培养的初步研究

中山大学学报（医学科学版） 2003年第4期24卷 325-328页

作者：撒亚莲黄锦桃李海标中山大学中山医学院组织胚胎学教研室广东广州510080

[目的]探讨分离培养人原始生殖细胞的最佳条件。[方法]用胰蛋白酶消化5～9周人流组织中的人胚生殖嵴,获取人原始生殖细胞。以小鼠胚胎成纤维细胞作饲养层,在高糖DMEM培养基中添加10μmol/L福司克林(forskolin)和5～μg/L碱性成纤维细胞... 详细信息

[目的]探讨分离培养人原始生殖细胞的最佳条件。[方法]用胰蛋白酶消化5～9周人流组织中的人胚生殖嵴,获取人原始生殖细胞。以小鼠胚胎成纤维细胞作饲养层,在高糖DMEM培养基中添加10μmol/L福司克林(forskolin)和5～μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的培养液中培养、传代,并对子代细胞进行碱性磷酸酶活性检测和体外分化实验。[结果]原代培养时形成许多大小不等,形态各异的由人原始生殖细胞组成的集落,约5～7d传代。传代后,集落生长,变大。细胞培养到第七代,检测碱性磷酸酶染色为强阳性,体外分化实验有拟胚体形成。[结论]人原始生殖细胞可以用胰蛋白酶消化分离培养。用高糖DMEM培养基,添加forskolin和bFGF有利于人原始生殖细胞增殖。体外分化实验初步证实人原始生殖细胞具有多向分化潜能。

关键词：人原始生殖细胞细胞培养胰蛋白酶消化法福司克林碱性成纤维细胞生长因子高糖DMEM培养基

三七总皂甙对成年大鼠视网膜节细胞再生的影响

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中山大学学报（医学科学版） 2004年第4期25卷 319-321页

作者：项平黄锦桃李卉李海标中山大学中山医学院组织胚胎学教研室广东广州510080

【目的】探讨三七总皂甙(tPNS)对成年大鼠视网膜节细胞(RGCs)再生的影响。【方法】成年SD大鼠近端切断视神经(ON)并缝接自体一段坐骨神经(AG),腹腔注射tPNS。动物随机分为AG+溶剂(生理盐水)组;AG+tPNS组;量效关系组。用粒蓝逆行标记再生... 详细信息

【目的】探讨三七总皂甙(tPNS)对成年大鼠视网膜节细胞(RGCs)再生的影响。【方法】成年SD大鼠近端切断视神经(ON)并缝接自体一段坐骨神经(AG),腹腔注射tPNS。动物随机分为AG+溶剂(生理盐水)组;AG+tPNS组;量效关系组。用粒蓝逆行标记再生的RGCs,在荧光镜下观察视网膜平铺片再生RGCs的数量变化。【结果】①AG+溶剂组术后3和4周,每个视网膜再生的节细胞数分别为698±111和568±107;②在上述两个时间点AG+tPNS组每个视网膜再生的节细胞数分别为1656±135和1329±144约为对照组的2倍,P<0.05。【结论】三七总皂甙可促进视网膜节细胞再生。

关键词：三七总皂甙成年大鼠况网膜节细胞再生 tPNS

NOD/SCID孕鼠淋巴细胞表型检测和NK细胞活性分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第10期25卷 781-785页

作者：林羿王通狄静芳曾山黄锦桃冯铮曾耀英暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632 中山大学组织学与胚胎学教研室

目的观察NOD/SCID小鼠免疫状况和生育力特征,并分析NK细胞亚群对同基因交配组合NOD/SCID×NOD/SCID妊娠结局的影响。方法采用流式细胞术对未孕和孕13.5 d的NOD/SCID小鼠进行淋巴细胞表型分析,并系统地观察和比较NOD/SCID×NOD/SCID和BAL... 详细信息

目的观察NOD/SCID小鼠免疫状况和生育力特征,并分析NK细胞亚群对同基因交配组合NOD/SCID×NOD/SCID妊娠结局的影响。方法采用流式细胞术对未孕和孕13.5 d的NOD/SCID小鼠进行淋巴细胞表型分析,并系统地观察和比较NOD/SCID×NOD/SCID和BALB/c×BALB/c小鼠的生育力特征。分别采用多聚次黄苷酸-胞苷酸(polyinosinic-polycytidylic acid,poly I∶C)或抗asialoGM1单抗(anti-asialo GM1)刺激或抑制NK细胞活性,并分别观察这些因素对妊娠结局的影响。结果与对照组NOD/SCID小鼠相比,poly I∶C处理组NOD/SCID×NOD/SCID小鼠平均每窝产仔数增多,而注射抗asialo GM1单抗则使胚胎吸收率增高,进而平均每窝产仔数显著减少。结论在NOD/SCID小鼠孕期母-胎界面保持适当水平的NK细胞活性对妊娠结局有利。

关键词：流产动物模型细胞表面标志物免疫耐受

含小鼠表皮干细胞的真皮替代物体内移植追踪实验

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中华整形外科杂志 2005年第6期21卷 452-456页

作者：林羿李海标黄锦桃中山大学组织学胚胎学教研室

目的追踪种植于真皮替代物中的小鼠表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)移植到同基因受者体内后的转归。方法在体外诱导胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)分化为ESCs,采用荧光染料Hoechst33342染色后,种植到含有成纤维细胞的... 详细信息

目的追踪种植于真皮替代物中的小鼠表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)移植到同基因受者体内后的转归。方法在体外诱导胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)分化为ESCs,采用荧光染料Hoechst33342染色后,种植到含有成纤维细胞的胶原-明胶海绵真皮替代物内,移植到与ES细胞同基因的129/J小鼠皮下,采用HE染色、免疫组化和Van Gieson染色等观察这些细胞的存活和分化情况。结果移植后至少3周内仍可以在荧光显微镜下清晰观察到ESCs。这些细胞能够存活并分化形成毛囊样、腺管样结构,形成与天然真皮相似的结构。在这些结构中有CD29(整合素β1亚单位)和细胞角蛋白18等表皮干细胞特异性标志物的表达。在移植后至少10周内未观察到明显排斥反应或严重毒副反应。结论ESCs能够在所构建的真皮支架内存活并分化形成毛囊样和腺管样结构,提示这些来源于ES细胞的ESCs可以作为种子细胞,用于研究制备含有皮肤附属器的真皮替代物。

关键词：细胞表面标志物生物材料皮肤附属器真皮替代物干细胞

成年大鼠和恒河猴骨髓基质干细胞的体外培养及鉴定

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神经解剖学杂志 2009年第5期25卷 506-510页

作者：冯英谢富康黄锦桃中山大学中山医学院组织学与胚胎学教研室广州510080

本实验目的是比较成年大鼠和恒河猴骨髓基质干细胞(MSCs)原代培养的细胞形态和生长状况的差异。分别分离成年大鼠和恒河猴的骨髓,密度梯度离心法分离MSCs,传代培养。在细胞生长过程中显微镜观察两种细胞形态及生长状况的差异,并分别进... 详细信息

本实验目的是比较成年大鼠和恒河猴骨髓基质干细胞(MSCs)原代培养的细胞形态和生长状况的差异。分别分离成年大鼠和恒河猴的骨髓,密度梯度离心法分离MSCs,传代培养。在细胞生长过程中显微镜观察两种细胞形态及生长状况的差异,并分别进行成脂及成骨诱导。结果表明,在相同的培养条件下,成年大鼠和恒河猴MSCs原代培养细胞形态比较接近,但细胞原代及传代生长状况有差异。大鼠MSCs原代培养及细胞冻存后复苏的生长均快于猴的MSCs。两种动物的细胞都可以向脂肪和成骨细胞分化。猴的MSCs因其生长缓慢和细胞形态的明显改变,需改良其培养条件,才能用于进一步的研究。

关键词：骨髓基质干细胞培养鉴定

胚胎干细胞源性表皮干细胞对小鼠全层皮肤缺损的修复

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解剖学报 2007年第3期38卷 296-299页

作者：刘爱军黄锦桃李海标中山大学基础医学院组织学胚胎学教研室广州510080

目的研究129小鼠胚胎干细胞(ES cell)源性表皮干细胞在同种小鼠全层皮肤缺损的生长和分化,探讨ES细胞源性表皮干细胞对全层皮肤缺损的修复作用。方法以生物膜为载体,将羊膜诱导后带有核荧光标记的ES细胞源性表皮干细胞直接覆盖小鼠全层... 详细信息

目的研究129小鼠胚胎干细胞(ES cell)源性表皮干细胞在同种小鼠全层皮肤缺损的生长和分化,探讨ES细胞源性表皮干细胞对全层皮肤缺损的修复作用。方法以生物膜为载体,将羊膜诱导后带有核荧光标记的ES细胞源性表皮干细胞直接覆盖小鼠全层皮肤缺损创面。术后1-8周连续取材,HE染色,β1整合素、CK15、CK19、CK10、CEA免疫组织化学和荧光双标显色。结果术后2周,创面完全长合,较厚的新生皮覆盖创面,基底层细胞增生,形成许多大小不一的细胞柱伸向真皮层,真皮层中可见管腔样结构,免疫荧光双标显示,1-3周新生表皮中可见核标记的细胞呈β1整合素、CK15阳性,真皮层中带有核标记的管状或泡状结构呈β1整合素、CK15阳性;4周后新生表皮开始变薄,基底层细胞呈CK19、CK10阳性,汗腺样结构呈CEA阳性,6-8周新生表皮下可见毛囊样、汗腺样、皮脂腺样等结构。结论ES细胞源性表皮干细胞植入小鼠全层皮肤缺损创面,可修复缺损的表皮,并在其下真皮层内具有分化为汗腺样、毛囊样和皮脂腺样结构的潜能。

关键词：胚胎干细胞表皮干细胞定向分化皮肤附属结构免疫组织化学人羊膜小鼠

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠骨髓间质干细胞增殖的影响

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中山大学学报（医学科学版） 2004年第6期25卷 508-511页

作者：刘爱军项平黄锦桃李海标中山大学中山医学院组胚教研室广东广州510080

【目的】研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠骨髓基质干细胞(MSC)增殖的影响。【方法】用α-MEM冲洗骨髓腔,收集骨髓细胞悬液,接种在塑料培养瓶中,经体外扩增、纯化,观察其生长特性,用免疫组织化学SABC法检测波形蛋白和纤粘连蛋白... 详细信息

【目的】研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠骨髓基质干细胞(MSC)增殖的影响。【方法】用α-MEM冲洗骨髓腔,收集骨髓细胞悬液,接种在塑料培养瓶中,经体外扩增、纯化,观察其生长特性,用免疫组织化学SABC法检测波形蛋白和纤粘连蛋白的表达,并研究不同浓度bFGF对MSC生长曲线和克隆形成率的影响。【结果】原代培养时形成由基质干细胞组成的细胞集落,细胞集落14d时接近融合,传代后细胞体积变大,约5～7d传代1次;免疫组化显示MSC呈波形蛋白阳性,而纤粘连蛋白阴性。浓度10ng/mL和20ng/mLbFGF组的MSC的细胞数和克隆形成率比5ng/mLbFGF组和对照组(无bFGF)明显增加,具有高度显著性(P<0.01)。【结论】bFGF可明显促进MSC的增殖。

关键词： FGF 增殖大鼠集落克隆形成率纤粘连蛋白碱性成纤维细胞生长因子细胞体积传代纯化

霍乱毒素及妊娠对金黄地鼠视网膜节细胞再生的作用

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解剖学杂志 2011年第4期34卷 490-492,499页

作者：李飞黄锦桃李海标南方医科大学附属南海医院神经内科佛山528200 中山大学基础医学院组织学和胚胎学教研室广州510080

目的：观察霍乱毒素（CTx）及妊娠对成年金黄地鼠视神经扎断后视网膜节细胞（RGCs）轴突再生的促进作用。方法：确定成年金黄地鼠交配3d后，扎断视神经（ON）近端，玻璃体内注射CTx。动物随机分为实验组和对照组：对照组为单纯扎断ON为... 详细信息

目的：观察霍乱毒素（CTx）及妊娠对成年金黄地鼠视神经扎断后视网膜节细胞（RGCs）轴突再生的促进作用。方法：确定成年金黄地鼠交配3d后，扎断视神经（ON）近端，玻璃体内注射CTx。动物随机分为实验组和对照组：对照组为单纯扎断ON为损伤组、损伤PBS组；实验组分为CTx组与妊娠后扎断ON妊娠损伤组与妊娠CTx组。术后动物存活3周。用荧光金逆行标记再生的视网膜节细胞（RGCs），在荧光镜下观察视网膜平铺片再生RGCs的数量变化，并比较实验组各组再生RGCs的周长。结果：CTx组、妊娠损伤组、妊娠CTx组视网膜再生RGCs平均数比损伤组及PBS组增加，差异具有统计学意义。妊娠CTx组比CTx组、妊娠损伤组视网膜再生RGCs平均数增加。实验组各组再生的RGCs周长相比差异无统计学意义。结论：妊娠及玻璃体注入CTx具有促进视神经扎断后视网膜节细胞轴突再生的作用，两者有协同作用，各组再生的RGCs大小无明显差别。

关键词：霍乱毒素妊娠视网膜节细胞轴突再生金黄地鼠